基于Na+-K+-ATP酶活性變化評價濕阻中焦證Cajal間質(zhì)細(xì)胞模型的研究

王琦越，楊 旭，王吉娥，陳繼蘭，黃秀深

(成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 611137)

【實(shí)驗研究】

基于Na+-K+-ATP酶活性變化評價濕阻中焦證Cajal間質(zhì)細(xì)胞模型的研究

王琦越，楊 旭，王吉娥，陳繼蘭，黃秀深△

(成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 611137)

目的：建立濕阻中焦證Cajal間質(zhì)細(xì)胞模型并對其進(jìn)行評價。方法：濕阻中焦證動物模型建立及動物血清制備；采用Ⅱ膠原酶消化法體外培養(yǎng)ICC，通過濕阻中焦證動物模型含藥血清建立體外濕阻中焦證Cajal間質(zhì)細(xì)胞模型，模擬濕阻中焦證大鼠模型體內(nèi)ICC的生長，以及平胃散含藥血清在濕阻中焦證治療中對ICC細(xì)胞的調(diào)節(jié)機(jī)制，反證證候細(xì)胞模型建立成功。結(jié)果：細(xì)胞造模后細(xì)胞內(nèi)Na+-K+-ATP酶(Na+-K+-Atpase)活力下降，K+濃度及ATP升高，ICC細(xì)胞無氧代謝能力增強(qiáng)；濕阻中焦證細(xì)胞經(jīng)平胃散血清干預(yù)后，與自然恢復(fù)組比較平胃散組ICC細(xì)胞Na+-K+-Atpase和K+活性升高明顯、ATP下降、LDH活力降低。結(jié)論：濕阻中焦證ICC模型細(xì)胞與正常ICC存在差異，證侯細(xì)胞模型建立成功；鈉鉀泵活性的改變可能是濕阻中焦證的基本病理改變之一，平胃散可能通過恢復(fù)鈉鉀泵活性阻斷K+濃度的下降趨勢，影響中焦?jié)褡枳CCajal間質(zhì)細(xì)胞代謝。

中醫(yī)證候細(xì)胞模型；濕阻中焦證模型；平胃散；

濕阻中焦證是脾胃病的一類常見證型，起病具有廣泛性、隱匿性和復(fù)雜性等特點(diǎn)，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量，甚至給臨床各科的治療帶來諸多障礙。李連成[1]對石家莊1005人的抽樣調(diào)查顯示，符合濕阻者106人，患病率為10.55%。李克窮[2]對甘肅1735人的抽樣調(diào)查顯示，符合濕阻者211人，患病率為12.16%，說明濕阻中焦證研究的迫切性需引起重視。近年來,對濕阻中焦證的研究多從動物模型或胃腸道消化、吸收、運(yùn)動機(jī)能減退等方面進(jìn)行,亦有一部分學(xué)者認(rèn)為濕阻中焦證的產(chǎn)生是源于細(xì)胞自身功能障礙。黃秀深[3]、隆淑芬[4]等先后對濕阻中焦證大鼠紅細(xì)胞膜、腦細(xì)胞膜研究發(fā)現(xiàn)Na+-K+-Atpase功能低下。本實(shí)驗以前期較成熟的濕阻中焦證動物模型為平臺建立體外中醫(yī)證候細(xì)胞模型，研究濕阻中焦證ICC內(nèi)Na+-K+-Atpase活性的變化，以探索適宜Cajal間質(zhì)細(xì)胞中醫(yī)證候模型的評價方法。

1 材料

1.1 動物

SD大鼠40只，雌雄各半，體質(zhì)量180～220 g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗動物中心提供(合格證號SCXK(川)2004-11)，檢疫后備用。昆明種小鼠雌雄不拘，出生后10～15 d左右，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗動物中心提供(合格證號SCXK(川)2004-11)，檢疫后備用。

1.2 藥物

平胃散配方：蒼術(shù)24 g，厚樸18 g，陳皮12 g，炙甘草6 g,上藥購自同仁堂成都分店，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)制劑室鑒定合格。先將藥物加水 500 mL浸泡 1 h，然后與大棗2枚、生姜2片一同煎煮至300 mL 左右，再濃縮成濃度為1 g生藥/ml的藥液，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試劑

M199培養(yǎng)基(Gibco)，SCF(Peprotech)，Ⅱ型膠原酶(Gibco)，優(yōu)級新生牛血清(民海生物工程有限公司，Lot.No.20090521)，青霉素(哈爾濱制藥六廠，批號 0903311)，鏈霉素(哈爾濱制藥六廠，批號070201)，無水乙醇0.01 mol/L PBS，大鼠抗小鼠c-kit抗體(武漢博士德)，羊抗大鼠FITC標(biāo)記熒光抗體(Vector)，封閉用羊血清(北京中杉金橋)，F(xiàn)icoll400(Pharmacia)， Na+-K+-ATP 酶測定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號20090723)，鉀測定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號 20090923)，The CellTiter-Glo? Luminescent Cell Viability Assay 試 劑(Promega, SystemLot#259984)，LDH 測定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號 20090923)。

1.4 儀器

相差倒置顯微鏡(Leica,090-35.008-000型，Germany)，酶聯(lián)免疫檢測儀(BIO-RAD,Mdel550型)，免疫熒光顯微鏡(Leica,DMIRE2)，二氧化碳培養(yǎng)箱(SANYO,MCO-15A型，JAPAN)，干熱消毒箱，高溫蒸汽滅菌高壓鍋。

2 方法

2.1 濕阻證動物模型建立與分組

SD大鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，正常組10只，造模組30只。模擬中醫(yī)發(fā)生濕困脾胃的病因“久居濕地，飲食不節(jié)，饑飽失常，睡眠減少，情志不遂”[5]，使大鼠居住在溫度18～25℃、濕度90%以上的造模箱內(nèi)，每日上午用小站臺法控制睡眠時間5 h，單日禁食并給予4℃冰水灌胃1次(2 ml/只)，雙日供足充足飼料并給予豬油灌胃1次(4ml/只)，連續(xù)20 d。實(shí)驗過程中每天密切觀察大鼠的一般狀態(tài)，即糞便形狀、性狀、精神狀態(tài)、被毛色澤、活動狀態(tài)等，各組分別于造模前后及治療后各測量體質(zhì)量1次。造模后動物的大便見黃褐色稀溏便，被毛色澤灰暗，體質(zhì)量減輕，活動量小，飲食進(jìn)水量較前減小。這些癥狀基本接近濕困脾胃證中濕邪困阻中焦的癥狀表現(xiàn)，認(rèn)為動物模型成功。將造模后的30只SD大鼠又隨機(jī)分為模型組10只，平胃散治療組10只，自然恢復(fù)組10只。

2.2 血清制備

2.2.1 濕阻中焦證組模型血清制備 造模20 d后取血清，血清在室溫下靜置2～4 h，離心取上清。56℃滅活30 min，過濾除菌，-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.2 其他組血清制備 停止造模后，灌胃平胃散(10 ml/kg)共3 d。同時自然恢復(fù)組和正常灌胃組0.9N.S(10 ml/kg)第3天灌胃1 h后取血清，血清在室溫下靜置2～4 h后離心取上清。56℃滅活30 min，過濾除菌-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 體外小鼠小腸 ICC的培養(yǎng)和鑒定

2.3.1 ICC的培養(yǎng) 小腸組織單細(xì)胞懸液制備[6]：小鼠禁食12 h后，在無菌條件下取距離回盲部10 cm的小腸放入培養(yǎng)皿，剝?nèi)バ∧c系膜和血管，用PBS液(pH7.0，青霉素100 U/ml，鏈霉素100 U/ml)在50 ml小燒杯中將小腸內(nèi)容物沖洗干凈，將小腸用2 ml注射器針頭縱行剖開小腸，剖去小腸黏膜層，PBS液反復(fù)沖洗肌條3～4次，將肌條剪碎至1～2 mm3小塊后放入小燒杯中，加入Ⅱ型膠原酶(1.3 mg5ml-1)，37℃消化30 min，過 200 目篩網(wǎng)，將含細(xì)胞的濾液1500 r離心3 min去上清，再重懸細(xì)胞 1次，細(xì)胞加在等體積Ficoll400梯度密度液上，3000 r離心10 min，取液面交界細(xì)胞沉淀。用 M199培養(yǎng)基將細(xì)胞密度調(diào)整至1×106個/ml接種至 6 孔培養(yǎng)板，板中預(yù)先放置包被鼠尾膠原(2 ng/cm2)的蓋玻片。放置培養(yǎng)箱，在37℃ 5% CO2條件下培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)24 h后換液，沖去未貼壁細(xì)胞，加入培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，以后每3～4 d換液1次，期間用倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。細(xì)胞穩(wěn)定培養(yǎng)7 d后，進(jìn)行免熒光檢測以確定是否為ICC細(xì)胞。

2.3.2 ICC的鑒定 通過Cajal間質(zhì)細(xì)胞的生長和形態(tài)學(xué)改變進(jìn)行鑒定——體外培養(yǎng)小鼠小腸ICC特征性形態(tài)特點(diǎn)[7]：接種24 h后，ICC即可貼壁，細(xì)胞最初呈三角形或梭形，并有少量短突起。72 h可形成較長突起并與周圍細(xì)胞形成網(wǎng)絡(luò)狀突起連接。體外培養(yǎng)7d后，ICC可以伸出二級、三級突起，可形成較復(fù)雜的網(wǎng)狀連接。

2.4 含藥血清及相關(guān)血清細(xì)胞給藥濃度確定

預(yù)實(shí)驗中，分別用 10%、15% 和20%的平胃散含藥血清作用于ICC細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)當(dāng)含藥血清濃度為15%，對ICC的作用強(qiáng)于10%和20%濃度的含藥血清，對ICC 細(xì)胞的干預(yù)作用最明顯。因此，選擇15%含藥血清濃度作為本實(shí)驗的給藥濃度。

2.5 細(xì)胞造模及細(xì)胞分組給藥

將培養(yǎng)第7天的正常ICC分為正常組(給細(xì)胞加入2次正常組動物的血清)、模型組(給細(xì)胞加入2次濕證模型血清)、自然恢復(fù)組(先給細(xì)胞加入濕證模型血清,之后再給細(xì)胞加入自然恢復(fù)組的血清)、平胃散組(先給細(xì)胞加入濕證模型血清,之后再給細(xì)胞加入平胃散含藥血清)、四君子湯組(先給細(xì)胞加入濕證模型血清,之后再給細(xì)胞加入四君子含藥血清)，2次加血清時間間隔24 h，24 h后檢測指標(biāo)。

2.6 樣本制備及指標(biāo)測定

將待檢測的細(xì)胞制成細(xì)胞懸液移入離心管，以1500 rpm 離心15 min棄上清液。用不含血清的M199培養(yǎng)基洗3次棄上清液，加入200 μl去離子水，手動勻漿機(jī)破碎細(xì)胞，然后嚴(yán)格按照測定試劑盒說明操作。

2.7 統(tǒng)計學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 模型細(xì)胞與正常 ICC的形態(tài)差異

圖1顯示，倒置顯微鏡下觀察生長7 d的ICC形態(tài)，發(fā)現(xiàn)正常組ICC細(xì)胞ICC伸出二級、三級突起，從而形成較復(fù)雜的網(wǎng)狀連接，這種連接是其慢波功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)(詳見圖A)；濕阻中焦證模型細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，細(xì)胞變平，突觸連接緊密，細(xì)胞縫隙變小，網(wǎng)絡(luò)連接不明顯(詳見圖B)。

圖1 模型細(xì)胞與正常ICC的形態(tài)差異(10×40)注：A.正常ICC;B.濕阻中焦證ICC

3.2 模型細(xì)胞與正常 ICC的差異

表1顯示，與正常 ICC 比較，模型組細(xì)胞內(nèi) ATP 明顯提高(P<0.01)、K+濃度升高(P<0.01)，LDH 明顯增強(qiáng)(P<0.01)，但模型組細(xì)胞內(nèi)Na+-K+-Atpase明顯降低(P<0.01)。

組 別例數(shù)濃度(ng/ul,%)ATP(U/mg)Na+-K+-ATP(U/mg)K+(U/mg)LDH(U/mg)空白組6151892217.33±25523.752.99±0.190.14±0.001.38±0.06正常組6151750106.33±22903.883.80±0.380.10±0.000.44±0.05模型組6152327674.00±48830.90**2.78±0.28**0.12±0.00**0.60±0.05**

注：與正常組比較：**P<0.01

3.3 濕阻中焦證動物模型血清對模型ICC的影響

表2顯示，與正常組ICC 比較，模型組、自然恢復(fù)組及四君子湯組細(xì)胞內(nèi)ATP均升高(P<0.01)，其中平胃散組ATP明顯降低(P<0.01)；與正常組ICC比較，自然恢復(fù)組LDH降低(P<0.01)，模型組、四君子湯組細(xì)胞內(nèi)LDH卻有升高趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義；與正常組比較，模型組、自然恢復(fù)組、平胃散組及四君子湯組Na+-K+-Atpase活力均降低(P<0.01)，其中平胃散組Na+-K+-Atpase活力最強(qiáng)，而四君子湯組Na+-K+-Atpase活力最弱(P<0.01)；與正常組比較，模型組、自然恢復(fù)組、平胃散組及四君子湯組K+均升高(P<0.01)。

組 別例數(shù)濃度(ng/μl,%)ATP(U/mg)LDH(U/mg)Na+-K+-ATP(U/mg)K+(U/mg)正常組6151750106.33±22903.88 0.44±0.053.80±0.380.10±0.00模型組6152327674.00±48830.90**口口0.60±0.052.78±0.28**0.12±0.00**自然恢復(fù)組6151838815.33±48604.12**0.17±0.06**△△2.32±0.29**0.11±0.00**平胃散組6151203424.00±18626.08**0.42±0.04口口3.50±0.11△△口口0.12±0.00**四君子湯組6152461678.66±68393.11**△△口口0.46±0.04口口1.53±0.16**△△0.11±0.01**

注：與正常組比較:**P<0.01；與模型組比較:△△P<0.01；與自然恢復(fù)組比較:口口P<0.01

4 討論

濕阻中焦證又稱濕困脾胃證，是指濕邪阻滯脾胃，中焦氣機(jī)失于宣暢，運(yùn)化功能減弱的病癥。臨床表現(xiàn)為全身困重倦怠、腹脹納呆、口黏苔膩及血清胃泌素降低、胃腸推進(jìn)遲緩[8]等。胃腸節(jié)律的發(fā)生起源于胃腸道內(nèi)的 Cajal 間質(zhì)細(xì)胞(interstitial cell of Cajal，ICC)，ICC 是目前胃腸道節(jié)律運(yùn)動的發(fā)起者和調(diào)控者[9]?，F(xiàn)代研究認(rèn)為，濕阻中焦證的病理改變以胃腸運(yùn)動紊亂與水液代謝障礙為主。而鈉鉀泵是一種鑲嵌在細(xì)胞膜上具有ATP酶活性的特殊蛋白質(zhì)，維持著細(xì)胞內(nèi)外離子的正常分布和滲透壓平衡，進(jìn)而維持細(xì)胞內(nèi)外的水平衡。

本研究通過造模成功的動物模型[10]血清建立濕阻中焦證ICC細(xì)胞模型。從研究結(jié)果來看，ICC細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了一系列明顯變化，與前期研究發(fā)現(xiàn)胃腸動力障礙患者ICC 細(xì)胞數(shù)量減少、形態(tài)和網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)變化一致，提示濕阻中焦證ICC 細(xì)胞模型從形態(tài)上看出了胃腸動力障礙表現(xiàn)。此外，位于細(xì)胞膜上的Na+-K+-Atpase通過消耗能量保持著細(xì)胞內(nèi)外k+濃度差和滲透壓平衡，內(nèi)源性三磷酸腺苷(ATP)是活細(xì)胞代謝最重要的能量來源，而乳酸脫氫酶(LDH)作為一種主要的無氧酵解酶參與細(xì)胞的無氧代謝。造模后細(xì)胞內(nèi)Na+-K+-Atpase酶活力明顯下降，K+濃度及ATP升高，無氧代謝能力增強(qiáng)，說明正常ICC經(jīng)造模后細(xì)胞代謝發(fā)生了一定變化，提示模型細(xì)胞與正常ICC存在差異，推測濕阻中焦證證候細(xì)胞模型建立成功；且模型細(xì)胞Na+-K+-Atpase活力明顯下降，K+濃度升高，提示鈉鉀泵活性的下降是中焦?jié)褡枳C的基本病理改變之一。中醫(yī)認(rèn)為，脾胃功能與水谷精微物質(zhì)的吸收相關(guān)?！端貑枴そ?jīng)脈別論》云:“飲入于胃，游溢精氣，上輸于脾，脾氣散精,上歸于肺，通調(diào)水道，下輸膀胱。水精四布，五經(jīng)并行。”濕困脾胃證中脾胃功能被阻遏，致使水谷精微不能正常運(yùn)化吸收，必然導(dǎo)致物質(zhì)能量代謝的失常，從而致Na+-K+-Atpase活力降低。

平胃散是針對濕阻中焦證而創(chuàng)立的經(jīng)典方劑，可通過提高免疫改善腸黏膜屏障功能治療濕困脾胃證[11-12]，所以選用平胃散進(jìn)行藥物反證。本實(shí)驗中焦?jié)褡枳C ICC 細(xì)胞經(jīng)平胃散治療后，鈉鉀泵的活性恢復(fù)明顯優(yōu)于自然恢復(fù)組，并阻斷K+濃度的下降趨勢，進(jìn)一步說明中焦?jié)褡枳C的病理改變與細(xì)胞膜鈉鉀泵活性降低有關(guān)。平胃散可能通過恢復(fù)鈉鉀泵活性，阻斷K+濃度的下降趨勢，影響中焦?jié)褡枳CCajal間質(zhì)細(xì)胞代謝，從而調(diào)節(jié)胃腸道的運(yùn)動功能。平胃散組ICC細(xì)胞內(nèi)鈉鉀泵活性增加，耗能增加，ATP減少。平胃散降低中焦?jié)褡枳C ICC 細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶(LDH)活力，抑制濕證 ICC 細(xì)胞內(nèi)的無氧代謝，提高細(xì)胞有氧代謝。四君子湯為治療脾氣虛證的代表方，作用不及平胃散。本研究中用于佐證濕阻中焦證ICC細(xì)胞模型建立成功。本實(shí)驗發(fā)現(xiàn)，濕阻中焦證ICC模型細(xì)胞與正常ICC存在差異，證侯細(xì)胞模型建立成功；鈉鉀泵活性的改變可能是濕阻中焦證的基本病理改變之一。平胃散可能通過恢復(fù)鈉鉀泵活性，阻斷K+濃度的下降趨勢，影響中焦?jié)褡枳CCajal間質(zhì)細(xì)胞代謝。本研究從細(xì)胞分子水平揭示濕阻中焦證能量代謝情況，也是體內(nèi)中藥復(fù)方作用機(jī)制在體外研究的延伸, 對體外中醫(yī)證候細(xì)胞模型的建立作創(chuàng)新性的嘗試，為中醫(yī)“證”的研究提供新的研究思路和方法。目前細(xì)胞模型尚存在不足，國內(nèi)外許多學(xué)者正致力于完善細(xì)胞模型，已經(jīng)有研究[13]致力于改進(jìn)培養(yǎng)條件，發(fā)展自動化、微型化的細(xì)胞模型，旨在擴(kuò)大其應(yīng)用范圍和評價效率，細(xì)胞模型將具有很好的開發(fā)前景。

[1] 李連成,路志正. 濕阻的流行病學(xué)調(diào)查[J]. 中醫(yī)雜志,1992,26(6):44-45.

[2] 王克窮,張立華,劉偉. 濕阻脾胃證的流行病學(xué)調(diào)查及相關(guān)因素的初步研究[J]. 中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,1996,2(2):41-44.

[3] 黃秀深,趙燕,張力華,等. 中焦?jié)褡枳C大鼠紅細(xì)胞膜Na～+-K～+ATP酶活性研究[J]. 成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2000,23(4):23-24.

[4] 隆淑芬,黃秀深,羅玉熙,等. 濕困脾胃證大鼠腦組織Na～+-K～+-ATP酶活性的實(shí)驗研究[J]. 成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2007,30(3):36-37.

[5] 周艷霞,黃秀深,孫改俠,等. 平胃散對濕困脾胃證大鼠腸黏膜機(jī)械屏障的調(diào)控作用[J]. 甘肅中醫(yī),2009,8:64-65.

[6] 李春穴,童衛(wèi)東,劉寶華,等. Cajal間質(zhì)細(xì)胞的分離、培養(yǎng)方法探討[J]. 消化外科,2004,04:267-269.

[7] JONES MP.BRATTEN J R.BrattenJR.Small intestinal motility[J].Curr Opin Gastro-enterol,2008,24(2):164.

[8] 邱賽紅,陳立峰,柳克鈴,等. 芳香化濕藥開胃作用機(jī)理的實(shí)驗研究Ⅱ?qū)窭游锬Ｐ偷挠绊慬J]. 中藥藥理與臨床,1997,13(2):2-5.

[9] WALLANCE AS，BURNS AJ.Development of the enterie nervous systerm,smooth muscle and interstitial cells of Cajal in the human gastrointestinal tract[J].Cell Tissue Res,2005,319(3)：367.

[10] 張豐華,黃秀深. 平胃散對濕阻中焦模型醛固酮和神經(jīng)降壓素的影響[J]. 時珍國醫(yī)國藥,2008,19(11):2781-2782.

[11] 黃秀深，沈濤，劉偉，等.大鼠濕困脾胃證動物模型部分免疫功能的實(shí)驗研究[J].中醫(yī)雜志，2007,48(8):730-732.

[12] 劉德芳,黃秀深,張豐華,等.大鼠濕阻中焦證的水鹽代謝調(diào)節(jié)機(jī)制及平胃散對其的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2005,12(1):26-27.

[13] GALKIN A, PAKKANEN J, VUORELA P. Development of anautomated 7-day 96-well Caco-2 cell culture model[J].Pharmazie, 2008, 63(6): 464-469.

Study on Evaluation of Interstitial Cells of Cajal Model in Dampness Obstructing Spleen and Stomach Syndrome Based on the Na-K-ATP Enzyme Activity Changes

WANG Qi-yue,YANG Xu,WANG Ji-e,CHEN Ji-lan,HUANG Xiu-shen△

(ChengduUniversityofTCM,Chengdu610075,China)

Objective: Establishement and evaluature of of interstitial cells of Cajal spleen and stromach bloked by dampness syndrone in vitro study.Methods: The dampness obstructing spleen stomach syndrome animal model establishment and animal serum preparation; ICC cultured in vitro by collagenase Ⅱ,The dampness containing animal serum in vitro model of middle energizer dampness obstructing spleen stomach syndrome of interstitial cells of Cajal model,Simulation of rat model in vivo ICC growth,Pingwei power and serum regulating mechanism of ICC cells in the treatment of dampness syndrome.The successful establishment of cell model counterevidence syndrome.Results:After the cell model was made, the Na+-K+-ATP enzyme activity decreased, K+concentration and ATP increased, and the anaerobic metabolism ability of ICC cells was enhanced.Wet resistance of middle energizer cells through a flat stomach scattered serum intervention, and natural recovery group compared, flat stomach scattered group ICC Na+-K+-ATPase and K activity was significantly increased, the decline in ATP and LDH activity decreased.Conclusion:The dampness obstructing spleen stomach syndrome ICC model cells and normal ICC have differences. The successful cell model was established successfully,the sodium pump activity is the basic pathological change in the change of the dampness obstructing spleen stomach syndrome,and the level of the stomach may be through the recovery of sodium potassium pump activity,Blocking the downward trend of K+concentration of dampness obstructing spleen stomach syndrome in the Cajal interstitial cell metabolism.

TCM Syndrome Model;The dampness obstructing spleen stomach syndrome rat model;Ping Wei powder

國家自然科學(xué)基金資助項目(81373544)-平胃散對濕阻中焦證AQPS損傷致水平衡失調(diào)

王琦越(1992-)，女，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事消化系統(tǒng)疾病復(fù)方配伍規(guī)律的理論、臨床與實(shí)驗研究。

△通訊作者：黃秀深(1955-)，男，重慶人，教授，從事消化系統(tǒng)疾病復(fù)方配伍規(guī)律的理論、臨床及實(shí)驗研究，Tel：13608031734，E-mail：jcbl7747@sina.com。

R285.5

B

1006-3250(2017)05-0630-04

2016-09-11