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    核桃粕多肽酸乳飲料穩(wěn)定劑配方優(yōu)化及性能表征

    2019-05-07 08:14:30楊媛媛潘建龍宴正明張潤(rùn)光張有林
    食品與發(fā)酵工業(yè) 2019年8期
    關(guān)鍵詞:乳飲料穩(wěn)定劑多肽

    楊媛媛,潘建龍,宴正明,張潤(rùn)光,張有林*

    1(陜西師范大學(xué) 食品工程與營(yíng)養(yǎng)科學(xué)學(xué)院,陜西 西安,710000)2(安康市瀛天生態(tài)農(nóng)林開發(fā)有限公司,陜西 安康,725000) 3(陜西省林業(yè)科學(xué)研究院,陜西 西安,710000)

    核桃(JuglansregiaL.)是胡桃科核桃屬植物,為世界四大干果之一。核桃仁中蛋白質(zhì)含量高達(dá)15%~25%,具有健胃、補(bǔ)血、潤(rùn)肺、養(yǎng)神等功效,被稱為是天然營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)品[1-2]。核桃仁冷榨取油后的副產(chǎn)物核桃粕中蛋白質(zhì)含量高達(dá)54%[3],但目前未得到充分利用,造成資源浪費(fèi)。乳酸菌發(fā)酵食品具有降低血糖,調(diào)節(jié)腸胃,增強(qiáng)免疫等功能[4]。利用乳酸菌發(fā)酵植物蛋白開發(fā)集蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與乳酸菌保健功能于一體的新型發(fā)酵飲料,可成為開發(fā)利用核桃的一種新途徑。

    關(guān)于酸性植物蛋白飲料的研究有諸多報(bào)道,王才華等[5]對(duì)大豆蛋白乳酸菌飲料的制備工藝進(jìn)行了研究;李博等[6]選育出一株蛋白酶活性高,發(fā)酵活力好的乳桿菌株用于制備花生酸乳。酸性蛋白飲料中蛋白質(zhì)易沉淀,目前主要通過添加穩(wěn)定劑解決這一問題。不同穩(wěn)定劑對(duì)酸乳體系的性質(zhì)、產(chǎn)品的口感影響很大,實(shí)際生產(chǎn)中添加單一穩(wěn)定劑效果很不理想,往往需要復(fù)配使用[7]。NTAZINDA等[8]研究,將羧甲基纖維素鈉和可溶性大豆多糖復(fù)配,有效降低了沉淀率和平均粒徑,改善了產(chǎn)品的口感。KIANI等[9]將結(jié)冷膠與果膠復(fù)配,極大延長(zhǎng)了酸性乳飲料的貨架期。LIU等[10]將可溶性大豆多糖和果膠復(fù)配,結(jié)果表明果膠的加入限制了可溶性大豆多糖吸附到酪蛋白上,不利于酸乳的穩(wěn)定。因此復(fù)配穩(wěn)定劑效果不一,需進(jìn)一步驗(yàn)證。本試驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上篩選出生產(chǎn)核桃粕多肽酸乳飲料理想的單一穩(wěn)定劑羧甲基纖維素鈉(sodium carboxymethyl cellulose,CMC-Na)、高酯果膠(high methoxyl pectin,HMP)和阿拉伯膠(gum arabic,GA),進(jìn)行單因素和正交試驗(yàn),并通過測(cè)定產(chǎn)品流變學(xué)特性、觀察微觀結(jié)構(gòu)變化和感官鑒評(píng),確定最佳復(fù)配方案,旨在為復(fù)合穩(wěn)定劑的研究提供理論基礎(chǔ),為核桃粕多肽酸乳飲料的開發(fā)提供技術(shù)參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 材料

    核桃為香菱品種由西安市核桃良種繁育基地提供;風(fēng)味蛋白酶為北京索萊寶科技有限公司產(chǎn)品;乳酸菌發(fā)酵劑為昆山佰生優(yōu)生物科技有限公司產(chǎn)品;CMC-Na為國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品;HMP為丹尼斯克(上海)公司產(chǎn)品;GA為鄭州裕和食品添加劑有限公司產(chǎn)品;白砂糖、牛奶為市售。以上材料均為食品級(jí)。

    1.1.2 儀器與設(shè)備

    JM-50型膠體磨,西安永興食品藥化機(jī)械公司;LRH-250生化培養(yǎng)箱由上海一恒科技有限公司;MK3型全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀,美國(guó)熱電公司;AR-G2型流變儀,美國(guó)TA公司;黏度計(jì),美國(guó)Brookfield有限公司;FV1200激光共聚焦顯微鏡,日本奧林巴斯有限公司;BI-90Plus激光粒度儀,美國(guó)布魯克海文儀器公司。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 核桃粕多肽酸乳飲料制備工藝

    1.2.2 操作要點(diǎn)

    (1)乳酸菌的活化及馴化

    參考楊勝敖等[11]的方法。菌種活化:取脫脂乳5 mL,裝于試管,塞口,121 ℃殺菌20 min。冷卻后,加入1 g/L的發(fā)酵劑菌粉,置于37 ℃的恒溫條件下培養(yǎng)12 h。菌種的馴化:采用梯度濃度馴化法,將活化的乳酸菌菌種(接種量為4%)依次接入含核桃酶解液與脫脂乳質(zhì)量比為5∶5、 6∶4、7∶3、8∶2、 9∶1、10∶0 的混合物中,37 ℃培養(yǎng)至凝乳。經(jīng)多次馴化,直至混合菌種生長(zhǎng)良好,凝乳快,才可作為生產(chǎn)發(fā)酵劑。-18 ℃凍藏備用。

    (2)核桃粕酶解液的制備

    酶解:稱取定量核桃粕與沸水按比例1∶12(g∶mL)混合,充分?jǐn)嚢?,待冷卻后加入檸檬酸調(diào)節(jié)pH至6.0,加入風(fēng)味蛋白酶,在50 ℃下保溫水解。

    滅酶:酶解液沸水浴20 min。

    (3)核桃酶解液的發(fā)酵

    在上述制備好的酶解液中加入牛奶、白砂糖、穩(wěn)定劑等,均質(zhì), 70 ℃殺菌30 min,冷卻后接種一定量的乳酸菌發(fā)酵。在4 ℃下冷藏后熟,取樣分析。

    1.2.3 核桃粕多肽酸乳飲料穩(wěn)定性研究

    單因素試驗(yàn):對(duì)前期篩選出的CMC-Na、HMP和GA三種穩(wěn)定劑,考察添加量對(duì)樣品穩(wěn)定性、感官評(píng)分、黏度和粒徑的影響,綜合評(píng)價(jià)各穩(wěn)定劑的效果。

    正交試驗(yàn):在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,通過正交試驗(yàn)對(duì)3種穩(wěn)定劑進(jìn)行復(fù)配,確定出最佳配方。

    1.2.4 穩(wěn)定系數(shù)的測(cè)定

    參考周文化等[12]的方法:離心機(jī)將樣品在3 000 r/min離心10 min,分別取離心后的上清液和核桃粕多肽酸乳飲料,稀釋100倍,在501 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值,穩(wěn)定系數(shù)按公式(1)計(jì)算。

    (1)

    1.2.5 綜合評(píng)分方法

    參考馬永軒等[13]的方法,對(duì)核桃粕多肽酸乳飲料樣品隨機(jī)編號(hào),并分裝到專用品評(píng)杯中,食品專業(yè)的品評(píng)員10名,對(duì)樣品按表1進(jìn)行感官評(píng)分,按公式(2)計(jì)算每個(gè)樣品的綜合評(píng)分值。

    綜合評(píng)分=穩(wěn)定系數(shù)×30%+感官評(píng)分×70%

    (2)

    表1 感官評(píng)分表Table 1 Sensory score sheet

    1.2.6 黏度測(cè)定

    將添加了不同濃度穩(wěn)定劑的核桃粕多肽酸乳飲料樣品攪拌均勻,用黏度計(jì)測(cè)定,設(shè)置轉(zhuǎn)速200 r/min,測(cè)定溫度15 ℃,每個(gè)樣品3次重復(fù)。

    1.2.7 粒徑測(cè)定

    添加不同濃度穩(wěn)定劑的樣品冷藏1d后,利用Brookhaven BI-90 Plus激光粒度分析儀測(cè)定其粒徑分布情況。

    1.2.8 流變學(xué)研究

    參考張雅媛等[14]和CUI等[15]的方法作以下改動(dòng):采用穩(wěn)態(tài)模式,剪切速率0.1~100 s-1,溫度25 ℃,每10 倍頻率取10 個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn),測(cè)定黏度及剪切力隨剪切速率的變化。對(duì)添加復(fù)配穩(wěn)定劑的核桃粕多肽酸乳飲料樣品及未添加穩(wěn)定劑的樣品每次取樣1.5 mL,進(jìn)行流變學(xué)特性研究。

    1.2.9 微觀結(jié)構(gòu)測(cè)定

    參考侯俊杰[16]的方法,將新制備的樣品和儲(chǔ)存7 d的樣品,每毫升加入40 μL尼羅藍(lán)染液對(duì)蛋白質(zhì)染色30 min,在激發(fā)波長(zhǎng)633 nm條件下放大40倍,用激光共聚焦顯微鏡觀察添加復(fù)配穩(wěn)定劑的樣品及未添加穩(wěn)定劑的樣品中蛋白質(zhì)分布及微觀結(jié)構(gòu)。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    采用Excel和Origin 8.5軟件分析和繪圖,并采用Duncan’s進(jìn)行多重比較,試驗(yàn)設(shè)置3次重復(fù),差異顯著水平取0.05。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 CMC-Na、HMP和GA對(duì)核桃粕多肽酸乳飲料品質(zhì)的影響

    不同穩(wěn)定劑添加量對(duì)核桃粕多肽酸乳飲料綜合評(píng)分的影響見圖1。由圖1看出,添加單一穩(wěn)定劑與不添加穩(wěn)定劑相比,綜合評(píng)分均顯著增加(P<0.05)。由圖1-A看出樣品的綜合評(píng)分隨著CMC-Na添加量的增加呈先上升后下降的趨勢(shì),添加量為1.2 g/L時(shí),樣品綜合評(píng)分為78.01。其原因是CMC-Na屬陰離子多糖,在酸性條件下吸附于蛋白質(zhì)表面,該吸附層提供的空間位阻效應(yīng)維持了體系穩(wěn)定,隨著CMC-Na添加量的增加,穩(wěn)定體系被破壞,口感變差[17]。

    圖1 三種穩(wěn)定劑不同添加量對(duì)核桃粕多肽酸乳飲料品質(zhì)的影響Fig.1 Effect of different addition amount of three stabilizers on quality of walnut polypeptide yogurt drink

    由圖1-B看出,樣品的綜合評(píng)分隨著HMP添加量的增加先上升后逐漸趨于平緩,添加量為0.9 g/L時(shí),綜合評(píng)分為80.35,這與NAKAMURA等[18]研究結(jié)果一致,其原因是HMP與蛋白質(zhì)復(fù)合膠粒間的靜電排斥作用維持著酸乳體系穩(wěn)定,添加量太高,會(huì)增加酸乳的黏稠感。由圖1-C可以看出,隨著GA添加量的增加樣品綜合評(píng)分呈先上升后下降,添加量為70 g/L 時(shí),樣品的綜合評(píng)分為80.03,因?yàn)槭窃谒嵝原h(huán)境中GA能夠通過靜電作用與部分蛋白質(zhì)結(jié)合,隨著GA添加量的增加,樣品中會(huì)出現(xiàn)絮凝現(xiàn)象,體系失穩(wěn)。

    2.2 CMC-Na、HMP和GA對(duì)核桃粕多肽酸乳飲料黏度的影響

    3種穩(wěn)定劑的添加量對(duì)核桃粕多肽酸乳飲料黏度的影響見圖2。

    圖2 三種穩(wěn)定劑不同添加量對(duì)核桃粕多肽酸乳飲料黏度的影響Fig.2 Effect of different adding quantity of stabilizers on the viscosity of walnut polypeptide yogurt drink

    由圖2看出,樣品的黏度隨著CMC-Na、HMP、GA添加量的增加而增加。據(jù)TROMP等和KASTNER等[19-20]報(bào)道,其原因是在酸性環(huán)境中,CMC-Na、HMP和GA均可與酸乳中的部分蛋白質(zhì)形成靜電復(fù)合物,由靜電作用以及分子間的摩擦力增大,導(dǎo)致樣品黏度增加。

    2.3 CMC-Na、HMP和GA對(duì)核桃粕多肽酸乳飲料粒徑的影響

    根據(jù)斯托克斯定律,顆粒的直徑越小,沉降速度越慢,體系越穩(wěn)定[21]。3種穩(wěn)定劑的添加量對(duì)核桃粕多肽酸乳飲料平均粒徑的影響見圖3。由圖3-A可以看出,隨著CMC-Na添加量的增加,樣品的平均粒徑呈先增大再減小最后增大的趨勢(shì),添加量為1.2 g/L時(shí),粒徑值最小為(1.26±0.01) μm,這是因?yàn)榈吞砑恿繒r(shí),CMC-Na不能充分吸附于蛋白質(zhì)上,造成蛋白質(zhì)分子聚集,粒徑增大;當(dāng)其添加量為1.2 g/L時(shí),足以覆蓋于蛋白質(zhì)表面,此時(shí)蛋白質(zhì)穩(wěn)定不聚集;當(dāng)添加量高于0.12%時(shí),CMC-Na在蛋白質(zhì)上發(fā)生多層吸附,粒徑增大。由圖3-B可以看出,隨著HMP添加量的增加,樣品的平均粒徑顯著減小(P<0.05),添加量為0.5 g/L時(shí)粒徑最小為(0.94±0.02) μm。這說(shuō)明在一定的添加量范圍內(nèi),HMP和蛋白質(zhì)能夠通過靜電作用形成復(fù)合物,阻止蛋白質(zhì)分子聚集,減小粒徑,該結(jié)論與李向東等[22]關(guān)于HMP對(duì)含乳飲料粒徑的影響研究結(jié)果相一致。由圖3-C可以看出,隨著GA添加量的增加,樣品的平均粒徑呈先下降后上升再微下降的趨勢(shì),添加量為50 g/L時(shí),粒徑最小為(1.07±0.05) μm,這可能是GA分子為球形構(gòu)象,蛋白質(zhì)更易與其側(cè)鏈的羧酸基團(tuán)相互作用從而降低GA分子內(nèi)部的靜電斥力,使其收縮,但添加量繼續(xù)增加,復(fù)合物粒徑會(huì)增大。

    圖3 三種穩(wěn)定劑不同添加量對(duì)核桃粕多肽酸乳飲料粒徑的影響Fig.3 Effects of different addition amount of threa stabilizers on particle size of walnut polypeptide yogurt drink

    2.4 穩(wěn)定劑復(fù)配正交試驗(yàn)

    在上述單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上對(duì)CMC-Na、HMP、GA復(fù)配及添加量試驗(yàn),采用L9(34)正交表,進(jìn)行正交試驗(yàn),以綜合評(píng)分為指標(biāo)評(píng)價(jià)穩(wěn)定劑復(fù)配效果,選出最優(yōu)組合及用量,正交試驗(yàn)結(jié)果見表3。

    表2 穩(wěn)定劑配方優(yōu)化試驗(yàn)因素水平表Table 2 Stabilizer formula optimization test factor level table

    表3 穩(wěn)定劑復(fù)配正交試驗(yàn)結(jié)果及分析Table 3 Stabilizer compounding orthogonal test results and analysis

    由表3極差分析可知,穩(wěn)定劑對(duì)產(chǎn)品綜合評(píng)分影響的主次順序?yàn)椋篏A>HMP>CMC-Na,最佳組合為A1B1C3, 即CMC-Na添加量1 g/L、HMP添加量0.9 g/L、GA添加量70 g/L。在此條件下又進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn),測(cè)得核桃粕多肽酸乳飲料的穩(wěn)定系數(shù)為80.21,感官得分為82.20,綜合評(píng)分為81.60,與表3中最高綜合評(píng)分差異不顯著(P<0.05),綜合考慮,最終復(fù)配選用A1B1C3。

    2.5 核桃粕多肽酸乳飲料流變學(xué)特性

    采用AR-G2型流變儀測(cè)定添加最佳復(fù)配穩(wěn)定劑前后的核桃粕多肽酸乳飲料樣品的流變學(xué)特性,作出黏度-剪切速率,剪切應(yīng)力-剪切速率的關(guān)系圖,見圖4。

    A-黏度—剪切速率;B-剪切應(yīng)力—剪切速率圖4 核桃粕多肽酸乳飲料的黏度—剪切速率和剪切應(yīng)力—剪切速率曲線圖Fig.4 Viscosity-shear rate and shear stress-shear rate profile of walnut polypeptide yogurt drink

    由圖4-A看出,添加復(fù)配穩(wěn)定劑后,核桃粕多肽酸乳飲料黏度隨著剪切速率的升高而降低,最后趨于平緩,而復(fù)配前的樣品黏度隨著剪切速率的增加先減小后基本保持不變,直至和水的黏度相等。由圖4-B看出,復(fù)配后的核桃粕多肽酸乳飲料剪切應(yīng)力隨著剪切速率的增大而增大,而未復(fù)配樣品剪切應(yīng)力變化趨勢(shì)和水接近。根據(jù)牛頓剪切應(yīng)力公式可以判斷,添加復(fù)配穩(wěn)定劑后,核桃粕多肽酸乳飲料出現(xiàn)剪切稀化現(xiàn)象,反映出非牛頓流體特性,屬假塑性流體。未添加復(fù)配穩(wěn)定劑的樣品,在高剪切速率下,呈現(xiàn)出牛頓流體的特性[23-24]。綜合圖4-A、圖4-B看出,加入穩(wěn)定劑后核桃粕多肽酸乳飲料黏度顯著增加(P<0.05)。

    2.6 核桃粕多肽酸乳飲料微觀結(jié)構(gòu)

    本試驗(yàn)對(duì)添加復(fù)配穩(wěn)定劑前后的核桃粕多肽酸乳飲料通過激光共聚焦顯微鏡觀察微觀結(jié)構(gòu),結(jié)果如圖5所示。

    圖5 核桃粕多肽酸乳飲料激光共聚焦顯微鏡圖Fig.5 Laser confocal microscopy of walnut peptide polypeptide milk drink注:比例尺子-100 μ m。

    圖5-A、圖5-B分別為儲(chǔ)藏0 d添加復(fù)配穩(wěn)定劑前后的樣品圖像。由圖5可知,未添加穩(wěn)定劑的樣品,蛋白凝聚,分布松散不均一,添加復(fù)配穩(wěn)定劑的樣品蛋白質(zhì)粒徑明顯減小,且分布更為密集。該結(jié)果與盛林霞[25]對(duì)酸性乳飲料中穩(wěn)定劑復(fù)配機(jī)理的研究結(jié)論一致,其原因是復(fù)配穩(wěn)定劑間產(chǎn)生協(xié)同作用,使體系具有更好的均一穩(wěn)定性。

    圖5-C為貯藏7 d時(shí)未復(fù)配樣品的圖像,與圖5-A相比蛋白絮凝現(xiàn)象更為明顯;圖5-D中蛋白質(zhì)粒徑無(wú)明顯增加,聚集現(xiàn)象得到改善,但均一性比圖5-B差,出現(xiàn)上述現(xiàn)象的原因可能是乳酸菌造成酸乳體系后酸化,部分蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)“塌陷”,空間位阻效應(yīng)減弱,空間排斥力逐漸小于范德華吸引力,出現(xiàn)聚集,體系失穩(wěn)沉淀。

    3 結(jié)論

    CMC-Na、HMP和GA三種穩(wěn)定劑及其添加量對(duì)核桃粕多肽酸乳飲料感官、穩(wěn)定性、黏度和粒徑的影響各不相同,總體表現(xiàn)為添加了穩(wěn)定劑綜合評(píng)分、黏度均顯著上升,體系呈最穩(wěn)狀態(tài)時(shí)樣品的平均粒徑較未添加穩(wěn)定劑時(shí)顯著減小。

    復(fù)配穩(wěn)定劑的穩(wěn)定效果優(yōu)于單一穩(wěn)定劑,CMC-Na、HMP和GA三種穩(wěn)定劑復(fù)配提高了核桃粕多肽酸乳飲料的穩(wěn)定性,改善了口感,以添加1.2 g/L CMC-Na、0.9 g/L HMP、70 g/L GA時(shí)效果最佳。

    經(jīng)對(duì)添加復(fù)配穩(wěn)定劑前后的核桃粕多肽酸乳飲料樣品的流變學(xué)特性研究,樣品添加復(fù)配穩(wěn)定劑后由牛頓流體轉(zhuǎn)變?yōu)榉桥nD流體,黏度增加蛋白質(zhì)絮凝減少,產(chǎn)品穩(wěn)定性提高。

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