馬鈴鄉(xiāng)香菇主要病害調(diào)查及防治方法的篩選

張儒令 安鳳穎 王琪

摘要[目的]明確馬鈴鄉(xiāng)香菇的主要病害并篩選防治方法。[方法]調(diào)查馬鈴鄉(xiāng)香菇主要病害的發(fā)生情況，并篩選主要病害的室內(nèi)藥劑。[結(jié)果]該基地香菇病害主要是木霉病，經(jīng)鑒定是康氏木霉（Trichoderma koningii）和長枝木霉（T. longibrachiatum），兩者發(fā)病率達66%，病情指數(shù)為24。實驗室藥劑篩選試驗結(jié)果表明：混合液（生石灰∶硫酸鈣∶鹽∶水=5∶1∶1∶100）能同時抑制木霉生長和產(chǎn)孢，可有效控制木霉的發(fā)生與擴散，但同時也抑制香菇的菌絲生長，不適宜用來防治菌袋中的木霉菌，可用于噴施培養(yǎng)菌袋所在的土壤、器具等，減少木霉菌感染菌袋的機會；1.000%的大蒜稀釋液效果最理想，可有效抑制木霉生長，同時對香菇生長抑制率很低，對香菇產(chǎn)量影響較小。[結(jié)論]研究結(jié)果為香菇病害的防治提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞香菇；病害；木霉菌；大蒜稀釋液；防治方法

中圖分類號S436.46+1文獻標識碼

A文章編號0517-6611（2017）17-0133-03

Abstract[Objective] The aim was to clear main diseases of mushroom in Maling County and screen control methods. [Method] We investigated occurrence of main diseases of mushroom in Maling County and screen control methods. [Result] The main diseases of mushroom in Maling County was wood mildew， and were identified as Trichoderma koningii and T. longibrachiatum， and their disease rate and disease index reached 66% and 24， respectively. The mixture of quick lime： calcium sulphate∶sult∶water （5∶1∶1∶100） could inhibit growth and spore production of Trichoderma sp.， but could inhibit the mycelial growth of mushroom at the same time， so it was not suitable to control Trichoderma sp. in fungus bag， and could be used to spray the soil and instruments so as to reduce the infection chance of fungus bag by Trichoderma sp.. The 1.000% of garlic diluent not only could inhibit the growth of Trichoderma sp.， but also had little influence on mushroom， so it had the best effect. [Conclusion] The results provide theoretical basis for the control of mushroom diseases.

Key wordsMushroom；Diseases；Trichoderma sp.；Garlic diluent；Control methods

作者簡介張儒令（1983—），男，貴州銅仁人，助教，農(nóng)業(yè)推廣碩士，從事農(nóng)產(chǎn)品加工與質(zhì)量安全檢測研究。

收稿日期2017-03-03

香菇病害防治堅持“預防為主，綜合防治”原則，采用農(nóng)業(yè)防治、物理防治，必要時輔以化學防治[1]。香菇是我國傳統(tǒng)的出口拳頭產(chǎn)品，但香菇中甲醛和重金屬砷、鉛及多菌靈、二氧化硫等超限，使我國香菇出口屢屢受挫。使生產(chǎn)者和經(jīng)營商蒙受巨大經(jīng)濟損失。因此，當務(wù)之急是強化無公害生產(chǎn)，糾正香菇生產(chǎn)中操作不科學、管理不當?shù)淖龇ǎ扇「踩侠淼姆乐未胧?，使產(chǎn)品達到出口要求，突破“壁壘”。

據(jù)調(diào)查，木霉病在馬鈴鄉(xiāng)是常見香菇病害，通常造成減產(chǎn)甚至絕收。但目前關(guān)于馬鈴鄉(xiāng)食用菌上木霉菌主要種類的研究鮮見報道。鑒于此，筆者對該地區(qū)食用菌生產(chǎn)中分離的木霉菌進行了分類鑒定，并研究了大蒜提取液中的含硫活性成分對青霉、曲霉、根霉、木霉4種食用菌競爭性雜菌的抑制作用，以期為香菇病害的防治提供參考。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試菌種。

病原菌分離自貴州省貴陽市花溪區(qū)馬鈴鄉(xiāng)天齊食用菌基地病害菌袋；香菇菌種是貴州省花溪區(qū)馬鈴鄉(xiāng)天齊食用菌基地購得的二級種子菌包。

1.1.2主要試劑。

大蒜提取物（2%大蒜素、5%蒜氨酸，綠康生物科技有限公司）、生姜提取物（10%姜辣素，綠康生物科技有限公司）、99.9%灰黃霉素原粉（晨藝生物科技有限公司），40%多菌靈懸浮劑（藍豐生物化工股份有限公司），生石灰（國藥集團）、硫酸鈣（國藥集團）、氯化鈉（國藥集團）。

1.1.3培養(yǎng)基。

馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）：馬鈴薯200.0 g、蔗糖20.0 g、瓊脂20.0 g、水1 000 mL，pH自然。馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨5.0 g、葡萄糖10.0 g、磷酸二氫鉀1.0 g、七水硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.5 g、瓊脂20.0 g、1/3 000孟加拉紅溶液100 mL，蒸餾水800 mL，pH自然，臨用前加入0.03%鏈霉素稀釋液100 mL[2]。

1.2方法

1.2.1香菇病害調(diào)查與鑒定。

1.2.1.1香菇病害調(diào)查。

花溪馬鈴鄉(xiāng)天齊食用菌基地大棚調(diào)查：選擇2個大棚，每個大棚采用5點取樣法，每個點調(diào)查10個菌袋，對發(fā)病種類、發(fā)病率和主要病害嚴重度分別進行調(diào)查并詳細記錄結(jié)果。發(fā)病率和病情指數(shù)計算公式如下[3]：

1.2.1.2香菇綠霉病病原鑒定。

取2個受害嚴重且癥狀不同的香菇菌包，先各用75%乙醇局部處理1 min，用紫外燈處理20 min，用滅過菌的刀切開處理部位，用接種針挑取少量帶病菌的基質(zhì)接種于馬丁氏瓊脂平板培養(yǎng)基上，分別定為XL-1和XL-2菌株，定時觀察生長情況，如無污染可轉(zhuǎn)至PDA斜面保存?zhèn)溆茫缬须s菌污染需重新分離，直到分離到病原的純系為止[4]。 將XL-1和XL-2斜面純系培養(yǎng)物用無菌水配成一定濃度的孢子懸液（1×106個/mL）， 接種（1 mL/個）于無雜菌污染生長良好的香菇菌包上，每個菌株設(shè)3個重復，培養(yǎng)60 d后觀察結(jié)果。將低溫保存的XL-1和XL-2菌株活化后接種于PDA平板培養(yǎng)基上，定時對菌落形態(tài)和顯微特征進行觀察記錄，并進行菌種鑒定。

1.2.2XL-1的室內(nèi)藥劑篩選。

1.2.2.1菌種激活。 取出低溫保存的XL-1和香菇菌種進行活化，分別接種于10支PDA平面培養(yǎng)基上，27 ℃恒溫培養(yǎng)備用。

1.2.2篩選藥劑的配制。

大蒜稀釋液濃度梯度[3]：0.125%、0.250%、0.500%、1.000%、1.250%。生姜稀釋液濃度梯度：0.125%、0.250%、0.500%、1.000%、1.250%?；尹S霉素濃度梯度：30、60、90、120、150 mg/L。40%多菌靈施藥濃度：0.125%。混合液（生石灰∶硫酸鈣∶鹽∶水=5∶1∶1∶100）。

用移液槍分別吸取1 mL藥劑于無菌的培養(yǎng)皿（直徑9 cm）中，再倒入50 ℃的PDA培養(yǎng)基充分混勻，冷卻后制成含藥平板培養(yǎng)基。每個處理設(shè)3個重復，并用清水做空白對照。使用打孔器（直徑5 mm）分別對香菇平板培養(yǎng)物（培養(yǎng)10 d）和XL-1平板培養(yǎng)物（培養(yǎng)4 d）進行打孔，用打好的菌餅作為接種物，接種于含各藥平板培養(yǎng)基中心位置，蓋好皿蓋后27 ℃恒溫培養(yǎng)，接種24 h后，每天定時觀察記錄菌落直徑大小和菌落特征，菌落以十字交叉法求直徑均值，并計算抑菌率[5]。

2結(jié)果與分析

2.1香菇病害調(diào)查結(jié)果

2.1.1病害種類。經(jīng)調(diào)查，該基地栽培的香菇主要病害種類包括木霉病、根霉病、青霉病、長毛霉病。

2.1.2木霉病的發(fā)病率與嚴重度。

總調(diào)查株數(shù)100株，0級株數(shù)34株，1級株數(shù)15株，2級株數(shù)30株，3級株數(shù)15株，4級株數(shù)6株，5級株數(shù)0株。發(fā)病率為66%，病情指數(shù)為24。

2.1.3回接驗證結(jié)果。

通過分離和回接試驗，6個菌袋均呈現(xiàn)墨綠色，表面綠色菌絲，部分出現(xiàn)黑色斑點，斑點特征與采集標本菌袋斑點一致，證明分離到的XL-1和XL-2是引起香菇木霉病的病原菌。

2.1.4病原鑒定結(jié)果。

通過菌落形態(tài)和顯微特征觀察，結(jié)果表明XL-1在PDA上培養(yǎng)，菌落生長較慢，表面最初為白色、稀疏的菌絲，后期在菌落中間有一圈明顯的產(chǎn)孢區(qū)，邊緣菌絲微放射狀，產(chǎn)孢區(qū)呈綠色、淺綠或黃綠，25 ℃下培養(yǎng)72 h后菌落直徑為5.4 cm，背面無色，稀淺黃色。產(chǎn)孢菌絲分枝對生或輪生，整個產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)清晰。分生孢子綠色，短柱狀或窄橢圓形，長3.9 μm，寬2.4 μm，表面光滑。與康氏木霉 （Trichoderma koningii）的形態(tài)最相近，所以鑒定為康氏木霉[3]。

XL-2在PDA上培養(yǎng)，菌落生長快，初為白色絨狀，后期菌落中部不規(guī)則產(chǎn)孢，顏色為淺綠或深綠，25 ℃下培養(yǎng)72 h后菌落直徑超過8.8 cm，背面綠色。孢子梗以眾多小叢束分布于菌落表面上。分生孢子梗主枝較長，基部有次級分枝，直角伸出。瓶梗細葫蘆形，略呈彎曲狀，基部常略收縮或不收縮，在孢子梗及分枝上部，不規(guī)則單生，或不規(guī)則著生于孢子梗上。分生孢子灰綠色，倒卵形或橢圓形，長4.5 μm，寬2.7 μm，表面光滑，與長枝木霉（T. longibrachiatum）的形態(tài)最相近，所以鑒定為長枝木霉[3]。

2.2藥劑篩選結(jié)果

2.2.1各藥劑對木霉的抑菌率。

采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。由表1可知，1.000%大蒜、1.250%大蒜、混合液、多菌靈的抑菌效果要明顯優(yōu)于其他藥劑處理。其中，多菌靈的抑菌效果最好，可達100%，但化學藥劑的施用對香菇生產(chǎn)、香菇品質(zhì)和環(huán)境的危害嚴重，不宜選用。而1000%大蒜、1.250%大蒜、混合液三者抑菌效果差異并不顯著，結(jié)合對香菇的抑菌試驗結(jié)果和經(jīng)濟節(jié)約的原則，1.000%大蒜是最理想的木霉抑菌劑，抑制率在90%以上。

2.2.2篩選藥劑對木霉產(chǎn)孢的影響。

菌落生長72 h觀察菌落表面白色孢子，與空白對比菌落表面白色顆粒狀孢子量。1.000%大蒜、1.250%大蒜、混合液（生石灰∶硫酸鈣∶鹽∶水=5∶1∶1∶100）對木霉產(chǎn)孢量的抑制作用要明顯高于其他試劑，能有效抑制木霉孢子產(chǎn)量，對病原的傳播有一定的控制作用。

2.3篩選藥劑對香菇生長的影響

由表2可知，1.000%、0500%、0.250%、0.125%大蒜的平均抑菌率低于5%，抑制效果不顯著。1.250%大蒜的抑制效果顯著，抑菌率為2247%。混合液、150 mg/L灰黃霉素抑制香菇效果顯著，抑制率在90%以上。

3結(jié)論

1.000%大蒜稀釋液抑制木霉產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)、產(chǎn)孢量效果明顯。1.000%大蒜稀釋液抑制木霉菌落生長效果明顯，抑制率在90%以上。1.000%、1.250%大蒜稀釋液以及混合液抑制木霉生長（菌落直徑）效果極顯著。1.000%大蒜稀釋液、0.500%生姜稀釋液對香菇菌生長抑制效果不顯著[6]。

0.125%、0.250%、0.500%、1.000%、1.250%生姜稀釋液明顯抑制木霉產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)，影響木霉菌的傳播感染，但是生姜濃度增加時，雖然抑制木霉生長，但同時也抑制了香菇的生長，不適合用于防治香菇木霉病害。

30、60、90、120、150 mg/L灰黃霉素明顯抑制了木霉產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)，對菌落大小抑制作用不明顯，對香菇生長抑制作用明顯，不適合用于防治香菇木霉病害。

綜上所述，1.000%大蒜稀釋液可有效抑制木霉菌的生長和傳播，對香菇生長抑制作用較小，適合用于防治香菇木霉等病害。該方法成本低，防治效果較好，不帶入污染源，可提高香菇品質(zhì)，提高經(jīng)濟收入。

參考文獻

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