探究CEACAM6與FOXP3對胰腺癌腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞和預(yù)后的影響

莫吉祥+敖彩民+彭杰

摘 要：目的：分析在胰腺癌腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞預(yù)后方面CEACAM6和FOXP3產(chǎn)生的影響。方法：搜集2015年12月至2016年12月在中南大學(xué)湘雅醫(yī)院治療的胰腺癌患者45例，通過免疫組織的化學(xué)法對患者胰腺癌組織之中RO、CEACAM6、CD45、FOXP3、CD8與CD3表達(dá)進(jìn)行檢測，同時探討各種指標(biāo)和病理特征、預(yù)后之間的相關(guān)性。結(jié)果：FOXP3的表達(dá)和CD45RO、CD3以及CD8陽性T細(xì)胞低浸相關(guān)，但是和CD4+T的細(xì)胞浸潤沒有顯著相關(guān)性；CEACAM6高表達(dá)和CD45RO+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞低浸潤相關(guān)，和CD4+T細(xì)胞、CD3+T細(xì)胞浸潤沒有明顯的關(guān)系。結(jié)論：腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞浸潤密度和胰腺癌預(yù)后、臨床分期以及組織分化息息相關(guān)，CEACAM6與FOXP3和胰腺癌的惡性程度有著相關(guān)性，且都可以對腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞進(jìn)行抑制。

中圖分類號：R735.9文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

一、引言

胰腺癌消化系統(tǒng)的惡性腫瘤，主要特點是生存期比較短、早期診斷難度大、手術(shù)切除率比較低等。即便近幾年在胰腺癌病理生理研究方面取得一定成果，但死亡率與發(fā)病率沒有變化。胰腺癌免疫功能研究始終是一個熱點，通常腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞（tumor infiltrating lymphocytes，TIL）主要是由腫瘤組織分離而來，含有腫瘤特異性的細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞與自然殺傷（natural killer，NK）的細(xì)胞，有抗腫瘤的反應(yīng)。研究中指出，腫瘤中浸潤CD45RO+T 細(xì)胞、CD3+T 細(xì)胞以及CD8+T細(xì)胞和預(yù)后有一定關(guān)系，調(diào)節(jié)性的T細(xì)胞（regulatory T cells，T reg）有免疫抑制的效果，特異性的標(biāo)志屬于核轉(zhuǎn)錄因子的叉頭盒P3（（forkhead box P3，F(xiàn)OXP3），Treg高表達(dá)和胰腺癌、卵巢癌以及結(jié)直腸癌惡性程度有正相關(guān)關(guān)系。癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）屬于蛋白家族，和細(xì)胞黏附有關(guān)，因此，也叫做癌胚抗原相關(guān)的黏附分子（CEA-related cell adhesion molecule，CEACAM）。本文將2015年12月至2016年12月在中南大學(xué)湘雅醫(yī)院治療的胰腺癌患者45例作為此次的探究對象，簡析了在胰腺癌腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞預(yù)后方面CEACAM6和FOXP3產(chǎn)生的影響。

二、研究資料和方法

1.研究的資料

搜集2015年12月至2016年12月在中南大學(xué)湘雅醫(yī)院治療的胰腺癌患者45例，所有患者術(shù)前均未接受放化療或免疫治療。有25例患者是男性，有20例患者是女性；患者的年齡跨度在44～78歲之間，年齡均值是（69±2.91）歲。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（Union for International Cancer Control，UICC） 的分期實施TNM 分期，25例患者是Ⅰ期與Ⅱ期，20例患者是Ⅲ期與Ⅳ期。按照組織病理的分級，有17例是高分化，有28例是中低分化。

試劑：兔抗人CD8 mAb、小鼠抗人CD3的單克隆抗體（monoclonal antibody，mAb）以及兔抗人CD4的多克隆抗體，都選自Santa Cruz公司，小鼠抗人的FOXP3mAb、小鼠抗人的CD45ROmAb以及兔抗人CEACAM6mAb都來自Abcam公司，而Chem Mate EnvisionTM兔/小鼠標(biāo)所用免疫組織的化學(xué)試劑盒采購于Dako公司。

2.方法

將胰腺癌的石蠟包埋組織切片，大小為4微米，經(jīng)脫蠟與水化，然后用高壓鍋加熱，修復(fù)抗原。通過30mL/L的雙氧水對內(nèi)源性的過氧化物酶進(jìn)行滅活，添加50升兔抗人CD8mAb（1∶100）、滅小鼠抗人CD3 mAb（1∶100）以及兔抗人CD4多克隆抗體（1∶100），同時加入小鼠抗人FOXP3 mAb （1∶50）、CD45RO mAb（1∶10）與兔抗人CEACAM6mAb（1∶400），在37攝氏度條件下孵育1個小時，在室溫條件下孵育30分鐘。應(yīng)用DAB來顯色，用蘇木精襯染，將人扁桃體的組織作為陽性對照，而省略一抗當(dāng)做空白的對照。

3.觀察的指標(biāo)

應(yīng)用半定量的方法對FOXP3、CD3、CEACAM6、CD4、CD45RO與CD8浸潤、表達(dá)進(jìn)行判斷，按照染色的強度分成3（棕色）、2（棕黃色）、1（淺黃色）與0（無色）。按照陽性細(xì)胞百分比分成：4（≥75%）、3（50%～74%）、2（25%～49%）、1（5%～24%）與0（0%～5%）。分?jǐn)?shù)相加總分劃分為：（+++）為5～7分、（++）為3～4分、（+）為2分、0～1分為（-），（-）與（+）代表陰性的表達(dá)，（++）代表弱陽性的表達(dá)，（+++）代表強陽性的表達(dá)。

4.應(yīng)用統(tǒng)計軟件統(tǒng)計所得數(shù)據(jù)

本次實驗得出數(shù)據(jù)都需要實施分析與整理，然后使用統(tǒng)計軟件SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，對實驗研究中出現(xiàn)的所有相關(guān)數(shù)據(jù)均進(jìn)行整理和分析，通過標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）來表示計量資料，通過卡方（x2）表示計數(shù)資料，應(yīng)用獨立的樣本t對組間的構(gòu)成比進(jìn)行檢驗，如果實驗所得數(shù)據(jù)經(jīng)對比以后存在統(tǒng)計意義，用P<0.05表示。

三、結(jié)果

1.免疫組織的化學(xué)染色結(jié)果和臨床病理相關(guān)性

在Ⅲ期與Ⅳ期胰腺癌之中，F(xiàn)OXP3與CEACAM6的高表達(dá)比較高，與Ⅰ、Ⅱ期相比差異比較顯著，P<0.05；在中低分化中胰腺癌之中，F(xiàn)OXP3與CEACAM6的高表達(dá)比較高，與高分化中FOXP3與CEACAM6的高表達(dá)相比，有顯著差異，P<0.05（見表1）。

2.FOXP、CEACAM6和T細(xì)胞相關(guān)性

FOXP3的表達(dá)和CD45RO、CD3以及CD8陽性T細(xì)胞低浸相關(guān)，但是和CD4+T的細(xì)胞浸潤沒有顯著相關(guān)性；CEACAM6高表達(dá)和CD45RO+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞低浸潤相關(guān)，和CD4+T細(xì)胞、CD3+T細(xì)胞浸潤沒有明顯的關(guān)系（見表2）。

四、討論

腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞浸潤目的可以反映宿主對癌細(xì)胞免疫應(yīng)答的強弱，CD45RO、CD3以及CD8與陽性T細(xì)胞浸潤、胰腺癌發(fā)展、總體預(yù)后有著密切相關(guān)性。本次研究顯示，F(xiàn)OXP3的表達(dá)和CD45RO、CD3以及CD8陽性T 細(xì)胞低浸相關(guān)，但是和CD4+T的細(xì)胞浸潤沒有顯著相關(guān)性；CEACAM6高表達(dá)和CD45RO+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞低浸潤相關(guān)，和CD4+T細(xì)胞、CD3+T細(xì)胞浸潤沒有明顯的關(guān)系。轉(zhuǎn)錄因子的FOXP3 基因與編碼產(chǎn)物Scurfin 會參與到Treg中樞性生成過程中，同時會對Treg免疫調(diào)節(jié)的功能發(fā)揮產(chǎn)生影響。通常FOXP3表達(dá)和惡性腫瘤不良預(yù)后相關(guān)，F(xiàn)OXP3一般是在抑制白細(xì)胞介素基礎(chǔ)上，對T細(xì)胞活化增殖進(jìn)行抑制。本次研究還顯示，在Ⅲ期與Ⅳ期胰腺癌之中FOXP3與CEACAM6的高表達(dá)比較高，與Ⅰ、Ⅱ期相比差異比較顯著，P<0.05。研究結(jié)果顯示，在Ⅲ期與Ⅳ期FOXP3表達(dá)相對較高。

五、結(jié)語

綜上所述，腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞浸潤密度和胰腺癌預(yù)后、臨床分期以及組織分化息息相關(guān)，CEACAM6與FOXP3和胰腺癌惡性程度有著相關(guān)性，兩者都可以對腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞進(jìn)行抑制。

參考文獻(xiàn)：

[1]彭 杰，蔣重驊，龍泓羽，等.癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子6在胰腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2013（2）：57-60.

[2]陳琳琳，谷 歡，彭 杰，等.非編碼RNA與胰腺癌[J].中南大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2014（5）：532-540.

[3]鄭益紅，溫美福，葉新橋，等.腫瘤浸潤T淋巴細(xì)胞在乳腺癌原發(fā)灶中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2016（32）：19-20.

[4]申苗苗，黃韻紅，胡云飛，等.骨髓涂片免疫組織化學(xué)與骨髓活組織檢查診斷非霍奇金淋巴瘤骨髓浸潤的比較[J].白血病·淋巴瘤，2016（12）：728-732.

[5]崔瑩珊，陳小林，周航亮.術(shù)前外周血小板與淋巴細(xì)胞比值與結(jié)直腸癌術(shù)后患者臨床預(yù)后研究[J].新醫(yī)學(xué)，2015（10）：685-689.

[6]Zhang S，Defrias DV，Alasadi R，et a1.Endoscopic ultrasound—guided fineneedle aspiration（EUS—FNA）：experience of an academic centre in the USA [J].Cytopathology，2010，21（1）：35-43.

[7]唐藝宸.腫瘤浸潤調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞與胰島癌進(jìn)展及預(yù)后的相關(guān)性研究[D].重慶：第三軍醫(yī)大學(xué)，2014.