治療奶牛乳房炎的中藥組方工藝研究

尚靜雪 楊海明 孫宏冉

摘要[目的]研究中藥治療奶牛乳房炎的最佳制備工藝。[方法]通過(guò)設(shè)計(jì)，篩選較適宜的粉碎時(shí)間和混合比例；采用薄層色譜法（TLC）建立新中藥組方有效成分的檢測(cè)方法。[結(jié)果]確認(rèn)了該組方最佳制備工藝為粉碎時(shí)間45 min，混合比例為1.0∶1.0∶0.4；確定有效成分中蒲公英、漏蘆、當(dāng)歸、川芎薄層鑒別結(jié)果，供試品色譜中，均在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上出現(xiàn)相同顏色的熒光斑點(diǎn)。[結(jié)論]優(yōu)選粉碎時(shí)間和混合比例是組方制備的安全有效方法。建立的檢測(cè)項(xiàng)可以用于有效成分的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞 本草乳炎清散；奶牛乳房炎；工藝制備；正交試驗(yàn)；薄層色譜法

中圖分類號(hào) R28 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2017）03-0154-03

Abstract[Objective] To study the technology of traditional Chinese medicine in the treatment of mastitis in dairy cows. [Method] Orthogonal test was conducted to screen out suitable grinding time and mixing ratio；TLC method was adopted to establish detection method for effective components in new medicines. [Result] The optimal preparation conditions were crushing time 45 min， mixing ratio 1.0∶1.0∶0.4；TLC identification results of Taraxacum mongolicum， Rhapontisum unflorum， Angelica sinensis， Ligusticum wallichii were determined. Fluorescent spots of the same color appeared in the corresponding position of the control product chromatography. [Conclusion] Optimal grinding time and mixing ratio is a safety and effective method for prescription preparation. Established test items can be used for quality control of effective constituents.

Key words Herbal breast inflammation powder；Cow mastitis；Prescription preparation；Orthogonal test；TLC

奶牛乳房炎是由于細(xì)菌感染或機(jī)械性損傷造成的，引起奶牛一系列病癥，并造成牛奶品質(zhì)下降的奶牛常見(jiàn)病癥。目前，全世界約有2.2億頭奶牛，其中約有1/3左右的奶?；加懈鞣N類型的乳房炎[1]。而在奶牛養(yǎng)殖過(guò)程中，治療奶牛乳房炎通常選擇西藥治療，即抗生素療法，雖然其治療見(jiàn)效快，但因牛奶中容易出現(xiàn)藥物殘留，導(dǎo)致牛奶品質(zhì)下降，造成經(jīng)濟(jì)損失[2]。

本草乳炎清散是針對(duì)奶牛乳房炎開(kāi)發(fā)的新型的中草藥制劑，該制劑尚未在國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)上市銷售。由純中藥組成，成本低廉，使用方便，不易產(chǎn)生耐藥性，毒副作用小，不含任何添加劑，綠色無(wú)殘留[3]，符合自治區(qū)創(chuàng)新型計(jì)劃，推動(dòng)農(nóng)牧業(yè)的發(fā)展和迎接“十三五”規(guī)劃明確的無(wú)抗奶、無(wú)藥奶的要求，可縮短奶牛乳房炎治療病程，提高治療效果，減少奶牛業(yè)經(jīng)濟(jì)損失。該研究依據(jù)中獸藥辯證論治，參照中獸醫(yī)經(jīng)典方劑，擬定以蒲公英為君藥，川芎、當(dāng)歸、漏蘆為臣藥，連翹、路路通、黃芩、白術(shù)、王不留行為佐藥，乳香、沒(méi)藥、皂刺為使藥的中藥復(fù)方散劑。中藥復(fù)方散劑有相同的有效成分、性味歸經(jīng)、功能主治，有效成分比傳統(tǒng)中藥制劑高若干倍，藥性強(qiáng)，藥效作用迅速[4]。筆者以化瘀止痛、消腫通乳為宗旨，通過(guò)正交試驗(yàn)篩選較適宜的粉碎時(shí)間和混合比例，采用薄層色譜法（TLC）建立本草乳炎清散有效成分的檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試材。

蒲公英、皂刺、漏蘆、當(dāng)歸、路路通、連翹、川芎、乳香、沒(méi)藥、黃芩、白術(shù)、王不留行，以上12味藥均為規(guī)范加工炮制的標(biāo)準(zhǔn)藥材飲片，且均符合《中華人民共和國(guó)獸藥典》2010年版第二部標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定[5]。由內(nèi)蒙古蒙吉藥業(yè)科技有限責(zé)任公司提供。

1.1.2 試劑。

甲酸、甲醇、乙酸乙酯，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司生產(chǎn)；醋酸丁酯、環(huán)已烷、丁酮、乙醚、乙醇、正已烷，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 對(duì)照品。

咖啡酸對(duì)照品（批號(hào)110885-200102，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；漏蘆對(duì)照藥材（批號(hào)1209120-201511，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；當(dāng)歸對(duì)照藥材（批號(hào)z0101005，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；川芎對(duì)照藥材（批號(hào)120918-201411，中國(guó)食品藥品檢定研究院）。

1.1.4 儀器。

電子分析天平（型號(hào)BT25S，天津泰斯特儀器有限公司）；pH計(jì)（型號(hào)PHS-3C，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）；數(shù)字恒溫水浴鍋（型號(hào)HH-4，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）；三用紫外分析儀（型號(hào)ZF-1，上海寶山顧村電光儀器廠）；流水式粉碎機(jī)（型號(hào)DX-25，廣州市大祥電子機(jī)械設(shè)備有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 中草藥選擇。

該組方以蒲公英為君藥，川芎、當(dāng)歸、漏蘆為臣藥，另含有連翹、路路通、乳香、沒(méi)藥、皂刺、黃芩、白術(shù)、王不留行，各中草藥功效見(jiàn)表1。

1.2.2 工藝制備。

1.2.2.1 中草藥組方。

蒲公英 30 g、連翹 20 g、黃芩 20 g、王不留行 30 g、路路通 20 g、漏蘆 10 g、當(dāng)歸 20 g、川芎 10 g、白術(shù) 10 g、乳香 10 g、沒(méi)藥 10 g、皂刺 10 g，按處方稱取12味中藥，粉碎，混勻，分裝，密封，即得。

1.2.2.2 單獨(dú)粉碎。

分別稱取蒲公英 30 g、連翹 20 g、黃芩 20 g、王不留行 30 g、路路通 20 g、漏蘆 10 g、當(dāng)歸 20 g、川芎 10 g、白術(shù) 10 g、乳香 10 g、沒(méi)藥 10 g、皂刺 10 g，單獨(dú)粉碎，取出，檢視。

1.2.2.3 全混粉碎。

分別稱取蒲公英 30 g、連翹 20 g、黃芩 20 g、王不留行 30 g、路路通 20 g、漏蘆 10 g、當(dāng)歸 20 g、川芎 10 g、白術(shù) 10 g、乳香 10 g、沒(méi)藥 10 g、皂刺 10 g，混合粉碎，取出，檢視。

1.2.2.4 正交試驗(yàn)。

根據(jù)“1.2.2.2”及“1.2.2.3”的試驗(yàn)結(jié)果，將12味中藥按粉碎情況分4組，分別為蒲公英、連翹、乳香；黃芩、路路通、王不留行；漏蘆、當(dāng)歸、川芎；白術(shù)、皂刺、沒(méi)藥。選取粉碎時(shí)間（A）、混合比例（B）2個(gè)因素，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，其中因素A為粉碎時(shí)間35、45、50 min，因素B為混合比例1.0∶1.0∶0.2、1.0∶1.0∶0.4、1.0∶1.0∶0.6，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，以外觀均勻度、粉末細(xì)度和出粉率為考察指標(biāo)，確定本草乳炎清散最優(yōu)的制備工藝。

1.2.3 有效成分薄層色譜檢測(cè)方法。

1.2.3.1 蒲公英的薄層鑒別。

取本品粉末5 g，加5%甲酸的甲醇溶液20 mL，超聲處理20 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，濾過(guò)，濾液用乙酸乙酯振搖提出2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取咖啡酸對(duì)照品，加甲醇制成0.5 mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸丁酯-甲酸-水（7.0∶2.5∶2.5）的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視[6]。

1.2.3.2 漏蘆的薄層鑒別。

取本品粉末6 g，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。另取漏蘆對(duì)照藥材1 g，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

吸取上述2種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷-丁酮（4∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視[6]。

1.2.3.3 當(dāng)歸的薄層鑒別。

取本品粉末5 g，加乙醚20 mL，超聲處理10 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.5 g，加乙醚20 mL，超聲處理10 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。吸取上述2種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正已烷-乙酸乙酯（4∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈下（365 nm）下檢視[6]。

1.2.3.4 川芎的薄層鑒別。

取本品粉末5 g，加乙醚20 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對(duì)照藥材1 g，加乙醚20 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。吸取上述2種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以正已烷-乙酸乙酯（3∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 工藝研究

2.1.1 單獨(dú)粉碎。

其中蒲公英、皂刺、漏蘆、當(dāng)歸、路路通、連翹、川芎、黃芩、王不留行、白術(shù)10味中藥均可單獨(dú)粉碎，但乳香和沒(méi)藥粉碎不完全，損耗較大。

2.1.2 全混粉碎。

12味中藥全部粉碎，損耗較大，出粉率較低。

2.1.3 正交試驗(yàn)。

由表2可知，各因素對(duì)粉碎效率的影響主次順序?yàn)锳、B，即粉碎時(shí)間影響較大，其次是混合比例；該組方最佳制備工藝為A2B2，即粉碎時(shí)間為45 min，以1.0∶1.0∶0.4為混合比例；方差分析結(jié)果表明，粉碎時(shí)間和混合比例對(duì)工藝制備效果具有顯著的影響。

2.2 有效成分薄層色譜檢測(cè) 由圖1可知，供試品色譜中，蒲公英、漏蘆、當(dāng)歸、川芎均在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上出現(xiàn)相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

3 討論與結(jié)論

單獨(dú)粉碎與混合粉碎是現(xiàn)代散劑制備的主流方法[7]。在該試驗(yàn)制備工藝中，單獨(dú)和全混粉碎發(fā)現(xiàn)乳香、沒(méi)藥不能完全粉碎，損耗較大，導(dǎo)致藥效有所降低。馮崇華[8]將乳香、沒(méi)藥放冷制成小塊后再粉碎成適宜調(diào)劑的制品。該試驗(yàn)將組方中乳香、沒(méi)藥放冰箱冷凍適宜時(shí)間，按一定比例混合粉碎，由正交試驗(yàn)分析可知，混合時(shí)間對(duì)粉碎工藝效果影響較大，其次是粉碎比例；有效解決了乳香、沒(méi)藥黏沖導(dǎo)致的不能完全粉碎的問(wèn)題，確定了最佳的粉碎混合工藝。

含揮發(fā)油較高的、加熱后容易失效的、難溶的藥物適合做成散劑，其有效成分的變化最終影響藥物的臨床療效。本草乳炎清散主要用于治療奶牛乳房炎，具有化瘀止痛、消腫通乳的功能，咖啡酸為方中君藥蒲公英的主要成分，具有抗菌、抗氧化、抗炎以及抗癌等作用[9]；漏蘆具有清熱解毒、活血通乳的功效；當(dāng)歸具有抑菌、抗動(dòng)脈硬化作用；川芎具有活血化瘀、抗炎、抗血小板聚集等藥理作用[10]。因此，該研究中考察的蒲公英、漏蘆、當(dāng)歸和川芎均為本草乳炎清散中治療奶牛乳房炎的主要有效成分，且含量較高。

該研究通過(guò)正交試驗(yàn)確定12味中藥的最佳制備工藝為A2B2，即取處方量的蒲公英、連翹、乳香；黃芩、路路通、王不留行；漏蘆、當(dāng)歸、川芎；白術(shù)、皂刺、沒(méi)藥，且以最佳粉碎時(shí)間45 min，分別將4組以每組1.0∶1.0∶0.4的混合比例放置粉碎機(jī)內(nèi)粉碎，混合。本草乳炎清散工藝的研究為其規(guī)模生產(chǎn)及臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1] 張官祥.奶牛乳房炎引發(fā)的經(jīng)濟(jì)損失[J].農(nóng)業(yè)技術(shù)與裝備，2009（7）：32-33.

[2] 王金君，辛萍萍，孫黎明，等.中藥組方治療奶牛乳房炎效果研究[J].現(xiàn)代畜牧科技，2016（5）：1-2，4.

[3] 韓飛，幸仁匯，陳琳琦，等.中藥抗細(xì)菌耐藥性的研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志，2016，41（5）：813-817.

[4] 邵進(jìn)明，梁光義.中藥復(fù)方研究方法綜述[J].貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，29（4）：56-57.

[5] 中國(guó)獸藥藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)獸藥典：二部[S].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2011.

[6] 孟超，張鵬飛，楊建龍，等.消炎鎮(zhèn)痛散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立及部分藥效學(xué)研究[J].中央民族大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2016，25（2）：71-76.

[7] 張定堃，楊明，林俊芝，等.中藥散劑的制法研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2014（1）：21-24.

[8] 馮崇華.制乳香、沒(méi)藥粉碎方法的改進(jìn)[J].中成藥，1994（9）：55.

[9] 劉明江，宋世秀，蔣小玉，等.咖啡酸抗LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞炎性損傷的調(diào)節(jié)機(jī)制[C]//中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2013年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集.北京：中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)，2013.

[10] 金玉青，洪遠(yuǎn)林，李建蕊，等.川芎的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中藥與臨床，2013，4（3）：44-48.