Th17/Treg細(xì)胞在乙肝肝硬化中作用研究

張 靜

(濮陽(yáng)市第三人民醫(yī)院，河南 濮陽(yáng) 457000)

Th17/Treg細(xì)胞在乙肝肝硬化中作用研究

張 靜

(濮陽(yáng)市第三人民醫(yī)院，河南 濮陽(yáng) 457000)

目的 分析乙肝肝硬化患者外周血Th17/Treg平衡體系在肝硬化過(guò)程中的作用。方法 選取120例乙肝病毒感染者及30例體檢健康者(對(duì)照組)臨床資料，乙肝病毒感染者按照乙肝病程進(jìn)展分為無(wú)癥狀攜帶組(ASC，24例)、慢性乙型肝炎組(CHB，48例)、乙肝性肝硬化組(LC，30例)、乙型肝炎相關(guān)性肝癌組(HCC，18例)，檢測(cè)五組研究對(duì)象外周血Th17、Treg細(xì)胞表達(dá)率及比值，并比較肝功能指標(biāo)ALT、AST、TBIL水平。結(jié)果 乙肝病毒感染者Th17、Treg細(xì)胞表達(dá)率均高于對(duì)照組，但ASC組與健康組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其他三組均與該兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Th17表達(dá)率隨著病程進(jìn)展先升高后下降，LC組最高，Treg細(xì)胞表達(dá)率則隨著病程進(jìn)展逐漸上升，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Th17/Treg比值隨著病程進(jìn)展逐漸增高后下降，且在LC組達(dá)到最高值，與CHB組、HCC組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；ALT、TBIL均隨著病程進(jìn)展先升高后下降，AST含量則隨著病程進(jìn)展依次增高，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 Th17、Treg及Th17/Treg平衡體系在HBV感染相關(guān)肝臟疾病中發(fā)揮重要作用，其平衡失調(diào)可能與慢性乙肝進(jìn)展關(guān)系密切，尤其可作為乙肝肝硬化患者檢測(cè)指標(biāo)之一。

乙肝；Th17/Treg細(xì)胞；肝硬化

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧分析2013年3月—2015年7月濮陽(yáng)市第三人民醫(yī)院確診的120例HBV感染者臨床資料，按照病理過(guò)程分組。選擇同期該院體檢健康者30例為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者經(jīng)確診前未服用抗病毒藥物及其他治療；確診標(biāo)準(zhǔn)參照2010年國(guó)家發(fā)布的《慢性乙型肝炎防治指南》[3]；排除標(biāo)準(zhǔn)：排除HBV病毒引起的其他類型肝炎；患有嚴(yán)重的心、腎及全身性疾病患者；有認(rèn)知障礙及不合作者。HBV感染者按照病理過(guò)程分組，其中無(wú)癥狀攜帶者(ASC)組24例，男11例，女13例，年齡(37.5±10.6)歲；慢性乙型肝炎(CHB)組48例，男28例，女20例，年齡(35.9±11.4)歲；乙肝性肝硬化(LC)組30例，男14例，女16例，年齡(40.3±9.8)歲；乙型肝炎相關(guān)性肝癌(HCC)組18例，男10例，女8例，年齡(42.3±10.2)歲； 對(duì)照組男13例，女17例，年齡(36.7±10.4)歲。五組研究對(duì)象性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 囑患者晚上十點(diǎn)后空腹至次日清晨，抽取外周靜脈血約5 ml，緩慢注入含有肝素鈉抗凝管，混勻，待用。

1.2.2 外周血Th17/Treg培養(yǎng) 取300 μl外周血置入離心管，并加入10%胎牛血清PRMI1640培養(yǎng)基900 μl，依次加入蛋白酶抑制劑、離子霉素、佛波酯，用巴氏吸管吹打均勻。完成后，將上述離心管液體倒入T25培養(yǎng)瓶中，于恒溫培養(yǎng)箱中，37 ℃、濃度5%CO2培養(yǎng)10 h。

1.2.3 Th17、Treg細(xì)胞流式檢測(cè) 培養(yǎng)后的細(xì)胞進(jìn)行固定破膜處理，后加入酶標(biāo)IL-17抗體，離心、沉淀，最后一次離心后孵育30 min，用磷酸鹽(PBS)洗滌，移入流式細(xì)胞管中，應(yīng)用流式細(xì)胞儀(美國(guó)Becton-Dickson公司)測(cè)定外周血Th17、Treg表達(dá)率及比值。

1.2.4 肝功能測(cè)定 采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)外周血丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽紅素(TBIL)等含量。

2 結(jié)果

2.1 外周血Th17、Treg細(xì)胞表達(dá)率及Th17/Treg比值 HBV感染者與對(duì)照組比較，Th17、Treg表達(dá)率均高于對(duì)照組，ASC組與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其他三組與對(duì)照組、ASC組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Th17細(xì)胞表達(dá)率隨著病程進(jìn)展增高后下降，組別依次為ASC組、CHB組、LC組、HCC組，且組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Treg細(xì)胞表達(dá)率隨著病程進(jìn)展依次增高，組間差異顯著；Th17/Treg比值依次在乙肝患者中隨病程進(jìn)展逐漸增高，且LC組達(dá)到最高值后下降，與CHB、HCC兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 外周血Th17、Treg細(xì)胞表達(dá)率及

注：組間比較，1)P<0.05。

2.2 ALT、AST、TBIL水平比較 HBV感染者與對(duì)照組比較，ALT、AST、TBIL指標(biāo)均高于對(duì)照組，其中ASC組與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其他三組與對(duì)照組、ASC組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；ALT及TBIL指標(biāo)隨著病程進(jìn)展升高后下降，組別依次為ASC組、CHB組、LC組、HCC組，且組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；AST指標(biāo)隨著病程進(jìn)展依次增高，且組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 血清ALT、AST、TBIL水平比較

注：組間比較，1)P<0.05。

3 討論

乙肝是嚴(yán)重威脅人類健康的傳染性疾病，隨著HBV感染者人數(shù)上升，乙肝疾病病程發(fā)展已引起全球關(guān)注，目前HBV如何進(jìn)行性感染肝臟引起功能紊亂，機(jī)制尚不明確，眾多研究認(rèn)為，乙肝的發(fā)生與機(jī)體免疫功能改變有關(guān)[4]。當(dāng)人體遭受HBV感染后，HBV并不直接損害肝臟細(xì)胞，而是通過(guò)寄宿正常肝細(xì)胞，在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并表達(dá)相關(guān)抗原，形成含有自身組織蛋白的抗原，當(dāng)機(jī)體免疫系統(tǒng)被激活后，機(jī)體在清除HBV病毒的同時(shí)也產(chǎn)生了大量針對(duì)宿主細(xì)胞的炎性因子，長(zhǎng)期的炎性環(huán)境導(dǎo)致肝組織纖維化，而發(fā)生乙肝性肝硬化[5]。近期，有文獻(xiàn)提出，Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞含量及其平衡機(jī)制與肝硬化、肝衰竭、肝癌等病理變化緊密相關(guān)，Th17、Treg細(xì)胞均屬于CD4+亞群的T細(xì)胞，前者通過(guò)分泌促炎細(xì)胞因子IL-17誘導(dǎo)自身免疫炎癥疾病，加重肝臟炎性程度及纖維化，后者則通過(guò)分泌IL-10及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)防止自身免疫疾病造成的損害，有效調(diào)節(jié)機(jī)體免疫機(jī)制[6]。有研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)內(nèi)環(huán)境缺乏IL-6時(shí)，CD4+T細(xì)胞分化為Treg細(xì)胞，只有在TGF-β和IL-6協(xié)同作用下，CD4+T細(xì)胞分化為Th17細(xì)胞，兩者之間存在明顯的相反關(guān)系，當(dāng)平衡被打后，Th17的促炎作用及Treg的維持免疫功能均遭到破壞[7]。

本研究中，LC組Th17/Treg比值明顯高于其他乙肝患者，而HCC組比值最低， ASC組患者檢查與對(duì)照組差異不顯著，隨病程發(fā)展，肝功能明顯遭到破壞，尤其是在肝硬化期，Th17細(xì)胞含量較其他組高，促進(jìn)了肝臟纖維化，加重肝硬化程度，表明機(jī)體在免疫應(yīng)答時(shí)，既清除病毒又同時(shí)導(dǎo)致肝細(xì)胞損害；繼而肝硬化轉(zhuǎn)為肝癌后，Th17、Treg細(xì)胞含量處于波動(dòng)狀態(tài)，但比值最小，表明可能Treg高度分化，抑制了機(jī)體免疫應(yīng)答，降低機(jī)體對(duì)HBV清除率，同時(shí)肝細(xì)胞已經(jīng)遭到不可逆損害，AST含量達(dá)到最高，而ALT、TBIL較肝硬化期略有下降，此結(jié)果同婁鳴等[8]研究結(jié)果類似，由肝炎發(fā)展到肝硬化，最后到肝癌，機(jī)體免疫反應(yīng)由炎性反應(yīng)逐漸過(guò)渡到免疫抑制，

綜上所述，Th17/Treg平衡體系在HBV感染相關(guān)肝臟機(jī)制中發(fā)揮重要作用，Th17/Treg失衡可能與CHB病程進(jìn)展密切相關(guān)，可作為檢測(cè)CHB病情的指標(biāo)之一，本研究也有局限性，尚未研究該平衡體系與HBV-DNA的關(guān)系，其次選擇的人群年齡較為集中，可能對(duì)結(jié)果造成影響。

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[責(zé)任編輯：張亞光]

2016-11-14

張靜(1974-)，女，河南省南樂(lè)縣人，本科，主管技師，從事臨床檢驗(yàn)工作。

R 446.11

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1008-9276(2017)04-0360-03