醋龜甲不同劑型對(duì)血虛或骨質(zhì)疏松小鼠的防治作用比較

王新雨，譚曉梅，張文新，胡元立(.南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣州 5055;2.廣東嶺南職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)藥健康學(xué)院，廣州 50663)

醋龜甲不同劑型對(duì)血虛或骨質(zhì)疏松小鼠的防治作用比較

王新雨1，2＊，譚曉梅1#，張文新1，胡元立1(1.南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，廣州 510515;2.廣東嶺南職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)藥健康學(xué)院，廣州 510663)

目的:比較醋龜甲的水煎劑和散劑對(duì)血虛小鼠或骨質(zhì)疏松小鼠的防治作用。方法:將小鼠隨機(jī)分為正常組(1%羧甲基纖維素鈉溶液)、模型組(1%羧甲基纖維素鈉溶液)、陽性組(復(fù)方阿膠漿20m L/kg或骨松寶膠囊1.98 g/kg)以及醋龜甲水煎劑和散劑的低、中、高劑量組(劑量均為1.95、3.90、7.80 g/kg)，每組10只。在小鼠血虛模型實(shí)驗(yàn)中，除正常組外，其余各組小鼠ip環(huán)磷酰胺0.1 g/kg造模;并從實(shí)驗(yàn)第1天起ig給藥(陽性藥物為復(fù)方阿膠漿)，每天1次，連續(xù)8 d;給藥結(jié)束后，測(cè)定小鼠外周血中白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HG)、血細(xì)胞比容(HCT)、血小板(PLT)水平及股骨中骨髓有核細(xì)胞(BMNC)數(shù)。在小鼠骨質(zhì)疏松模型實(shí)驗(yàn)中，除正常組外，其余各組小鼠ig維甲酸0.105 g/kg造模;并從實(shí)驗(yàn)第1天ig相應(yīng)藥物(陽性藥物為骨松寶膠囊)，每天1次，連續(xù)30 d;給藥結(jié)束后，測(cè)定小鼠血清中堿性磷酸酶(ALP)水平、臟器(胸腺、肝、脾、卵巢)系數(shù)和股骨的干質(zhì)量、去脂干質(zhì)量、灰質(zhì)量以及股骨中鈣、磷含量。結(jié)果:在小鼠血虛模型實(shí)驗(yàn)中，與正常組比較，模型組小鼠外周血中WBC、RBC、HG、HCT、PLT水平及股骨中BMNC數(shù)均顯著降低(P＜0.01);與模型組比較，醋龜甲水煎劑低劑量組小鼠外周血中HCT、PLT、BMNC水平和中劑量組中RBC、HG水平以及高劑量組中HCT水平均顯著升高(P＜0.05)，醋龜甲散劑低、高劑量組小鼠外周血中WBC水平以及中劑量組HG水平顯著升高(P＜0.05)。在小鼠骨質(zhì)疏松模型實(shí)驗(yàn)中，與正常組比較，模型組小鼠血清中ALP水平和股骨的干質(zhì)量、去脂干質(zhì)量、灰質(zhì)量、灰質(zhì)量/去脂干質(zhì)量以及股骨中鈣、磷含量均顯著降低(P＜0.01)，各臟器系數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);與模型組比較，醋龜甲水煎劑高劑量組小鼠血清中ALP水平和股骨的干質(zhì)量、磷含量均顯著升高(P＜0.05)，醋龜甲散劑中、高劑量組以及中劑量組小鼠股骨的灰質(zhì)量、灰質(zhì)量/去脂干質(zhì)量和鈣、磷含量均顯著升高(P＜0.05)。結(jié)論:醋龜甲水煎劑對(duì)血虛小鼠的防治作用較好;醋龜甲散劑對(duì)骨質(zhì)疏松小鼠的防治作用較好。

醋龜甲;水煎劑;散劑;骨質(zhì)疏松;血虛;小鼠

醋龜甲為龜科動(dòng)物烏龜[Chinemys reevesii(Gray)]背甲及腹甲醋制品。其作為藥用首載于漢代的《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]，被列為上品，以后本草多有記載，其使用方式也不盡相同。在古代，龜甲用法為先煎、研末、入丸散等，如《溫氏經(jīng)驗(yàn)良方·解顱煎》治小兒解顱:“龜板五錢······水煎”;《圣濟(jì)總錄·龜甲散》治心矢志善忘:“龜甲(炙)······搗為細(xì)散等”[2]?，F(xiàn)代臨床在用龜甲治療骨癆、雞胸、血虛等病癥時(shí)，既有用水煎劑的，也有用散劑的[3-4]?！吨袊幍洹酚梅橄燃澹谄涫蛰d的用于治療骨質(zhì)疏松、血虛等相關(guān)疾病的成方制劑中既有以水煎劑入藥的(如龍牡壯骨顆粒)，也有以散劑入藥的(如三寶膠囊)，但不同劑型對(duì)治療骨質(zhì)疏松和血虛的藥效是否有差異未見報(bào)道。鑒于此，本研究主要參照2015版《中國藥典》(一部)醋龜甲的用法用量及治療病癥，研究醋龜甲水煎劑和散劑對(duì)血虛或骨質(zhì)疏松小鼠防治作用的差異，為其臨床合理使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

YZ-Hemavet950動(dòng)物血液分析儀(英國Drew Scientific公司);Agilent LC 1100系列高效液相色譜儀(美國Agilent公司);Alltech2000蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(美國Alltech公司);HC-3018高速冷凍離心機(jī)(安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 藥材、對(duì)照品、試劑

醋龜甲(毫州市毫廣中藥飲片有限公司，批號(hào): 140810)經(jīng)南方醫(yī)科大學(xué)中藥鑒定教研室劉傳明教授鑒定為真品;維甲酸原料藥(北京貝麗萊斯生物化學(xué)有限公司，批號(hào):120701);骨松寶膠囊(貴州富華藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào):20140712，規(guī)格:0.5 g/粒);注射用環(huán)磷酰胺(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào):14031521，規(guī)格: 200mg/瓶);復(fù)方阿膠漿(山東東阿阿膠股份有限公司，批號(hào):140847，規(guī)格:20m L/支);堿性磷酸酶(ALP)酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào):20140907);乙腈為色譜純，甲醇、氯仿、石油醚和冰醋酸等均為分析純。

1.3 動(dòng)物

KM小鼠180只，SPF級(jí)，♀♂各半，體質(zhì)量18～22 g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào):SCXK (粵)2011-0015。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)用藥液制備

(1)醋龜甲水煎劑藥液:取醋龜甲飲片200 g，加約6倍量水，浸泡60min，煎煮保持微沸45m in，過150目濾布，收集濾液;濾渣再加約4倍量水，保持微沸30m in，過150目濾布;合并2次濾液，干燥，得干膏。取干膏加入1%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液適量，制備成每1 m L含生藥0.04、0.08、0.12 g/m L的低、中、高質(zhì)量濃度的藥液。(2)醋龜甲散劑藥液:取100目醋龜甲散劑，加入1%CMC-Na溶液適量，制備成每1 m L含生藥0.04、0.08、0.12 g/m L的低、中、高質(zhì)量濃度的藥液。(3)復(fù)方阿膠漿藥液:取復(fù)方阿膠漿，加入1.5倍體積1%CMC-Na溶液，即得。(4)骨松寶膠囊藥液:取骨松寶膠囊內(nèi)容物，加入1%CMC-Na溶液適量，配制成質(zhì)量濃度為0.039 6 g/m L的溶液，即得。

2.2 醋龜甲不同劑型對(duì)環(huán)磷酰胺致小鼠血虛的影響

2.2.1 分組 取90只小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、陽性組(復(fù)方阿膠漿，20m L/kg)[5]以及醋龜甲水煎劑和散劑的低、中、高劑量組(給藥劑量均為1.95、3.90、7.80 g/kg，根據(jù)2015年版《中國藥典》(一部)中劑量進(jìn)行換算[6]，分別相當(dāng)于人臨床用量的1.5、3、6倍)，共9組，每組10只。2.2.2造模 除正常組小鼠ip等體積的生理鹽水外，其余各組小鼠在給藥的第3、4天ip環(huán)磷酰胺0.1 g/kg造成血虛模型。

2.2.3 給藥 從實(shí)驗(yàn)第1天起，正常組和模型組小鼠ig等體積1%CMC-Na溶液，其余各給藥組小鼠ig“2.1”項(xiàng)下相應(yīng)藥液，每天1次，連續(xù)8 d。

2.2.4 指標(biāo)觀察 末次給藥后1 h，小鼠摘眼球取血，采用動(dòng)物血液分析儀檢測(cè)外周血中白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HG)、血細(xì)胞比容(HCT)和血小板(PLT)水平。然后將小鼠頸椎脫臼處死，取右側(cè)完整股骨，除凈軟組織，用甲醇-冰醋酸(3∶1)5m L沖出全部骨髓，過4號(hào)針頭使成單細(xì)胞懸液，顯微鏡下對(duì)骨髓有核細(xì)胞(BMNC)計(jì)數(shù)。

2.3 醋龜甲不同劑型對(duì)維甲酸致小鼠骨質(zhì)疏松的影響

2.3.1 分組 取90只小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、陽性組(骨松寶膠囊，1.98 g/kg)[7]以及醋龜甲水煎劑和散劑的低、中、高劑量組(給藥劑量均為1.95、3.90、7.80 g/kg)，共9組，每組10只。

2.3.2 造模 除正常組小鼠ig等體積的生理鹽水外，其余各組小鼠ig維甲酸0.105 g/kg，每天1次，連續(xù)15 d，復(fù)制骨質(zhì)疏松模型。

2.3.3 給藥 從實(shí)驗(yàn)第1天起，正常組和模型組小鼠ig等體積1%CMC-Na溶液，其余各給藥組小鼠ig“2.1”項(xiàng)下相應(yīng)藥液，每天1次，連續(xù)30 d。

2.3.4 指標(biāo)觀察 末次給藥后1 h，摘眼球取血，置于1.5m L的EP管中，1 000×g離心10min，取上層血清，按試劑盒說明書測(cè)定血清中ALP水平。然后將小鼠處死，取小鼠胸腺、肝、脾、卵巢(♀)，稱質(zhì)量并計(jì)算臟器系數(shù):臟器系數(shù)(%)=臟器質(zhì)量/體質(zhì)量×100%。取左側(cè)股骨，用石油醚洗凈股骨上液體，精密稱質(zhì)量(濕質(zhì)量)，置于105℃烘箱中干燥6 h，精密稱質(zhì)量，得股骨干質(zhì)量;將股骨置于具塞試管中，加氯仿-甲醇(3∶1)10m L浸泡過夜，倒掉溶劑，再加氯仿-甲醇(3∶1)溶劑10m L，將試管置于40℃恒溫水浴中，4 h后重復(fù)1次，揮干溶劑，置于105℃烘箱中烘40min，精密稱質(zhì)量，得股骨去脂干質(zhì)量;將處理好的樣品置于20m L恒重坩堝中，于高溫爐中800℃灰化6 h，于干燥器中放至室溫，精密稱質(zhì)量，即得股骨灰質(zhì)量。取灰化后的樣品15mg，精密稱定，加1 mol/L鹽酸5m L溶解，加水定容至100m L，0.45μm濾膜濾過，采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法，測(cè)定股骨中鈣、磷含量[8]。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示。結(jié)果比較運(yùn)用單因素方差分析，方差齊時(shí)行LSD檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)行Dunntt’s T3檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 環(huán)磷酰胺致血虛小鼠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1.1 外周血常規(guī)的測(cè)定結(jié)果 與正常組比較，模型組小鼠外周血中WBC、RBC、HG、HCT、PLT水平均顯著降低(P＜0.01)。與模型組比較，醋龜甲散劑低、高劑量組小鼠外周血中WBC水平顯著升高(P＜0.05)，且組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);陽性組和醋龜甲水煎劑中劑量組小鼠外周血中RBC水平顯著升高(P＜0.05);陽性組、醋龜甲水煎劑中劑量組和散劑低劑量組小鼠外周血中HG水平均顯著升高(P＜0.05)，且組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);醋龜甲水煎劑低、高劑量組小鼠外周血中HCT水平顯著升高(P＜0.05)，且組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);醋龜甲水煎劑低劑量組小鼠外周血中PLT水平顯著升高(P＜0.05)，結(jié)果詳見表1。

3.1.2 BMNC數(shù)的測(cè)定結(jié)果 與正常組比較，模型組小鼠BMNC數(shù)顯著降低(P＜0.01)。與模型組比較，陽性組和醋龜甲水煎劑低劑量組小鼠BMNC數(shù)顯著升高(P＜0.05);醋龜甲散劑各劑量組小鼠BMNC數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，結(jié)果詳見表1。

表1 各組小鼠外周血常規(guī)及BMNC數(shù)測(cè)定結(jié)果(±s，n=10)Tab 1 Resu lts of peripheral blood routine and BMNC numbersofm ice in each grou(p±s，n=10)

表1 各組小鼠外周血常規(guī)及BMNC數(shù)測(cè)定結(jié)果(±s，n=10)Tab 1 Resu lts of peripheral blood routine and BMNC numbersofm ice in each grou(p±s，n=10)

注:與正常組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，#P＜0.05Note:vs.normalgroup，＊＊P＜0.01;vs.modelgroup，#P＜0.05

外周血常規(guī)指標(biāo)組別PLT，×109L-1BMNC，× 106個(gè)/根正常組模型組陽性組醋龜甲水煎劑低劑量組醋龜甲水煎劑中劑量組醋龜甲水煎劑高劑量組醋龜甲散劑低劑量組醋龜甲散劑中劑量組醋龜甲散劑高劑量組4.30±0.69 3.02±0.85＊＊3.79±0.41#4.25±1.34#3.03±0.60 2.98±0.48 3.35±0.70 3.47±0.72 3.49±0.53 WBC，×109L-17.22±1.52 3.12±1.06＊＊3.66±2.00 3.34±2.32 4.10±1.95 4.22±1.67 4.72±1.42#3.18±1.47 4.68±1.71#RBC，×1012L-19.50±0.22 8.49±0.22＊＊9.16±0.37#8.60±0.23 9.25±0.37#8.75±0.17 8.74±0.34 8.86±0.38 8.87±0.32 HG，g/dL 16.78±0.51 12.08±1.64＊＊14.26±1.21#13.41±2.09 14.00±2.54#13.62±2.29 13.94±2.43#13.41±1.59 13.40±2.11 HCT，% 54.88±3.61 46.16±4.12＊＊49.25±5.70 50.85±2.06#47.85±7.03 50.87±3.92#47.62±5.74 46.16±5.88 48.13±3.67 941.60±143.12 552.00±159.12＊＊547.60±202.09 868.50±200.19#553.37±292.02 558.60±206.08 689.60±231.52 710.12±175.04 623.30±151.37

3.2 維甲酸致骨質(zhì)疏松小鼠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.2.1 血清中ALP水平的測(cè)定結(jié)果 與正常組比較，模型組小鼠血清中ALP水平顯著降低(P＜0.01)。與模型組比較，陽性組、醋龜甲水煎劑高劑量組和醋龜甲散劑中、高劑量組小鼠血清中ALP水平均顯著升高(P＜0.05或P＜0.01)，且組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，結(jié)果詳見表2。

表2 各組小鼠血清中ALP水平及臟器系數(shù)測(cè)定結(jié)果(±s)Tab 2 Resultsof ALP level in serum and organ coefficientsofm ice in each grou(p±s)

表2 各組小鼠血清中ALP水平及臟器系數(shù)測(cè)定結(jié)果(±s)Tab 2 Resultsof ALP level in serum and organ coefficientsofm ice in each grou(p±s)

注:與正常組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note:vs.normal group，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01;vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

組別正常組模型組陽性組醋龜甲水煎劑低劑量組醋龜甲水煎劑中劑量組醋龜甲水煎劑高劑量組醋龜甲散劑低劑量組醋龜甲散劑中劑量組醋龜甲散劑高劑量組卵巢系數(shù)(n=5) 0.0929±0.0064 0.0704±0.0070＊0.0658±0.0043 0.0663±0.0063 0.0643±0.0076 0.0587±0.0071 0.0791±0.0053 0.0589±0.0049 0.0645±0.0045 ALP，U/L 5.2080±0.7124 2.9740±1.2363＊＊4.1840±0.5772#3.4300±1.2073 3.9510±1.1753 4.3633±1.1604##3.4450±1.1918 4.2289±1.4872#4.4170±0.9025##胸腺系數(shù)(n=10) 0.3205±0.0056 0.3035±0.0303 0.2410±0.0214 0.2777±0.0344 0.3114±0.0158 0.2609±0.0167 0.2811±0.0273 0.3129±0.0263 0.3043±0.0192肝系數(shù)(n=10) 3.9552±0.1068 3.4215±0.1299＊3.3652±0.0896 3.6168±0.1063 3.5659±0.0811 3.2784±0.1198 3.9204±0.1665 3.3989±0.0652 3.8540±0.1849脾系數(shù)(n=10) 0.3634±0.0138 0.3609±0.0235 0.3078±0.0169 0.3784±0.0268 0.3784±0.0214 0.3536±0.0187 0.4077±0.0297 0.3733±0.0312 0.3760±0.0262

3.2.2 小鼠臟器系數(shù)的測(cè)定結(jié)果 與正常組比較，模型組小鼠肝系數(shù)、卵巢系數(shù)顯著降低(P＜0.05)。與模型組比較，各給藥組小鼠的胸腺系數(shù)、肝系數(shù)、脾系數(shù)、卵巢系數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，結(jié)果詳見表2。

3.2.3 小鼠股骨質(zhì)量的測(cè)定結(jié)果 與正常組比較，模型組小鼠股骨的干質(zhì)量、去脂干質(zhì)量、灰質(zhì)量和灰質(zhì)量/去脂干質(zhì)量均顯著降低(P＜0.01)。與模型組比較，醋龜甲散劑中劑量組小鼠股骨的干質(zhì)量、灰質(zhì)量顯著降低(P＜0.05);醋龜甲水煎劑高劑量組和散劑中劑量組小鼠灰質(zhì)量/去脂干質(zhì)量顯著降低(P＜0.05)，但兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，結(jié)果詳見表3。

表3 各組小鼠股骨質(zhì)量測(cè)定結(jié)果(±s，n=10)Tab 3 Resu lts of mass of the femur of m ice in each grou(p±s，n=10)

表3 各組小鼠股骨質(zhì)量測(cè)定結(jié)果(±s，n=10)Tab 3 Resu lts of mass of the femur of m ice in each grou(p±s，n=10)

注:與正常組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，#P＜0.05Note:vs.normalgroup，＊＊P＜0.01;vs.modelgroup，#P＜0.05

組別正常組模型組陽性組醋龜甲水煎劑低劑量組醋龜甲水煎劑中劑量組醋龜甲水煎劑高劑量組醋龜甲散劑低劑量組醋龜甲散劑中劑量組醋龜甲散劑高劑量組干質(zhì)量，g 0.0556±0.0068 0.0464±0.0033＊＊0.0479±0.0037 0.0509±0.0089 0.0473±0.0067 0.0467±0.0049 0.0474±0.0056 0.0518±0.0026#0.0449±0.0059去脂干質(zhì)量，g 0.0540±0.0065 0.0451±0.0040＊＊0.0471±0.0037 0.0495±0.0090 0.0464±0.0065 0.0455±0.0048 0.0462±0.0053 0.0502±0.0031 0.0436±0.0058灰質(zhì)量，g 0.0336±0.0040 0.0266±0.0026＊＊0.0283±0.0024 0.0297±0.0055 0.0282±0.0040 0.0277±0.0029 0.0274±0.0030 0.0309±0.0026#0.0265±0.0040灰質(zhì)量/去脂干質(zhì)量，g/g 0.6223±0.0139 0.5905±0.0231＊＊0.6002±0.0166 0.6002±0.0246 0.6084±0.0089 0.6094±0.0255#0.5937±0.0318 0.6156±0.0186#0.6063±0.0216

3.2.4 小鼠股骨中鈣、磷含量的測(cè)定結(jié)果 與正常組比較，模型組小鼠股骨中鈣、磷含量顯著降低(P＜0.01)。與模型組比較，陽性組、醋龜甲水煎劑高劑量組和散劑中劑量組小鼠股骨中磷含量均顯著升高(P＜0.05)，且組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);醋龜甲散劑中劑量組小鼠股骨中鈣含量顯著升高(P＜0.05)，結(jié)果詳見表5。

表4 各組小鼠股骨中鈣、磷含量測(cè)定結(jié)果(±s，n=10)Tab 4 Results of contents of calcium and phosphorus in femur ofm ice in each grou(p±s，n=10)

表4 各組小鼠股骨中鈣、磷含量測(cè)定結(jié)果(±s，n=10)Tab 4 Results of contents of calcium and phosphorus in femur ofm ice in each grou(p±s，n=10)

注:與正常組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，#P＜0.05Note:vs.normalgroup，＊＊P＜0.01;vs.modelgroup，#P＜0.05

組別正常組模型組陽性組醋龜甲水煎劑低劑量組醋龜甲水煎劑中劑量組醋龜甲水煎劑高劑量組醋龜甲散劑低劑量組醋龜甲散劑中劑量組醋龜甲散劑高劑量組鈣/去脂干質(zhì)量，g/g 0.2947±0.0111 0.2720±0.0156＊＊0.2836±0.0132 0.2766±0.0109 0.2772±0.0103 0.2813±0.0076 0.2814±0.0154 0.2909±0.0094#0.2803±0.0162磷/去脂干質(zhì)量，g/g 0.0538±0.0020 0.0502±0.0025＊＊0.0531±0.0032#0.0524±0.0036 0.0509±0.0035 0.0537±0.0027#0.0512±0.0033 0.0538±0.0020#0.0515±0.0030

4 討論

環(huán)磷酰胺具有細(xì)胞毒性，能抑制細(xì)胞分裂，致骨髓造血功能損壞，引發(fā)多系血細(xì)胞數(shù)量減少，從而造成血虛[9]。血虛證是中醫(yī)臨床常見病證之一，主要病理表現(xiàn)為外周血中WBC減少和HCT水平降低、骨髓造血干細(xì)胞受到抑制等[10]。復(fù)方阿膠漿臨床上用于治療氣血兩虛及貧血已有多年經(jīng)驗(yàn)，療效較好。現(xiàn)代研究表明，阿膠對(duì)缺血性動(dòng)物的RBC、HG及HCT有顯著的升高作用，并對(duì)骨髓細(xì)胞的功能有顯著的改善作用，故在小鼠血虛模型中以復(fù)方阿膠漿為陽性對(duì)照藥物[11]。維甲酸引起骨質(zhì)疏松癥的主要表現(xiàn)是骨的有機(jī)質(zhì)和無機(jī)質(zhì)減少[12]。骨松寶膠囊臨床上用于骨痿(骨質(zhì)疏松癥)引起的骨折、骨痛及預(yù)防更年期骨質(zhì)疏松癥。臨床研究表明，骨松寶膠囊能有效改善患者骨質(zhì)疏松的癥狀、提高骨密度，療效確切可靠[13]，故在小鼠骨質(zhì)疏松模型中以其為陽性對(duì)照藥物。

在小鼠血虛實(shí)驗(yàn)中，與模型組比較，醋龜甲水煎劑低劑量組小鼠外周血中PLT、HCT水平以骰骨中BMNC數(shù)，中劑量組小鼠外周血中RBC、HG水平和高劑量組HCT水平均顯著升高(P＜0.05);而散劑僅低劑量組小鼠外周血中RBC、HG水平及高劑量組小鼠外周血中RBC水平顯著降低(P＜0.05)，因此水煎劑組效果較好。研究報(bào)道，酪氨酸、甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸和丙氨酸這5種氨基酸組成了刺激小鼠BMNC細(xì)胞增殖的活性成分的物質(zhì)基礎(chǔ)[14]。龜甲中亦有此5種氨基酸，且含量較高[15]，醋龜甲水煎劑采用煎煮法提取制備，有利于其氨基酸、脂肪酸等有效物質(zhì)的溶出。

在小鼠骨質(zhì)疏松實(shí)驗(yàn)中，與模型組比較，醋龜甲水煎劑僅高劑量組小鼠骰骨的灰質(zhì)量/去脂干質(zhì)量、磷含量有顯著改善(P＜0.05);而散劑中劑量組小鼠骰骨的干質(zhì)量、灰質(zhì)量、灰質(zhì)量/去脂干質(zhì)量以及鈣、磷含量均有顯著改善(P＜0.05)，因此散劑作用較好。骨中無機(jī)質(zhì)主要是鈣和磷共同形成骨的磷灰石結(jié)晶，占骨鹽成分的84%，所以鈣、磷是骨礦物質(zhì)的主要成分。骨骼有機(jī)質(zhì)中有70%～86%是骨膠原，其能促進(jìn)鈣、磷等無機(jī)質(zhì)在骨上的沉積，因而能起到修復(fù)骨折的作用。在前期的研究中發(fā)現(xiàn)，醋龜甲中鈣含量為30%左右，磷含量為6%左右[16]，多以羥基磷酸鈣、碳酸鈣等形式存在，難溶于水，但進(jìn)入體后在胃酸的作用下成為可溶性鈣和磷。因此，醋龜甲散劑治療骨質(zhì)疏松的有效物質(zhì)基礎(chǔ)可能以鈣和磷為主。而醋龜甲水煎劑中鈣、磷含量雖相對(duì)散劑少很多，但醋龜甲亦含有骨膠原[17]，煎煮有利于骨膠原的溶出，易被吸收利用。因此，醋龜甲水煎劑治療骨質(zhì)疏松的物質(zhì)基礎(chǔ)可能以骨膠原為主。

在血虛模型中，低劑量醋龜甲水煎劑對(duì)血虛小鼠BMNC數(shù)有顯著影響，而低、中、高劑量醋龜甲散劑對(duì)血虛小鼠BMNC數(shù)均無顯著影響。而在骨質(zhì)疏松模型中，與模型組比較，散劑高劑量組小鼠多數(shù)指標(biāo)無顯著改善，考慮因醋龜甲中含碳酸鈣，大劑量碳酸鈣可中和胃酸并減少胃蛋白酶活性[18]，是否因此而影響了藥效，尚需進(jìn)一步研究。

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(編輯:林 靜)

Com parison of the Preventive and Therapeutic Effect of Different Dosage Forms of Vinegar Testudinis Carapax on M ice w ith Hemopenia or Osteoporosis

WANG Xinyu1，2，TAN Xiaomei1，ZHANG Wenxin1，HU Yuanli1(1.School of TCM，Southern Medical University，Guangzhou 510515，China;2.School of Medicine and Health，Lingnan Institute of Technology，Guangzhou 510663，China)

OBJECTIVE:To compare the preventive and therapeutic effect of Vinegar testudinis carapax(VTC)water decoction and pow der on m ice w ith hemopenia or osteoporosis.METHODS:M ice were random ly divided into normal group(1% CMC-Na)，model group(1%CMC-Na)，positive group(Compound e-jiao slurry 20 m L/kg or Gusongbao capsule 1.98 g/kg)，VTC water decoction and powder low-dose，medium-dose，high-dose groups(1.95，3.90，7.80 g/kg)，10 in each group.In hemopeniam icemodel experiment，except for the normal group，m ice in other groups were intraperitoneally injected cyclophospham ide 0.1 g/kg formodeling，and intragastrically given medicines from the first day(positive drug was Compound e-jiao slurry)，once a day，for 8 d.A fter adm inistration，peripheral blood levels of white blood cells(WBC)，red blood cells(RBC)，hemoglobin (HG)，hematocrit(HCT)，platelet(PLT)and bonemarrow nucleated cells(BMNC)numbers in femur of m ice were determ ined. In osteoporosismicemodel experiment，except for the normal group，mice in other groups were intragastrically given retinoic acid 0.105 g/kg formodeling，and intragastrically given relevantmedicines from the first day(positive drug was Gusongbao capsule)，once a day，for 30 d.After administration，alkaline phosphatase(ALP)level，organ(thymus，liver，spleen，ovary)coefficients，dry masses and degreasing，ash quality of the femur，and contents of femur calcium and phosphorus in serum ofm ice were detected.RESULTS:In hemopenia m ice model experiment，compared w ith normal group，WBC，RBC，HG，HCT，PLT levels in peripheral blood and BMNC numbers in femur of mice in model group were decreased(P＜0.01).Compared w ith model group，HCT，PLT，BMNC levels in peripheral blood of m ice in VTC water decoction low-dose group，and RBC，HG levels in medium-dose group and HCT level in high-dose group were significantly increased(P＜0.05).And WBC level in peripheral blood of m ice in powder low-dose，high-dose groups and HG level in medium-dose group were significantly increased(P＜0.05).In osteoporosism icemodel experiment，compared w ith normal group，ALP level in serum of m ice in model group，dry mass and degreasing，ashmass，ashmass/dry mass of degreasing of the femur，and the contents of femur calcium and phosphoruswere significantly decreased(P＜0.01)，there was no significant difference in each organ coefficient(P＞0.05).Compared w ith model group，ALP level in serum and dry mass，phosphorus content of femur ofmice in VTC water decoction high-dose group were significantly increased(P＜0.05);ALP level in serum and dry mass，phosphorus content of femur of m ice in VTC，powder medium-dose，high-dose group，the ash mass，ash mass/dry mass of degreasing，contents of femur calcium and phosphorus in VTC powdermedium-dose group were significantly increased(P＜0.05).CONCLUSIONS:VTC water decoction shows better preventive and therapeutic effect on hemopeniam ice;while VTC powder shows better preventive and therapeutic effect on osteoporosism ice.

Vinegar testudinis carapax;Water decoction;Powder;Osteoporosis;Hemopenia;M ice

R285

A

1001-0408(2017)19-2661-05

2016-11-29

2017-03-01)

＊博士研究生。研究方向:中藥制劑。電話:020-62789112。E-mail:379319742@qq.com

#通信作者:研究員，博士生導(dǎo)師。研究方向:中藥新制劑。電話:020-61648265。E-mail:txm@fimmu.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.19.20