中華絨螯蟹家系規(guī)?；瘶?gòu)建初探

鄧燕飛，夏愛(ài)軍，潘建林，李躍華，柏如發(fā)，朱清順

（1.江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，江蘇 南京 210017；2.江蘇省農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護(hù)與利用平臺(tái)，江蘇 南京 210014）

中華絨螯蟹家系規(guī)?；瘶?gòu)建初探

鄧燕飛1，2，夏愛(ài)軍1，潘建林1，李躍華1，柏如發(fā)1，朱清順1

（1.江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，江蘇 南京 210017；2.江蘇省農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護(hù)與利用平臺(tái)，江蘇 南京 210014）

從中華絨螯蟹蘇南養(yǎng)殖群體、長(zhǎng)江干流野生群體和蘇北里下河養(yǎng)殖群體中選擇100組大規(guī)格親蟹（雌蟹175 g以上，雄蟹250 g以上），進(jìn)行家系規(guī)模化構(gòu)建，成功定向構(gòu)建家系169個(gè)，其中全同胞家系25個(gè)，半同胞家系144個(gè)，家系構(gòu)建成功率84.5%，選擇40個(gè)發(fā)育良好的家系進(jìn)行育苗，最終獲得23個(gè)家系蟹苗。

中華絨螯蟹；大規(guī)格；家系規(guī)?；瘶?gòu)建

中華絨螯蟹俗稱河蟹，目前河蟹產(chǎn)業(yè)年產(chǎn)值已超500億，已成為我國(guó)重要的水產(chǎn)支柱產(chǎn)業(yè)[1]。河蟹種質(zhì)混雜和退化嚴(yán)重已是不爭(zhēng)的事實(shí)[2-3]，積極開(kāi)展河蟹遺傳育種工作，選育出優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)抗逆性強(qiáng)的新品種，實(shí)現(xiàn)保護(hù)優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源和滿足生產(chǎn)上的良種需要，以確保我國(guó)河蟹產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展[4-7]。家系選育是一種有效的遺傳育種手段，目前已成功運(yùn)用于中國(guó)對(duì)蝦、羅氏沼蝦等甲殼動(dòng)物新品種選育[8-9]，長(zhǎng)江水系、遼河水系河蟹已開(kāi)展家系選育[10-14]，筆者基于2008年成功突破長(zhǎng)江水系大規(guī)格河蟹家系土池定向構(gòu)建，2012年分別選擇來(lái)源不同的長(zhǎng)江水系河蟹，探索大規(guī)格河蟹的家系規(guī)?；瘶?gòu)建，至2013年2月26日，總計(jì)成功定向構(gòu)建家系169個(gè)，其中全同胞家系25個(gè)，半同胞家系144個(gè)，家系構(gòu)建成功率84.5%，選擇其中40個(gè)胚胎發(fā)育良好的家系進(jìn)行育苗，最終獲得23家系蟹苗?，F(xiàn)將大規(guī)格親蟹規(guī)模化家系構(gòu)建進(jìn)行總結(jié)，為今后開(kāi)展河蟹遺傳育種提供新的遺傳材料和技術(shù)積累。

1 材料與方法

1.1 親蟹的選擇和標(biāo)記

2012年11 月，外部形態(tài)特征參照GB/T 19783-2005中華絨螯蟹，從長(zhǎng)江水系河蟹蘇南養(yǎng)殖群體、長(zhǎng)江干流野生群體和蘇北里下河養(yǎng)殖群體中，選擇體質(zhì)健壯、無(wú)病無(wú)傷、性腺發(fā)育良好的大規(guī)格河蟹作為家系構(gòu)建的親蟹，雌蟹175 g以上，雄蟹250 g以上，雌雄比例2∶1（見(jiàn)表1）。用扎帶穿過(guò)印有字母和數(shù)字的白皮管固定在河蟹螯足基部，對(duì)不同來(lái)源的親蟹進(jìn)行物理標(biāo)記。

1.2 家系構(gòu)建設(shè)施

定制特殊的連體長(zhǎng)網(wǎng)箱作為家系構(gòu)建設(shè)施，網(wǎng)箱設(shè)計(jì)為兩行，每行各50個(gè)，計(jì)100個(gè)網(wǎng)箱隔間（規(guī)格0.6 m×0.6 m×1.5 m），每個(gè)網(wǎng)箱隔間設(shè)有獨(dú)立的箱蓋。長(zhǎng)網(wǎng)箱用竹竿和鐵絲固定架設(shè)于面積為2×667 m2的土池中部，網(wǎng)箱底部用磚塊固定與池底相接。

表1 2012年構(gòu)建長(zhǎng)江水系河蟹家系親蟹來(lái)源情況

1.3 家系規(guī)?；瘶?gòu)建

親蟹入池前7 d，往土池注入0.5 m深、用80目篩絹過(guò)濾的鹽度為22左右的海水，用50 g/m2含有效氯30%左右的漂白粉進(jìn)行消毒。親蟹經(jīng)20 g/m3甲醛消毒30 min后，各群體內(nèi)親蟹按♀∶♂=2∶1進(jìn)行配組，做好配組記錄，將每組親蟹放入網(wǎng)箱隔間中，進(jìn)行強(qiáng)化培育和交配。

1.4 抱卵蟹的越冬

2012年12月22日抽干池水，將抱卵雌蟹和完成配對(duì)的雄蟹移出網(wǎng)箱，未抱卵雌蟹繼續(xù)留箱配對(duì)。至2013年2月26日抽干池水，移除雄蟹，雌蟹原池越冬，注入經(jīng)消毒鹽度為22左右的海水，根據(jù)氣溫變化逐漸加高水位并配備水車式增氧機(jī)，加強(qiáng)越冬期的水質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)管理，確保抱卵蟹的越冬成活率。

1.5 家系的定向繁育準(zhǔn)備

采用80目的篩絹網(wǎng)縫制成一個(gè)特殊網(wǎng)隔，可將面積約0.5×667 m2的土池分割為2列共40個(gè)相連的育苗隔段，每個(gè)隔斷規(guī)格約為3 m×3 m。網(wǎng)隔底部埋入池底和池壁，網(wǎng)隔上部用鐵絲穿引固定。每個(gè)育苗隔段配備3～5個(gè)充氣頭，氣頭貼近池底?！胺庞住鼻?0 d，注入用80目篩絹過(guò)濾的鹽度為22左右的海水，有效水深1.5 m，用50 g/m3含有效氯30%的漂白粉進(jìn)行消毒，待余氯消失后，按說(shuō)明書施用生物有機(jī)肥并接種富含小球藻不帶原生動(dòng)物的“肥水”，使池水略帶茶色。

1.6 家系的定向繁育

2013年4月19日，選擇活力強(qiáng)的、胚胎發(fā)育同步的抱卵蟹40只，按照1個(gè)育苗隔段放1只抱卵蟹的原則，將抱卵蟹裝籠進(jìn)行定向“放幼”。“放幼”結(jié)束后移出雌蟹。Z1—Z2不喂料，Z2—大眼幼體淡化前全程投喂輪蟲，每天根據(jù)吃食情況加減輪蟲投喂量，同時(shí)控制好水質(zhì)和增氧。

1.7 家系的淡化

燈光誘捕大眼幼體后，放入40目的篩絹網(wǎng)箱（規(guī)格1.5 m×1.5 m×1.5 m），按照1個(gè)網(wǎng)箱放1個(gè)家系大眼幼體的原則進(jìn)行淡化，淡化期間投喂輪蟲和淡水枝角類。

2 結(jié)果

2.1 家系規(guī)?；瘶?gòu)建

2012年12月22日，將抱卵雌蟹移出網(wǎng)箱原池越冬，未抱卵雌蟹繼續(xù)留箱配對(duì)，至2013年2月26日將抱卵雌蟹移出網(wǎng)箱，經(jīng)統(tǒng)計(jì)共成功定向構(gòu)建家系169個(gè)，其中全同胞家系25個(gè)，半同胞家系144個(gè)，家系構(gòu)建成功率84.5%。

2.2 抱卵蟹的越冬

前后共選擇164只帶有標(biāo)記、附肢齊全、活力強(qiáng)的抱卵蟹在交配池原池越冬，至2013年4月19日共獲活力強(qiáng)的、卵塊發(fā)育良好的抱卵蟹124只，越冬成活率達(dá)75.6%，其中蘇南養(yǎng)殖群體的越冬成活率最高達(dá)83.2%，不同來(lái)源親蟹越冬成活具體情況見(jiàn)表2。

表2 不同來(lái)源親蟹越冬成活率比較

2.3 家系的定向繁育

40個(gè)育苗隔斷中的大眼幼體經(jīng)燈光誘后，根據(jù)產(chǎn)苗量最終選用23個(gè)家系淡化出苗（選擇各家系產(chǎn)苗量2.2萬(wàn)尾以上，其中全同胞家系16個(gè)，半同胞家系7個(gè)），家系產(chǎn)苗量最多的達(dá)22.4萬(wàn)尾，產(chǎn)苗量最少的為2.2萬(wàn)尾，不同家系產(chǎn)苗情況見(jiàn)表3。

3 討論

3.1 家系的規(guī)?；瘶?gòu)建

3.1.1 親蟹的標(biāo)記 自2008年開(kāi)始構(gòu)建河蟹家系以來(lái)，筆者先后采用不同顏色繩帶、不同顏色扎帶、扎帶與印有數(shù)字和字母的白皮管相結(jié)合進(jìn)行親蟹標(biāo)記，從歷年的使用情況來(lái)看，此次標(biāo)記方法最為準(zhǔn)確有效，但操作上仍存在不當(dāng)之處，一是每只蟹只標(biāo)記了一只螯足，導(dǎo)致個(gè)別親蟹標(biāo)記的螯足脫落后無(wú)法辨認(rèn)。二是扎帶扣好后，有的扎帶末端留的太長(zhǎng)，影響螯足活動(dòng)，特別是親蟹取食。

表3 家系產(chǎn)苗情況（單位萬(wàn)尾）

3.1.2 配對(duì)設(shè)施 采用連體網(wǎng)箱作為家系規(guī)?；瘶?gòu)建的配對(duì)場(chǎng)所，且箱底與池底相接，使得每個(gè)隔間盡可能模擬土池環(huán)境，與小土坑[10]相比，占地面積小，而與單個(gè)網(wǎng)籠[10]相比活動(dòng)空間更大。連體網(wǎng)箱把所有親蟹集中在一起，方便隨時(shí)檢查親蟹攝食、配對(duì)和抱卵情況，若用育苗隔段作為交配設(shè)施雖活動(dòng)空間大，但不方便進(jìn)行觀察親蟹活動(dòng)情況。每個(gè)網(wǎng)箱隔間盡管有獨(dú)立的箱蓋防止親蟹逃逸，但投喂極為不便。因此，今后用土池進(jìn)行家系規(guī)?；瘶?gòu)建則可采取每個(gè)隔間無(wú)蓋，安裝鈣塑板倒檐即可，如有條件可使用孵化桶則更方便。

3.1.3 配對(duì)期間的管理 筆者歷年采用大規(guī)格親蟹繁育的實(shí)踐證明，大規(guī)格親蟹配對(duì)難、配對(duì)時(shí)間長(zhǎng)。2012年12月22日、2013年2月26日分別抽干池水移出雄蟹和抱卵蟹，親蟹從入箱到出箱時(shí)間跨度大，較常規(guī)親蟹交配時(shí)間長(zhǎng)。在規(guī)?；瘶?gòu)建家系過(guò)程中，采用鐵絲將植物性和動(dòng)物性餌料串起來(lái)投飼，根據(jù)吃食情況靈活掌握投飼量和投喂頻率，以防殘餌敗壞水質(zhì)和確保親蟹營(yíng)養(yǎng)充足。

3.2 家系的越冬

本次規(guī)模化家系構(gòu)建過(guò)程中，為確保抱卵蟹的越冬成活率，在越冬期間，采取不斷加深水位以防水溫劇烈變化、開(kāi)啟耕水機(jī)防止池面凍住、適時(shí)換水和適量投餌的措施，確保越冬期間池水水質(zhì)良好，親蟹營(yíng)養(yǎng)均衡，使親蟹的越冬成活率達(dá)75.6%。不同來(lái)源的親蟹越冬成活率不同，其中以蘇南養(yǎng)殖群體成活率最高、蘇北里下河養(yǎng)殖群體次之，長(zhǎng)江干流野生群體最低，而構(gòu)建家系期間投飼及其他管理完全一致，這可能與不同來(lái)源親蟹未選擇為親蟹前的營(yíng)養(yǎng)積累有關(guān)[15]。

3.3 家系的定向繁育

3.3.1 “肥水”布苗 結(jié)合2009年、2011年家系育苗經(jīng)驗(yàn)，在布苗前“肥水”，布苗時(shí)池水呈茶綠色，經(jīng)鏡檢海鏈藻和小球藻為優(yōu)勢(shì)種。Z1—Z2期間不喂料，大量的原池餌料生物確保了Z1變Z2的營(yíng)養(yǎng)需要，順利度過(guò)Z1變Z2這一難關(guān)[16-20]。因此前期“肥水”較“清水”布苗為有優(yōu)，且營(yíng)養(yǎng)更均衡。“清水”布苗輪蟲投喂量難以掌握，若輪蟲投喂不足則影響溞狀幼體發(fā)育，若輪蟲投喂過(guò)多反而致使輪蟲與溞狀幼體競(jìng)爭(zhēng)生存空間。

3.3.2 家系苗產(chǎn)量 此次家系育苗過(guò)程中，從Z1到Z2較為順利，幼體數(shù)量多。但之后因?yàn)檩喯x投喂量不足，導(dǎo)致幼體之間相互殘殺，池水透明度越來(lái)越高，出現(xiàn)池水起泡等水質(zhì)惡化現(xiàn)象，終致各家系產(chǎn)苗不高，較2009年、2011年產(chǎn)量低[10]。此次規(guī)?；蚁涤缫驔](méi)有配備用水源，只能相鄰育苗池取水注入，且育苗隔段間的篩絹網(wǎng)在后期已完全被池水雜物堵塞，各段間水體無(wú)法流通，給換水帶來(lái)極大困難。今后如仍采用土池隔段進(jìn)行家系育苗，極有必要在池底布置排水管道，在池壁布置進(jìn)水管道，并配備一個(gè)備用水源。進(jìn)行規(guī)?；蚁禈?gòu)建時(shí)，若采用孵化桶作為交配、育苗設(shè)施，則作業(yè)將更便捷。

本研究首次采用大規(guī)格親蟹進(jìn)行規(guī)?；蚁禈?gòu)建，突破了大規(guī)格親蟹的配對(duì)難、越冬成活率低、定向繁育難等關(guān)鍵技術(shù)，成功實(shí)現(xiàn)大規(guī)格親蟹規(guī)?；蚁禈?gòu)建。盡管因管理不到位造成各家系蟹苗產(chǎn)量不高，但仍不失為探索河蟹家系遺傳育種技術(shù)的又一次突破。

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The study of lagre-scale family construction for big size Chinese mitten crab（Eriocheir sinensis）

Deng Yanfei，Xia Aijun，Pan Jianlin，Li Yuehua，Bo Rufa，Zhu Qingshun
（Freshwater Fisheries Research Institute of Jiangsu Province，Nanjing 210017，China）

A total of 100 groups of Chinese mitten crab（Eriocheir sinensis）（more than 175 g of female and more than 250 g of male）were selected to construct lagre-scale family from the wild populations of the Chinese mitten crabs，the Yangtze River population and the Lixi River breeders in northern Jiangsu cultured stock.169 families including 25 full-sib and 144 half-sib families were established，the successful ratio of family construction was 84.5%.40 of berried crabs（families）were selected for directional breeding，23 of families（16 of fullsib familes，7 of half-sib families）were desalinated successfully finally.

Eriocheir sinensis；big size；lagre-scale family construction.

Q173

A

1004-2091（2017）07-0049-04

2016-12-15）

10.3969/j.issn.1004-2091.2017.07.010

國(guó)家“十二五”科技計(jì)劃項(xiàng)目（2012BAD26B04-03）；江蘇省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（BE2012355）；江蘇省水產(chǎn)三新工程項(xiàng)目（DY2012-2、PJ2011-46、JS2009-12）

鄧燕飛（1982-），男，助理研究員，從事水生動(dòng)物遺傳育種研究.E-mail：yf-deng@163.com

李躍華，研究員.E-mail：liyuehua1816@sina.com