探討Tim-3在非小細胞肺癌浸潤巨噬細胞上的表達及其對預(yù)后的影響

申學(xué)杰，潘 娜，魏 楓，王 揚，鄭 禹，金 昊，曹 水，任秀寶

1.天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院國家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津 300060；

2.天津市“腫瘤防治”重點實驗室，天津 300060；

3.天津市惡性腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津 300060；

4.天津市腫瘤免疫與生物治療重點實驗室，天津 300060

探討Tim-3在非小細胞肺癌浸潤巨噬細胞上的表達及其對預(yù)后的影響

申學(xué)杰1,2,3,4，潘 娜1,2,3,4，魏 楓1,2,3,4，王 揚1,2,3,4，鄭 禹1,2,3,4，金 昊1,2,3,4，曹 水1,2,3,4，任秀寶1,2,3,4

1.天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院國家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津 300060；

2.天津市“腫瘤防治”重點實驗室，天津 300060；

3.天津市惡性腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津 300060；

4.天津市腫瘤免疫與生物治療重點實驗室，天津 300060

背景與目的：T細胞免疫球蛋白和黏蛋白域分子3(T cell immunoglobulin and mucin-domaincontaining molecules 3，Tim-3)在免疫調(diào)節(jié)中起重要作用，參與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展，且與疾病免疫逃逸和疾病臨床預(yù)后明顯相關(guān)。該研究旨在探討負性共刺激分子Tim-3在非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)浸潤巨噬細胞中的表達及臨床意義。方法：采用免疫組織化學(xué)法檢測126例NSCLC患者中Tim-3的表達水平，分析腫瘤組織浸潤巨噬細胞Tim-3的表達水平與臨床病理特征間的關(guān)系，并進一步分析Tim-3的表達水平對NSCLC患者預(yù)后的影響。結(jié)果：Tim-3主要分布于巨噬細胞的細胞質(zhì)和細胞膜中；Tim-3在腫瘤浸潤巨噬細胞中的表達水平與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期均顯著相關(guān)(P=0.002、0.045和0.022)；Tim-3在腫瘤浸潤巨噬細胞中的表達水平可顯著影響NSCLC患者的生存及預(yù)后，在Ⅲ期NSCLC患者中，Tim-3的表達越高，患者總生存期(overall survival，OS)越短(Ⅲ期：χ2=12.910，P=0.000，中位OS分別為80和32個月)。而且，Tim-3的表達水平與Ⅲ期NSCLC患者的無疾病生存期(disease free survival，DFS)也顯著相關(guān)(χ2=6.135，P=0.013，中位DFS分別為41和24個月)，高表達Tim-3的NSCLC患者DFS短。另外，在Ⅲ期NSCLC患者中，Tim-3在淋巴細胞中的表達水平與OS和PFS呈負相關(guān)(χ2=4.737，P=0.030，中位OS分別為80和47個月；χ2=5.882，P=0.015，中位DFS分別為41和24個月)。結(jié)論：Tim-3在腫瘤免疫中起負性調(diào)節(jié)作用從而促進免疫逃逸，對患者的生存及預(yù)后有不良影響。

T細胞免疫球蛋白和黏蛋白域分子3；非小細胞肺癌；巨噬細胞；預(yù)后

T細胞免疫球蛋白和黏蛋白域分子3(T cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecules 3，Tim-3)最初被認為是Thl型細胞的表面標記性分子［1］。隨后研究發(fā)現(xiàn)，Tim-3不僅在分化成熟的Thl細胞中表達，而且在多種固有免疫細胞(包括巨噬細胞、NK細胞和樹突狀細胞)中均高表達，并且Tim-3能夠通過調(diào)節(jié)這些細胞的功能從而參與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展過程［2-3］。另有研究發(fā)現(xiàn)，Tim-3也在一些腫瘤細胞中表達，促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［4-6］。Tim-3現(xiàn)已成為備受關(guān)注的負性共刺激分子之一。然而，國內(nèi)外至今尚無Tim-3在非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)浸潤巨噬細胞中的表達情況及其預(yù)后意義的報道。本研究通過對石蠟包埋的NSCLC組織進行Tim-3的免疫組織化學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織浸潤巨噬細胞表面Tim-3過表達的現(xiàn)象，分析其表達水平與患者生存預(yù)后的相關(guān)性，并進一步揭示了Tim-3在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的獨特作用方式，可能會在未來腫瘤免疫治療領(lǐng)域中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。

1 材料和方法

1.1 患者與組織標本

收集2008年3月20日—2014年8月31日在天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院接受手術(shù)治療，手術(shù)范圍包括肺部病灶切除及淋巴結(jié)清掃，并經(jīng)病理明確診斷的NSCLC新發(fā)病例。標本采集標準為手術(shù)前未經(jīng)任何抗腫瘤治療的原發(fā)性NSCLC且組織保存完好，排除同時患有其他腫瘤和免疫性疾病的患者。共129例，隨訪截至2015年8月30日，平均隨訪時間為37個月，失訪3例。其中，男性72例，女性54例，年齡33～82歲，平均年齡62歲。所有患者按照第8版國際肺癌TNM分期標準進行分期：Ⅰ期33例，Ⅱ期33例，Ⅲ期60例。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)法

① 烤片：取NSCLC組織石蠟切片置于65 ℃烤箱中烘烤1 h，使切片上的石蠟融化。②脫蠟及水化：烘烤后的切片過3次二甲苯，各30 min，之后置于梯度乙醇中水化，蒸餾水洗滌2次。③ 高壓修復(fù)：將切片置于已經(jīng)預(yù)熱的枸櫞酸鹽或pH為9.0的EDTA抗原修復(fù)液中高壓修復(fù)3 min，自然冷卻至室溫。④ 洗片：PBS洗片后，置于3%H20237 ℃避光20 min，去除過氧化物酶的影響。⑤ 封閉：兔/鼠血清37 ℃封閉30 min，去除非特異性結(jié)合位點。⑥ 加入山羊多克隆抗體Tim-3(AF2365，1∶100，購自美國R&D Systems公司)或鼠單克隆抗體CD68(MA5-13324，1∶500，購自美國Thermo Fisher公司)，4 ℃過夜。⑦ 室溫放置1 h，PBS洗片后，加入辣根過氧化物酶標記的兔抗羊二抗(ZDR-5308，1∶70，購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)或即用型免疫組織化學(xué)Elivision plus試劑盒(鼠/兔)，37 ℃ 30 min。⑧ DAB顯色1 min。⑨ 蘇木精染色3 min，鹽酸乙醇返紅，氨水返藍，水洗。⑩ 脫水。? 封片。以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2.2 結(jié)果評估

經(jīng)天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院3位病理科醫(yī)師審核結(jié)果后，利用全自動數(shù)字切片掃描儀進行結(jié)果評估：陽性的細胞數(shù)所占比例小于5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，大于75%為4分。然后將染色強度×陽性細胞百分比對應(yīng)的值作為評分。0～1為-，2～4為+，5～8為++，9～12為+++。根據(jù)結(jié)果進行分組：Tim-3在巨噬細胞上表達水平是-/+定義為Tim-3 low組，++/+++為Tim-3 high組；Tim-3在淋巴細胞上表達水平是-/+定義為Tim-3 weak組，++/+++為Tim-3 strong組；Tim-3在腫瘤細胞上表達水平是-定義為Tim-3 negative組，+/++/+++為Tim-3 positive組。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

運用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 20.0進行分析，采用χ2檢驗或非參數(shù)秩和檢驗比較Tim-3表達與各臨床病理因素的關(guān)系。通過Kaplan-Meier法繪制生存曲線。用Log-rank法比較兩組的生存率，采用Cox回歸進行多因素生存分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Tim-3在NSCLC組織中的免疫組織化學(xué)染色情況

根據(jù)細胞形態(tài)學(xué)特點并結(jié)合CD68免疫組織化學(xué)結(jié)果(圖1)，天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院3位病理科醫(yī)師審核結(jié)果顯示，Tim-3主要分布于巨噬細胞的細胞質(zhì)和細胞膜上(圖2)。陰性染色22例(17.5%)，陽性染色104例(82.5%)，其中，強陽性、中陽性和弱陽性染色分別為8例(6.3%)、44例(34.9%)和52例(41.3%)；另外，Tim-3還分布于腫瘤細胞上(圖3)，陰性染色79例(62.7%)，陽性染色47例(37.3%)；Tim-3也分布于淋巴細胞上(圖4)，陰性染色32例(25.4%)，陽性染色94例(74.6%)。

圖 1 免疫組織化學(xué)法檢測CD68在NSCLC浸潤巨噬細胞上的表達Fig. 1 Expression of CD68 on macrophages in NSCLC detected by immunohistochemistry

圖 2 免疫組織化學(xué)法檢測Tim-3在NSCLC浸潤巨噬細胞上的表達Fig. 2 Expression of Tim-3 on macrophages in NSCLC detected by immunohistochemistry

圖 3 免疫組織化學(xué)法檢測Tim-3在NSCLC腫瘤細胞上的表達Fig. 3 Expression of Tim-3 on tumor cells in NSCLC detected by immunohistochemistry

圖 4 免疫組織化學(xué)法檢測Tim-3在NSCLC淋巴細胞上表達Fig. 4 Expression of Tim-3 on lymphocytes in NSCLC detected by immunohistochemistry

2.2 Tim-3表達與臨床病理特征的關(guān)系

χ2檢驗或非參數(shù)秩和檢驗單因素分析顯示，Tim-3在NSCLC浸潤巨噬細胞上的表達與患者的年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)(body mass index，BMI)、是否吸煙及病理類型均無顯著相關(guān)性，但與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期均顯著相關(guān)(P=0.002、0.045和0.022，表1)。

2.3 NSCLC患者單因素及多因素生存分析

Kaplan-Meier生存分析表明，Tim-3 high組患者中位總生存期(overall survival，OS)短于Tim-3 low組(41個月 vs 80個月)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=22.701，P=0.000)；Tim-3 negative組患者中位OS短于Tim-3 positive組(35個月vs 36個月)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.182，P=0.004)；Tim-3 strong組患者中位OS短于Tim-3 weak組(34個月 vs 37個月)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.497，P=0.004)。另外原發(fā)灶大小、TNM分期也可影響患者的OS(P＜0.05，表2)。Cox回歸多因素生存分析顯示，Tim-3在巨噬細胞中的表達(high/ low)、在腫瘤細胞中的表達(positive/negative)及pT(T≤3 cm/T＞3 cm)為患者OS的獨立預(yù)后影響因素(表3)。

表 1 Tim-3在巨噬細胞上的表達與臨床病理因素的關(guān)系Tab. 1 Relationships between Tim-3 expression on macrophages and clinicopathologic characteristics

表 2 NSCLC中OS相關(guān)因素的單因素分析Tab. 2 Univariate analysis for OS in NSCLC

表 3 NSCLC中OS相關(guān)因素的Cox風險回歸模型多因素分析Tab. 3 Multivariate Cox regression analysis for OS in NSCLC

2.3.1 Tim-3在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期NSCLC患者巨噬細胞上的表達水平與預(yù)后的關(guān)系

進一步探討Tim-3在腫瘤局部浸潤巨噬細胞上的表達水平與患者預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果顯示，Tim-3在巨噬細胞上表達水平與Ⅰ期NSCLC患者的生存預(yù)后無明顯的相關(guān)性(χ2=1.779，P=0.182，圖5)，在Ⅱ期和Ⅲ期NSCLC患者中，Tim-3的表達水平可顯著影響預(yù)后，高表達Tim-3的患者OS短(Ⅱ期：χ2=8.574，P=0.003，中位OS均為40個月，圖6；Ⅲ期：χ2=12.910，P=0.000，中位OS分別為80和32個月，圖7)。另外，Tim-3在巨噬細胞上的表達水平與Ⅲ期NSCLC患者的無疾病生存期(disease free survival，DFS)也顯著相關(guān)(χ2=6.135，P=0.013，中位DFS分別為41和24個月，圖8)，Tim-3的表達越高，患者越易復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。

圖 5 Ⅰ期NSCLC患者中Tim-3在巨噬細胞上表達與OS的關(guān)系Fig. 5 Relationship between Tim-3 expression on macrophages and OS in stage Ⅰ NSCLC patients.

圖 6 Ⅱ期NSCLC患者中Tim-3在巨噬細胞上表達與OS的關(guān)系Fig. 6 Relationship between Tim-3 expression on macrophages and OS in stage Ⅱ NSCLC patients

圖 7 Ⅲ期NSCLC患者中Tim-3在巨噬細胞上表達與OS的關(guān)系Fig. 7 Relationship between Tim-3 expression on macrophages and OS in stage Ⅲ NSCLC patients

圖 8 Ⅲ期NSCLC患者中Tim-3在巨噬細胞上表達與DFS的關(guān)系Fig. 8 Relationship between Tim-3 expression on macrophages and DFS in stage Ⅲ NSCLC patients

2.3.2 Tim-3在Ⅲ期NSCLC患者淋巴細胞上的表達水平與預(yù)后的關(guān)系

Kaplan-Meier生存分析顯示，在Ⅲ期NSCLC患者中，Tim-3在淋巴細胞上的表達水平與OS和DFS均顯著相關(guān)，Tim-3 weak組患者較Tim-3 strong組患者具有更長的OS和PFS，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.737，P=0.030，中位OS分別為80和47個月，圖9；χ2=5.882，P=0.015，中位DFS分別為41和24個月，圖10)。

圖 9 Ⅲ期NSCLC患者中Tim-3在淋巴細胞上表達與OS的關(guān)系Fig. 9 Relationship between Tim-3 expression on lymphocytes and OS in stage Ⅲ NSCLC patients

圖 10 Ⅲ期NSCLC患者中Tim-3在淋巴細胞上表達與DFS的關(guān)系Fig. 10 Relationship between Tim-3 expression on lymphocytes and DFS in stage Ⅲ NSCLC patients

2.3.3 Tim-3在Ⅲ期NSCLC患者腫瘤細胞上的表達水平與預(yù)后的關(guān)系

Kaplan-Meier生存分析顯示，在Ⅲ期NSCLC患者中，Tim-3在腫瘤細胞上的表達水平與OS和DFS無明顯相關(guān)性，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=3.205，P=0.073，圖11；χ2=1.445，P=0.229，圖12)。

圖 11 Ⅲ期NSCLC患者中Tim-3在腫瘤細胞上表達與OS的關(guān)系Fig. 11 Relationship between Tim-3 expression on tumor cells and OS in stage Ⅲ NSCLC patients

圖 12 Ⅲ期NSCLC患者中Tim-3在腫瘤細胞上表達與DFS的關(guān)系Fig. 12 Relationship between Tim-3 expression on tumor cells and DFS in stage Ⅲ NSCLC patients

3 討 論

肺癌的發(fā)病率和死亡率均居我國惡性腫瘤第1位［7］，其中NSCLC約占肺癌的85%，NSCLC根據(jù)組織學(xué)主要分為腺癌(約40%)、鱗狀細胞癌(20%～30%)和大細胞癌(10%)等亞型［8］。盡管國內(nèi)外對于NSCLC的研究層出不窮，但是對于NSCLC的認識仍有待進一步提高。近年來，免疫檢查點分子的發(fā)現(xiàn)及其功能的闡明為腫瘤治療提供了新的靶點和治療手段［9-10］。這些免疫檢查點分子包括CTLA-4、PD-1、Lag-3和Tim-3等，尤其是Tim-3在Th1細胞免疫、自身免疫和腫瘤免疫耐受中的重要功能使其成為腫瘤免疫研究的焦點［11］。

目前已有大量研究證明，Tim-3不僅在黑色素瘤、宮頸癌、前列腺癌、腎透明細胞癌、胃癌及子宮內(nèi)膜癌等多種實體腫瘤癌細胞上過表達，且與患者預(yù)后呈負相關(guān)［5,12-16］。而且，在急性白血病患者中，白血病干細胞過表達Tim-3、CCL-1和BMI-1與不良預(yù)后密切相關(guān)［17］。另有研究表明，Tim-3在多種腫瘤組織浸潤的T淋巴細胞上也存在過表達，且對患者生存及預(yù)后有不良影響［18-20］。但關(guān)于Tim-3在髓系細胞，如巨噬細胞、NK細胞和樹突狀細胞上的表達及其作用的研究相對較少［21］。而且，有關(guān)Tim-3在NSCLC局部浸潤巨噬細胞上的表達情況及其臨床意義的研究國內(nèi)外仍未見報道，本研究恰恰彌補了這一領(lǐng)域的缺失。

Wiener等［5］首次發(fā)現(xiàn)在黑色素瘤組織中，Tim-3不僅在肥大細胞上表達，而且還在腫瘤細胞上表達，同時發(fā)現(xiàn)Tim-3受TGF-β的刺激后上調(diào)，有利于黑色素瘤細胞的生存。隨后，Shang等［22］的研究發(fā)現(xiàn)，在骨肉瘤患者組織切片中，Tim-3在浸潤的淋巴細胞、巨噬細胞和腫瘤細胞上表達，Tim-3可觸發(fā)腫瘤細胞發(fā)生侵襲性上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，可能參與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。但在這些研究中，Tim-3在髓系細胞上的表達及其作用未引起重視。Zhuang等［6］首次通過免疫組織化學(xué)法研究Tim-3在30例NSCLC腫瘤細胞及淋巴細胞上的表達情況，并證明Tim-3的表達水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，Tim-3可作為NSCLC患者的獨立預(yù)后因素。而本研究發(fā)現(xiàn)，Tim-3在浸潤巨噬細胞及淋巴細胞上的表達水平與患者的疾病進展及預(yù)后均顯著相關(guān)；然而，Tim-3在腫瘤細胞上的陽性表達率為38.1%(48/126例)，其表達水平與患者的疾病進展及預(yù)后無顯著相關(guān)性(χ2=3.205，P=0.073；χ2=1.445，P=0.229)，但從生存曲線的走向可以看出Tim-3在腫瘤細胞上的表達水平越高預(yù)后越差的趨勢，可能由于Tim-3 positive組人數(shù)較Tim-3 negative組人數(shù)偏少，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，因此還需要大樣本研究的進一步驗證。另外，Li等［19］的研究也發(fā)現(xiàn)，在乙型肝炎病毒相關(guān)的肝細胞癌中，Tim-3+細胞數(shù)量與腫瘤大小呈正相關(guān)。而本研究結(jié)果顯示，Tim-3在NSCLC浸潤巨噬細胞上的表達水平與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期顯著相關(guān)；在NSCLC患者中，Tim-3過表達提示預(yù)后不良。其機制可能是：① Tim-3介導(dǎo)腫瘤微環(huán)境中效應(yīng)T細胞的失能，抑制腫瘤免疫應(yīng)答，從而有利于腫瘤免疫逃逸，促進腫瘤細胞生長；② Tim-3直接促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。

早在2007年Anderson等［23］的研究顯示，Tim-3可在巨噬細胞上高表達，并通過NF-κB通路促進巨噬細胞的炎性反應(yīng)。近年來，關(guān)于Tim-3過表達在巨噬細胞的相關(guān)報道不斷增多，Zhou等［24］的研究證實，在結(jié)腸癌患者中，Tim-3的表達可以作為一個獨立的預(yù)后因素，Tim-3可通過STAT3或STAT3-pSTAT3途徑直接促進腫瘤生長。Yan等［25］通過免疫組織化學(xué)法在肝細胞癌組織中檢測到Tim-3在腫瘤相關(guān)巨噬細胞中的表達，且在CD68+腫瘤相關(guān)巨噬細胞中，Tim-3表達高的肝癌患者OS較短，預(yù)后較差；其次，腫瘤微環(huán)境及TGF-β促進巨噬細胞Tim-3表達升高，并進而調(diào)節(jié)巨噬細胞分泌細胞因子能力；此外，還證明Tim-3通過NF-κB-IL-6通路促進腫瘤生長。另外，Komohara等［26］在腎透明細胞癌中也檢測到Tim-3在腫瘤細胞和CD204+腫瘤相關(guān)巨噬細胞上表達，并發(fā)現(xiàn)Tim-3表達水平越高，患者的PFS越短。此外，Tim-3可誘導(dǎo)腎癌細胞對sunitinib和mTOR抑制劑等腎透明細胞癌的標準治療藥物耐藥。本研究在NSCLC中得到類似的結(jié)果，即Tim-3在Ⅱ/Ⅲ期NSCLC浸潤巨噬細胞上過表達提示預(yù)后不良。雖然Ⅰ期NSCLC患者生存分析結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.779，P=0.182)，但是其結(jié)果可能是由于Ⅰ期樣本量較少、OS較長及隨訪時間相對較短造成的?；诂F(xiàn)有報道及本研究結(jié)果，我們假設(shè)Tim-3可能通過IL-6-STAT3通路或NF-κB-IL-6通路直接促進腫瘤生長，或通過負性調(diào)節(jié)抗腫瘤免疫，從而有利于腫瘤免疫逃逸，促進腫瘤細胞生長。但Tim-3在NSCLC中的作用機制仍有待進一步研究，為本研究結(jié)果提供理論依據(jù)。

綜上所述，本研究首次發(fā)現(xiàn)Tim-3在NSCLC浸潤巨噬細胞上過表達提示預(yù)后不良。Tim-3現(xiàn)已成為備受矚目的負性共刺激分子之一，上述研究為揭示NSCLC抑制性免疫微環(huán)境形成機制提供了新思路，同時也為NSCLC免疫治療提供了新視野。但是它在腫瘤逃逸與免疫耐受中發(fā)揮的生物學(xué)功能及作用機制尚未明確，仍有待進一步研究。

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A study on the expression of Tim-3 in macrophages and its role in prognosis of non-small cell lung cancer

SHEN Xuejie1,2,3,4, PAN Na1,2,3,4, WEI Feng1,2,3,4, WANG Yang1,2,3,4, ZHENG Yu1,2,3,4, JIN Hao1,2,3,4, CAO Shui1,2,3,4, REN Xiubao1,2,3,4
(1. National Clinical Research Center for Cancer, Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital, Tianjin 300060, China; 2. Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy, Tianjin 300060, China; 3. Tianjin Clinical Research Center for Cancer, Tianjin 300060, China; 4. Key Laboratory of Cancer Immunology and Biotherapy, Tianjin 300060, China)

CAO Shui E-mail: caoshui9999@163.com

Background and purpose: T cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecules 3 (Tim-3) plays a pivotal role in immune regulation. It participates in the occurrence and development of a variety of diseases, and Tim-3 is associated with immune escape and poor prognosis. The aim of this study was to investigate the expression of negative costimulatory molecule, Tim-3, in macrophages in non-small cell lung cancer (NSCLC) and explore the clinical significance of the expression. Methods: A total of 126 human lung cancer tissue specimens were obtained from pathologically confirmed and newly diagnosed NSCLC patients. The expression level of Tim-3 was analyzed by immunohistochemistry staining. Correlation analysis was performed to study the relationship between Tim-3 expression in macrophagesand clinicopathological features. Survival analysis was performed by Kaplan-Meier. Results: Tim-3 was mainly expressed in the cytoplasm and cell membrane of macrophages. Tumor size, lymph node metastasis, TNM stage were significantly correlated with Tim-3 expression level (P=0.002, 0.045 and 0.022, respectively). Tim-3 expression in macrophages was negatively correlated with the prognosis of patients. Higher Tim-3 expression had a shorter overall survival (OS) in patients with stage Ⅲ NSCLC (χ2=12.910, P=0.000; Median OS: 80 months vs 32 months). Moreover, the expression level of Tim-3 had negative correlation with disease-free survival (DFS) in patients with stage Ⅲ NSCLC (χ2=6.135, P=0.013; Median DFS: 41 months vs 24 months). In addition, Tim-3 expression in lymphocytes was negatively correlated with OS and DFS in patients with stage Ⅲ NSCLC (χ2=4.737, P=0.030, Median OS: 80 months vs 47 months; χ2=5.882, P=0.015, Median DFS: 41 months vs 24 months). Conclusion: Tim-3, as a key negative regulator in anti-tumor immunity, contributes to the tumor immune evasion. It has an adverse influence on the prognosis of NSCLC patients.

T cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecules 3; Non-small cell lung carcinoma; Macrophages; Prognosis

10.19401/j.cnki.1007-3639.2017.07.007

R734.2

A

1007-3639(2017)07-0559-10

2017-02-08

2017-04-02）

國家科技支撐計劃(2015BAI12B00)；國家自然科學(xué)基金(81272221)。

曹 水 E-mail: caoshui9999@163.com