亞麻籽和魚油對蛋雞蛋黃n-3多不飽和脂肪酸含量與肝臟脂肪酸代謝的影響

鄧 波 門小明 朱冬榮 陶 新 姚云昕 徐子偉*

(1.浙江省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，杭州310021；2.浙江艾格生物科技股份有限公司，長興313100)

亞麻籽和魚油對蛋雞蛋黃n-3多不飽和脂肪酸含量與肝臟脂肪酸代謝的影響

鄧 波1門小明1朱冬榮2陶 新1姚云昕2徐子偉1*

(1.浙江省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，杭州310021；2.浙江艾格生物科技股份有限公司，長興313100)

本試驗旨在研究飼糧中添加亞麻籽和魚油對蛋雞蛋黃n-3多不飽和脂肪酸含量、肝臟脂肪酸組成及其合成代謝基因表達的影響。選擇28周齡海蘭褐殼蛋雞96只，隨機分為4組，每組24只。對照組飼喂基礎飼糧，試驗組分別在基礎飼糧中添加10%亞麻籽、10%亞麻籽+5%魚油和5%魚油。飼養(yǎng)21 d后連續(xù)收集7 d雞蛋，然后每組隨機選取4只雞屠宰取樣。結(jié)果表明，與對照組相比：1)添加亞麻籽和魚油均顯著增加蛋黃中n-3多不飽和脂肪酸含量(P<0.05)，其中單獨添加魚油的蛋黃中二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸含量最高；2)試驗組肝臟單不飽和脂肪酸比例均顯著降低(P<0.05)，肝臟n-3多不飽和脂肪酸比例均顯著增加(P<0.05)；3)單獨添加魚油顯著降低肝臟脂肪酸延長酶1、脂肪酸延長酶2和去飽和酶(脂肪酸去飽和酶1、脂肪酸去飽和酶2和硬脂酰輔酶A去飽和酶1)基因表達水平(P<0.05)。由此可見，蛋雞飼糧中單獨添加亞麻籽或魚油可以富集蛋黃n-3多不飽和脂肪酸沉積；添加亞麻籽促進肝臟α-亞麻酸轉(zhuǎn)化生成DHA過程，表現(xiàn)為上調(diào)脂肪酸延長酶和去飽和酶基因表達，添加魚油顯示相反結(jié)果。

亞麻籽；魚油；n-3不飽和脂肪酸；DHA；蛋黃

n-3(又稱omega-3)多不飽和脂肪酸主要包括α-亞麻酸(ALA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)和二十二碳六烯酸(DHA)，對人類心血管疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、精神健康疾病、炎癥反應和免疫功能等具有改善作用，并以DHA效果最受關(guān)注[1-2]。據(jù)報道，雞蛋DHA僅以磷脂型結(jié)合形式存在[3]，這相對增加了脂肪酸氧化穩(wěn)定性和吸收利用活性[4-6]，并可以產(chǎn)生抗炎、抑制腫瘤及膽固醇等特殊生物活性[7-10]。動物體內(nèi)n-3多不飽脂肪酸沉積受飼糧脂肪酸組成直接影響，具體表現(xiàn)在一方面由植物來源的ALA逐步轉(zhuǎn)化生成EPA、DPA和DHA，另一方面由飼糧直接攝取沉積DHA等長鏈多不飽和脂肪酸。魚油、

微型藻類和亞麻籽是3種主要的n-3多不飽和脂肪酸飼糧來源，其中魚油富集在蛋品中的DHA含量最高、微型藻類次之、亞麻籽最低，然而添加魚油會導致鮮蛋產(chǎn)生魚腥味，影響儲存和風味品質(zhì)[11]。通過研究3種不同來源n-3多不飽和脂肪酸的協(xié)同競爭效應，可以在生產(chǎn)中獲得最佳功能富集效果，但目前鮮有相關(guān)報道。因此，本文通過在蛋雞飼糧中添加亞麻籽、魚油及其組合，研究其對蛋黃中n-3多不飽和脂肪酸沉積及肝臟脂肪酸代謝(脂肪酸組成、碳鏈延長酶及去飽和酶基因表達)的影響，旨在為生產(chǎn)富含n-3多不飽和脂肪酸蛋品提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗設計、動物飼養(yǎng)及樣品采集

選擇28周齡海蘭褐殼蛋雞96只，隨機分為4組，每組24只。對照組飼喂基礎飼糧，試驗Ⅰ組飼喂基礎飼糧+10%亞麻籽，試驗Ⅱ組飼喂基礎飼糧+10%亞麻籽+5%魚油，試驗Ⅲ組飼喂基礎飼糧+5%魚油。試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。飼養(yǎng)21 d后連續(xù)收集7 d雞蛋，進行蛋黃分離和噴霧干燥，制成蛋黃粉。試驗結(jié)束后每組隨機選取4只雞，屠宰采集肝臟組織，液氮凍存，用于脂肪酸組成和基因表達分析。

表1 試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

1)預混料為每千克飼糧提供 The premix provided the following per kg of diets：Cu (as copper sulfate) 5 mg，Zn (as zinc sulfate) 40 mg，Mn (as manganese sulfate) 40 mg，F(xiàn)e (as iron sulfate) 80 mg，Se (as sodium selenite) 0.2 mg，I (as calcium iodate) 0.35 mg，VA 7 500 IU，VD32 500 IU，VE 15 IU，VK32 mg，VB12 mg，VB24 mg，VB64 mg，VB120.01 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 5 mg，煙酸 nicotinic acid 20 mg，葉酸 folic acid 1 mg，生物素 biotin 0.2 mg。

2)營養(yǎng)水平均為計算值。Nutrient levels were calculated values.

1.2 脂肪酸甲酯化與氣相色譜測定

根據(jù)Christie[12]描述方法，對組織凍干粉、蛋黃噴干粉或飼糧風干樣品進行脂肪酸甲酯化處理。稱取0.5 g樣品，依次加入2 mL正己烷和5 mL甲酰氯(乙酰氯∶甲醇=1∶8)，充分振蕩混合、80 ℃水浴反應2 h，每15 min振蕩混合1次。結(jié)束后流水冷卻至室溫，加入15 mL 6%碳酸鈉(Na2CO3)溶液。充分反應后5 000×g離心5 min，吸取上層有機相，即為脂肪酸甲酯化產(chǎn)物，用于脂肪酸含量或組成分析。

氣相色譜儀為Agilent 7890A，氫離子火焰檢測器(FID)，毛細管色譜柱規(guī)格為Agilent 19091N-213、260 ℃、30 m×320 μm×0.5 μm。升溫程序為：180 ℃保持1 min，10 ℃/min升至250 ℃，保持15 min，平衡3 min，后運行3 min。進樣量1 μL，進樣口溫度270 ℃，F(xiàn)ID溫度275 ℃。載氣為高純氮氣，流速1.0 mL/min，分流比為20∶1。

ALA、EPA、DPA、DHA的甲酯化標準品購自Sigma公司，22種脂肪酸甲酯化混合標準品購自Sigma公司。采用外標標準曲線測定4種脂肪酸絕對含量，峰面積歸一化法分析脂肪酸組成。

1.3 肝臟組織基因表達分析

利用試劑盒提取總RNA，微量紫外分光光度計測定RNA濃度和純度，利用ReverTra Ace qPCR RT試劑盒合成第1鏈cDNA。根據(jù)NCBI公布的基因序列設計合成基因引物，見表2。實時定量PCR反應在ABI StepOne Plus上進行，反應體系：SYBR Green Master(ROX)5 μL,無菌水3 μL,上、下游引物各0.75 μL,cDNA 0.5 μL；反應溫度：95 ℃ 30 s，95 ℃ 5 s、62 ℃ 34 s,40個循環(huán)。采用ΔΔCt法計算基因表達水平，3次重復結(jié)果計算平均值和標準差。

表2 實時定量PCR所檢測基因及其引物序列

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

所有數(shù)據(jù)以“平均值±標準差”形式表示，統(tǒng)計分析在SPSS 16.0軟件中進行。利用單因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan氏多重比較，對不同組間差異及其顯著性進行分析；利用一般線性模型(general linear model)進行雙因素方差分析，計算亞麻籽、魚油及其互作對相關(guān)指標影響的顯著程度。

2 結(jié)果與分析

2.1 4種飼糧脂肪酸組成比較

農(nóng)田水利工程節(jié)水灌溉技術(shù)推廣應用過程中，應該逐步建設相互協(xié)調(diào)、組織明確、統(tǒng)一管理的區(qū)域化農(nóng)田水利管理體系。從整個項目工程開始立項，到施工建設，再到最后投入使用，每一個設計環(huán)節(jié)、施工環(huán)節(jié)、養(yǎng)護管理環(huán)節(jié)，都要按照統(tǒng)一化的管理制度有效管理。

如表3所示，試驗組飼糧n-3多不飽和脂肪酸比例高于對照組，其中試驗Ⅰ組和Ⅱ組飼糧的ALA比例在5%以上，而在試驗Ⅲ組和對照組未檢測到ALA；試驗Ⅰ組和對照組EPA比例接近，僅為試驗Ⅱ組或Ⅲ組飼糧的25%左右；DPA在4種飼糧中均未被檢測到，DHA比例以試驗Ⅱ組飼糧最高、試驗Ⅲ組次之，試驗Ⅰ組和對照組接近且均為最低。

表3 4種飼糧脂肪酸組成比較

續(xù)表3項目Items對照組Controlgroup試驗Ⅰ組TrialgroupⅠ試驗Ⅱ組TrialgroupⅡ試驗Ⅲ組TrialgroupⅢ豆蔻一烯酸Myristoleicacid(C14∶1)NDNDNDND棕櫚一烯酸Palmitoleicacid(C16∶1)3.813.443.593.70油酸Oleicacid(C18∶1)12.9613.6013.8513.20二十碳烯酸Eicosenoicacid(C20∶1)NDNDNDND山崳一烯酸Cetoleicacid(C22∶1)0.430.400.440.44二十四碳烯酸Tetracosenoicacid(C24∶1)0.470.440.450.30n-3多不飽和脂肪酸n-3PUFA0.516.117.992.08α-亞麻酸ALA(C18∶3)ND5.655.47ND二十碳五烯酸EPA(C20∶5)0.250.231.121.18二十二碳五烯酸DPA(C22∶5)NDNDNDND二十二碳六烯酸DHA(C22∶6)0.260.231.390.90n-6多不飽和脂肪酸n-6PUFA59.9055.2451.7156.93亞油酸Linoleicacid(C18∶2)59.9055.2451.7156.93γ-亞麻酸γ-Linolenicacid(C18∶3)NDNDNDND二十碳四烯酸Arachidonicacid(C20∶4)NDNDNDND其他多不飽和脂肪酸OtherPUFANDNDNDND二十碳二烯酸Eicosadienoicacid(C20∶2)NDNDNDND二十碳三烯酸(順8,11,14)Allcis8,11,14-eicosatrienoicacid(C20∶3)NDNDNDND二十碳三烯酸(順11,14,17)Allcis11,14,17-eicosatrienoicacid(C20∶3)NDNDNDND

ND表示未檢出，表5同。ND mean not detected, the same as Table 5.

2.2 蛋黃n-3多不飽和脂肪酸含量比較

如表4所示，試驗Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組蛋黃n-3多不飽和脂肪酸含量均顯著高于對照組(P<0.05)；試驗Ⅱ組的ALA、DPA含量和n-3多不飽和脂肪酸總量最高，顯著高于其他各組(P<0.05)；試驗Ⅲ組的EPA和DHA含量最高，顯著高于其他各組(P<0.05)。雙因素方差分析顯示，亞麻籽、魚油及其互作對蛋黃n-3多不飽和脂肪含量的影響均達到極顯著水平(P<0.01)。

2.3 肝臟脂肪酸組成比較

如表5所示，與對照組相比，試驗組的單不飽和脂肪酸比例顯著降低(P<0.05)、n-3多不飽和脂肪酸比例顯著增加(P<0.05)，試驗Ⅱ組和Ⅲ組的n-6多不飽和脂肪酸比例顯著降低(P<0.05)；對照組和試驗Ⅲ組的C18∶3(包括α和γ)含量低于檢測限，對照組的C20∶4、C20∶5、C22∶5含量均低于檢測限。從數(shù)值上看，試驗Ⅰ組的C18∶2、C20∶2和C20∶3比例與對照組接近，為4組中最高；試驗Ⅱ組的C14∶0、C20∶0和C20∶5比例為4組中最高，試驗Ⅲ組的C16∶0、C20∶1、C20∶4、C22∶5和C22∶6比例為4組中最高。僅在試驗Ⅰ組和Ⅱ組存在C18：3，并以試驗Ⅰ組顯著高于試驗Ⅱ組(P<0.05)。

雙因素方差分析顯示，亞麻籽除了對C14∶0、C18∶1、C24∶1、C22∶6、C18∶2和C20∶3(順8,11,14)的影響沒有達到顯著程度(P>0.05)外，對其他脂肪酸的影響都達到顯著程度(P<0.05)；魚油除了對C20∶0、C24∶0、γC18∶3和C20∶2的影響沒有達到顯著程度(P>0.05)外，對其他脂肪酸的影響都達到顯著程度(P<0.05)；亞麻籽和魚油對肝臟C18∶0、C22∶0、C24∶0、C16∶1、C20∶1、C18∶3、C22∶5、C22∶6、C20∶4和C20∶3比例的互作影響達到顯著程度(P<0.05)。

2.4 肝臟脂肪酸延長酶和去飽和酶基因表達水平比較

表4 不同組間蛋黃n-3多不飽和脂肪酸含量比較

同行數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同字母或者無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same letter or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表5 不同組間蛋雞肝臟脂肪酸組成比較

續(xù)表5項目Items對照組Controlgroup試驗Ⅰ組TrialgroupⅠ試驗Ⅱ組TrialgroupⅡ試驗Ⅲ組TrialgroupⅢP值(雙因素方差分析)P-value(two-wayANOVA)亞麻籽Flaxseed魚油Fishoil亞麻籽×魚油Flaxseed×fishoil棕櫚一烯酸Palmitoleicacid(C16∶1)3.89±0.68a1.55±0.31c1.75±0.31bc2.33±0.48b<0.0010.0110.003油酸Oleicacid(C18∶1)37.88±2.47a34.76±1.77b27.50±1.78c27.49±1.14c0.058<0.0010.220二十碳烯酸Eicosenoicacid(C20∶1)0.19±0.01c0.17±0.03c0.67±0.10b0.80±0.03a0.006<0.0010.040山崳一烯酸Cetoleicacid(C22∶1)NDNDNDND二十四碳烯酸Tetracosenoicacid(C24∶1)0.24±0.05b0.27±0.05b0.68±0.06a0.73±0.09a0.601<0.0010.159n-3多不飽和脂肪酸n-3PUFA0.79±0.10d5.01±0.16c9.64±0.68a8.59±1.15b<0.001<0.0010.001α-亞麻酸ALA(C18∶3)NDc2.79±0.10a2.59±0.15bNDc<0.0010.0420.042二十碳五烯酸EPA(C20∶5)NDc0.15±0.01b0.88±0.23a0.68±0.11a0.023<0.0010.781二十二碳五烯酸DPA(C22∶5)NDd0.21±0.04c0.48±0.11b0.83±0.05a0.033<0.001<0.001二十二碳六烯酸DHA(C22∶6)0.79±0.10d1.86±0.10c5.88±0.27b7.08±1.03a0.602<0.0010.001n-6多不飽和脂肪酸n-6PUFA11.53±1.03a12.29±0.71a9.09±0.48b9.63±0.70b0.771<0.0010.112亞油酸Linoleicacid(C18∶2)11.53±1.03a11.90±0.72a8.70±0.48b8.79±0.70b0.958<0.0010.371γ-亞麻酸γ-Linolenicacid(C18∶3)NDc0.15±0.02a0.13±0.01bNDc<0.0010.0650.065二十碳四烯酸Arachidonicacid(C20∶4)NDd0.24±0.02c0.52±0.04b0.84±0.06a0.018<0.001<0.001其他多不飽和脂肪酸OtherPUFA二十碳二烯酸Eicosadienoicacid(C20∶2)0.23±0.03b0.29±0.02a0.25±0.04b0.23±0.02b0.0170.1970.092二十碳三烯酸(順8,11,14)Allcis8,11,14-eicosatrienoicacid(C20∶3)0.63±0.07a0.46±0.16ab0.44±0.12b0.30±0.06b0.7580.0060.021二十碳三烯酸(順11,14,17)Allcis11,14,17-eicosatrienoicacid(C20∶3)0.18±0.02b0.34±0.09a0.23±0.02b0.19±0.02b0.0020.0450.018

圖1 肝臟脂肪酸延長酶與去飽和酶基因表達水平比較

雙因素方差分析顯示，飼糧添加亞麻籽、魚油對ELOVL1、ELOVL2、FADS1、FADS2和SCD1基因表達水平的影響都達到顯著程度(P<0.05)；亞麻籽和魚油對ELOVL1和SCD1基因表達水平的互作影響沒有達到顯著程度(P>0.05)，對其他基因表達水平的影響達到顯著程度(P<0.05)。

3 討 論

3.1 亞麻籽、魚油飼糧對蛋黃n-3多不飽和脂肪酸的富集作用

亞麻籽、魚油和藻類是畜禽產(chǎn)品中n-3多不飽和脂肪酸的主要飼糧來源[13]。亞麻籽可以為家禽飼糧提供蛋白質(zhì)、油脂和α-亞麻酸，利用其生產(chǎn)富含n-3多不飽和脂肪酸的雞蛋已經(jīng)得到許多國家市場認可[14]，可使每枚雞蛋ALA含量增加至200 mg，DHA含量增加至90 mg[15-16]。魚油以富含DHA和EPA為主，飼糧添加魚油可以直接富集DHA和EPA[17-19]，但因容易產(chǎn)生魚腥味在很多國家不被接受，其添加量被控制在1.5%以下，DHA富集程度只能到每枚蛋100 mg[20-21]。經(jīng)過微囊包被或除臭處理的魚油，對蛋品質(zhì)負面影響依然存在[22]。微藻類則主要富含DHA，商品名為“DHA金”的異養(yǎng)型微藻能夠獲得更大程度富集n-3長鏈多不飽和脂肪酸[13]，飼糧添加4.8%“DHA金”可使蛋中DHA含量增加到200 mg以上，蛋品風味仍然處于可接受程度[23]。

本試驗結(jié)果顯示，普通飼糧添加5%魚油使蛋黃中以DHA和EPA沉積為主(試驗Ⅲ組)；10%亞麻籽飼糧使蛋黃以沉積ALA和DHA為主(試驗Ⅰ組)；10%亞麻籽+5%魚油飼糧使蛋黃仍以沉積DHA和ALA為主(試驗Ⅱ組)，n-3多不飽和脂肪酸沉積總量比單純10%亞麻籽飼糧或5%魚油飼糧都有所增加。其中，普通飼糧添加5%魚油使蛋黃DHA含量增加10倍，折合鮮蛋DHA含量最高到達每枚200 mg以上，屬于現(xiàn)有研究較高水平。

表6 脂肪酸延長酶和去飽和酶基因表達水平的雙因素方差分析

從飼糧組成分析來看，試驗Ⅰ組和對照組飼糧的DHA比例接近，但在DHA沉積上存在顯著差異，說明飼喂單純亞麻籽飼糧的蛋黃DHA主要來源于亞麻酸體內(nèi)轉(zhuǎn)化；試驗Ⅱ組飼糧n-3多不飽和脂肪酸比例總和與DHA比例同為最高，但蛋黃富集DHA程度卻低于試驗Ⅲ組，即試驗Ⅱ組蛋黃DHA含量僅處于試驗Ⅰ組和Ⅲ組之間。從雙因素方差分析看，亞麻籽、魚油對4種n-3多不飽和脂肪酸沉積的影響都達到顯著程度，并且存在顯著性互作效應。這種互作效應對不同種n-3多不飽和脂肪酸表現(xiàn)不同，對總量有促進作用，但未達到疊加效應程度；對EPA和DHA沉積有抑制作用，表現(xiàn)互作組沉積量低于單獨添加5%魚油組。

此現(xiàn)象說明，飼糧不同n-3多不飽和脂肪酸之間在吸收、轉(zhuǎn)化過程可能存在相互影響，沉積總量仍取決于飼糧組成特點。Cachaldora等[24]通過提高飼糧ALA含量和EPA/DHA值研究發(fā)現(xiàn)，過量長鏈n-3多不飽和脂肪酸可以抑制ALA轉(zhuǎn)化生成DHA過程。Lemahieu等[11]研究指出，不同n-3脂肪酸的生物活性不同，魚油和亞麻籽n-3脂肪酸組成差異將導致其組織沉積效果不同?？梢酝茰y，一方面隨DHA含量增加可能反饋性抑制ALA向DHA轉(zhuǎn)化過程，另一方面隨ALA轉(zhuǎn)化DHA過程加強可能抑制DHA直接吸收沉積，具體機制有待從吸收、轉(zhuǎn)化2個層次展開深入研究。

3.2 亞麻籽、魚油飼糧對蛋雞肝臟脂肪酸代謝的調(diào)控作用

肝臟是禽類脂肪酸代謝主要器官。無論添加魚油還是添加亞麻籽，都增加了肝臟長鏈n-3多不飽和脂肪酸比例，魚油增加了飽和脂肪酸比例、對亞麻籽沒有影響。結(jié)合飼糧組成特點可以推測，魚油對機體長鏈不飽和脂肪酸從頭合成有抑制作用，但可以從飼糧吸收相對較多DHA等n-3多不飽和脂肪酸。而亞麻籽主要能夠激活脂肪酸延長

酶和去飽和酶基因表達，促進長鏈不飽和脂肪酸的體內(nèi)合成過程，但直接從飼糧吸收DHA等長鏈n-3多不飽和脂肪酸相對較少。這與蛋黃DHA沉積規(guī)律一致，說明亞麻籽和魚油對蛋雞脂肪酸代謝途徑具有不同的調(diào)控作用。

如圖2所示，體內(nèi)存在n-3和n-6 2種不飽和脂肪酸代謝途徑，都是在碳鏈延長酶和去飽和酶催化作用下完成[25]。其中，Δ6去飽和酶主要在C18和C24不飽和脂肪酸的第6位和7位特異性引入雙鍵，Δ5去飽和酶主要在C20不飽和脂肪酸的第5位和6位引入雙鍵，使C—C單鍵轉(zhuǎn)換成C=C形成更高程度不飽和脂肪酸；碳鏈延長酶ELOVL1催化C22不飽和脂肪酸碳鏈延長，ELOVL2催化C20和C22脂肪酸碳鏈延長，形成長鏈不飽和脂肪酸[26-29]。2種代謝途徑的底物和終產(chǎn)物不同，n-6途徑以亞油酸為底物、以DPA為終產(chǎn)物，n-3途徑以ALA為底物、以DHA為終產(chǎn)物，它們通過共同中間產(chǎn)物和催化酶發(fā)生交叉聯(lián)系。

圖2 飼糧中n-3和n-6多不飽和脂肪酸在肝臟的代謝途徑

在本研究中，亞麻籽富含ALA等n-3途徑合成底物，并表現(xiàn)促進脂肪酸延長酶和去飽和酶基因表達；而魚油含有DHA等n-3途徑終產(chǎn)物，表現(xiàn)抑制脂肪酸延長酶和去飽和酶基因表達。這進一步說明，魚油飼糧以DHA、EPA等n-3多不飽和脂肪酸直接吸收沉積為主，亞麻籽以DHA的從頭合成為主。結(jié)合雙因素方差分析結(jié)果可以推測，魚油對肝臟自身脂肪酸轉(zhuǎn)化代謝有顯著抑制作用，機體組織脂肪酸組成更多取決于飼糧組成；亞麻籽能夠激活肝臟自身脂肪酸轉(zhuǎn)化代謝，促進體內(nèi)n-3多不飽和脂肪酸合成途徑。

4 結(jié) 論

① 飼糧添加亞麻籽或魚油可使蛋黃n-3多不飽和脂肪酸富集沉積，沉積總量以同時添加10%亞麻籽和5%魚油的飼糧組為最高。

② 蛋黃DHA沉積以飼糧添加5%魚油效果最佳，折合鮮蛋DHA含量在每枚200 mg以上，屬于同類研究較高水平。

③ 飼糧添加亞麻籽促進肝臟ALA轉(zhuǎn)化生成DHA作用，主要表現(xiàn)為上調(diào)脂肪酸延長酶和去飽和酶基因表達；添加魚油后對上述過程有明顯抑制作用，表現(xiàn)為下調(diào)相關(guān)基因表達。

[1] GOGUS U,SMITH C.n-3 omega fatty acids:a review of current knowledge[J].International Journal of Food Science and Technology,2010,45(3):417-436.

[2] SIRIWARDHANA N, KALUPAHANA N S, MOUSTAID-MOUSSA N.Health benefits of n-3 polyunsaturated fatty acids:eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid[J].Advances in Food and Nutrition Research,2012,65:211-222.

[3] 朱玲嬌.禽蛋磷脂組成及其結(jié)構(gòu)特點分析研究[D].碩士學位論文.武漢:華中農(nóng)業(yè)大學,2013:82-84.

[4] 秦德元,張鵬.酶法合成EPA/DHA型卵磷脂[J].中國油脂,2004,29(9):45-47.

[5] SCHARITER J A,PACHUSKI J,FRIED B,et al.Determination of neutral lipids and phospholipids in the cercariae ofSchistosomamansoniby high performance thin layer chromatography[J].Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies,2002,25(10/11):1615-1622.

[6] STILLWELL W,EHRINGER W,JENSKI L J.Docosahexaenoic acid increases permeability of lipid vesicles and tumor cells[J].Lipids,1993,28(2):103-108.

[7] SHIROUCHI B,NAGAO K,INOUE N,et al.Effect of dietary omega 3 phosphatidylcholine on obesity-related disorders in obese otsuka long-evans tokushima fatty rats[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2007,55(17):7170-7176.

[8] 馬琴.二十二碳六烯酸—磷脂生物活性的研究[D].碩士學位論文.青島:中國海洋大學,2009:77.

[9] ISHIGAMORI H,HOSOKAWA M,KOHNO H,et al.Docosahexaenoic acid-containing phosphatidylethanolamine enhances HL-60 cell differentiation by regulation of c-jun and c-myc expression[J].Molecular and Cellular Biochemistry,2005,275(1/2):127-133.

[10] 楊玉紅,王靜鳳,龍騰騰,等.磷脂型DHA對腫瘤細胞凋亡的影響[J].中國藥理學通報,2011,27(2):178-182.

[11] LEMAHIEU C,BRUNEEL C,RYCKEBOSCH E,et al.Impact of different omega-3 polyunsaturated fatty acid (n-3 PUFA) sources (flaxseed,Isochrysisgalbana,fish oil and DHA Gold) on n-3 LC-PUFA enrichment (efficiency) in the egg yolk[J].Journal of Functional Foods,2015,19:821-827.

[12] CHRISTIE W W.Preparation of ester derivatives of fatty acids for chromatographic analysis[M]//CHRISTIE W W.Advances in Lipid Methodology.Dundee:Oily Press,1993:69-119.

[13] FRAEYE I,BRUNEEL C,LEMAHIEU C,et al.Dietary enrichment of eggs with omega-3 fatty acids:a review[J].Food Research International,2012,48(2):961-969.

[14] SURAI P F,SPARKS N H C.Designer eggs:from improvement of egg composition to functional food[J].Trends in Food Science & Technology,2001,12(1):7-16.

[15] AYMOND W M,VAN ELSWYK M E.Yolk thiobarbituric acid reactive substances and n-3 fatty acids in response to whole and ground flaxseed[J].Poultry Science,1995,74(8):1388-1394.

[16] BEAN L D,LEESON S.Long-term effects of feeding flaxseed on performance and egg fatty acid composition of brown and white hens[J].Poultry Science,2003,82(3):388-394.

[17] BOVET P,FAEH D,MADELEINE G,et al.Decrease in blood triglycerides associated with the consumption of eggs of hens fed with food supplemented with fish oil[J].Nutrition,Metabolism,and Cardiovascular Diseases,2007,17(4):280-287.

[18] CACHALDORA P,GARCA-REBOLLA P,ALVAREZ C,et al.Effect of type and level of fish oil supplementation on yolk fat composition and n-3 fatty acids retention efficiency in laying hens[J].British Poultry Science,2006,47(1):43-49.

[19] CARRILLO S,LPEZ E,CASAS M M,et al.Potential use of seaweeds in the laying hen ration to improve the quality of n-3 fatty acid enriched eggs[J].Journal of Applied Phycology,2008,20(5):721-728.

[20] GONZALEZ-ESQUERRA R,LEESON S.Effect of feeding hens regular or deodorized menhaden oil on production parameters,yolk fatty acid profile,and sensory quality of eggs[J].Poultry Science,2000,79(11):1597-1602.

[21] VAN ELSWYK M E.Comparison of n-3 fatty acid sources in laying hen rations for improvement of whole egg nutritional quality:a review[J].British Journal of Nutrition,1997,78(1):S61-S69.

[22] LAWLOR J B,GAUDETTE N,DICKSON T,et al.Fatty acid profile and sensory characteristics of table eggs from laying hens fed diets containing microencapsulated fish oil[J].Animal Feed Science and Technology,2010,156(3/4):97-103.

[23] HERBER-MCNEILL S M,VAN ELSWYK M E.Dietary marine algae maintains egg consumer acceptability while enhancing yolk color[J].Poultry Science,1998,77(3):493-496.

[24] CACHALDORA P,GARCA-REBOLLAR P,ALVAREZ C,et al.Double enrichment of chicken eggs with conjugated linoleic acid and n-3 fatty acids through dietary fat supplementation[J].Animal Feed Science and Technology,2008,144(3/4):315-326.

[25] QIU X.Biosynthesis of docosahexaenoic acid (DHA,22:6-4,7,10,13,16,19):two distinct pathways[J].Prostaglandins,Leukotrienes and Essential Fatty Acids,2003,68(2):181-186.

[26] JAKOBSSON A,WESTERBERG R,JACOBSSON A.Fatty acid elongases in mammals:their regulation and roles in metabolism[J].Progress in Lipid Research,2006,45(3):237-249.

[27] 孫曉艷,林艷麗,熊福銀,等.二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的生物合成途徑研究進展[J].生物技術(shù)通訊,2012,23(5):755-758.

[28] SCHACKMANN M J,OFMAN R,DIJKSTRA I M,et al.Enzymatic characterization of ELOVL1,a key enzyme in very long-chain fatty acid synthesis[J].Biochimica et Biophysica Acta (BBA)：Molecular and Cell Biology of Lipids,2015,1851(2):231-237.

[29] ROSERO D S,BOYD R D,ODLE J,et al.Optimizing dietary lipid use to improve essential fatty acid status and reproductive performance of the modern lactating sow:a review[J].Journal of Animal Science and Biotechnology,2016,7:34.

*Corresponding author, professor, E-mail: xzwfyz@sina.com

(責任編輯 田艷明)

Effects of Dietary Flaxseed and Fish Oil on n-3 Polyunsaturated Fatty Acid Content in Egg Yolk and Fatty Acid Metabolism in Liver of Hens

DENG Bo1MEN Xiaoming1ZHU Dongrong2TAO Xin1YAO Yunxin2XU Ziwei1*

(1.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryScience,ZhejiangAcademyofAgriculturalSciences,Hangzhou310021,China; 2.ZhejiangEggBioscienceCo.,Inc.,Changxing313100,China)

This experiment was conducted to investigate the effects of dietary flaxseed and fish oil on n-3 polyunsaturated fatty acid content in egg yolk, fatty acid composition and fatty acid biosynthesis gene expression in liver of hens. Ninety-six Hyline Brown hens were divided into 4 groups with 24 hens per group. Hens in the control group were fed a basal diet, and those in trial groups were fed the basal diet+10% flaxseed, the basal diet+10% flaxseed+5% fish oil, and the basal diet+5% fish oil, respectively. Eggs were collected for 7 days after 21 days feeding, and then 4 hens in each group were slaughtered for samples. The results showed as follows, compared with control group, 1) dietary flaxseed and fish oil significantly increased the n-3 polyunsaturated fatty acid contents in yolk (P<0.05), and contents of docosahexaenoic acid (DHA) and timnodonic acid were the highest in yolk affected by dietary fish oil. 2) The liver monounsaturated fatty acid ratios were significantly decreased (P<0.05), and the liver n-3 polyunsaturated fatty acid ratios were significantly increased (P<0.05) in all trial groups. 3) Dietary fish oil significantly decreased gene expressive levels of ELOVL fatty acid elongase 1, ELOVL fatty acid elongase 2 and fatty acid desaturase such as fatty acid desaturase 1, fatty acid desaturase 2 and stearoyl CoA desaturase 1 (P<0.05). In conclusion, dietary flaxseed or fish oil can concentrate n-3 polyunsaturated fatty acid content in yolk of hens. Dietary flaxseed can promote generation process from α-linolenic acid to DHA, exhibiting up-regulating expressive levels of fatty acid elongase and desaturase genes. Dietary fish oil presented contrary results to flaxseed.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(8)：2751-2761]

flaxseed; fish oil; n-3 polyunsaturated fatty acids; DHA; egg yolk

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.08.018

2017-03-31

浙江省重點科技創(chuàng)新團隊項目(2011R50025-1)

鄧 波(1972—)，男，黑龍江呼蘭人，副研究員，碩士，從事動物營養(yǎng)與飼料研究。E-mail： hljdengbo@126.com

*通信作者:徐子偉，研究員，博士生導師，E-mail： xzwfyz@sina.com

S816.7

A

1006-267X(2017)08-2751-11