凋亡抑制基因Livin和Survivin在食管癌中表達(dá)及其與胸腔鏡下根治術(shù)療效的相關(guān)性

劉 泉

(三峽大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 宜昌市中心人民醫(yī)院，湖北 宜昌 443003)

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凋亡抑制基因Livin和Survivin在食管癌中表達(dá)及其與胸腔鏡下根治術(shù)療效的相關(guān)性

劉 泉1

(三峽大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 宜昌市中心人民醫(yī)院，湖北 宜昌 443003)

目的 探討凋亡抑制基因Livin和Survivin在食管癌中表達(dá)與胸腔鏡下根治術(shù)療效的相關(guān)性。方法 該行胸腔鏡根治術(shù)治療的食管癌患者50例，采用免疫組織化學(xué)法檢測其食管癌組織和癌旁組織中凋亡抑制基因Livin和Survivin的表達(dá)，根據(jù)凋亡抑制基因Livin和Survivin表達(dá)情況分析其與患者胸腔鏡下根治術(shù)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率、復(fù)發(fā)率、5年生存率的關(guān)系。結(jié)果 癌組織凋亡抑制基因Livin和Survivin表達(dá)陽性率高于正常的癌旁組織(P<0.05)；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的兩基因表達(dá)陽性率高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者，有復(fù)發(fā)患者的兩基因表達(dá)陽性率高于無復(fù)發(fā)患者，≤5年生存率患者的兩基因表達(dá)陽性率高于>5年的患者(P<0.05)；凋亡抑制基因Livin和Survivin兩者聯(lián)合評價(jià)食管癌患者胸腔鏡下根治術(shù)療效敏感性、特異性及準(zhǔn)確性均高于兩基因單獨(dú)評價(jià)(P<0.05)。結(jié)論 凋亡抑制基因Livin和Survivin在食管癌中高表達(dá)，其與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及患者5年生存率有關(guān)，凋亡抑制基因Livin和Survivin陰性表達(dá)者術(shù)后療效較良好且對術(shù)后療效判斷具有較高的敏感性、準(zhǔn)確性及特異性。

凋亡抑制基因Livin；Survivin；食管癌；胸腔鏡下根治術(shù)

食管癌具有較高的發(fā)病率和死亡率〔1，2〕。Livin是凋亡抑制細(xì)胞蛋白(IAPs)中一種新發(fā)現(xiàn)的基因，能延緩細(xì)胞凋亡且在大多數(shù)惡性腫瘤中呈高表達(dá)狀態(tài)；Survivn也是凋亡抑制細(xì)胞蛋白中一種抗凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和參與血管生成的基因，在正常細(xì)胞中呈關(guān)閉狀態(tài)，而在腫瘤組織中呈高表達(dá)狀態(tài)，可參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，被認(rèn)為是腫瘤相關(guān)基因〔3，4〕。本研究通過檢測胸腔鏡下根治術(shù)食管癌患者Livin和Survivin表達(dá)情況，觀察其與手術(shù)療效的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2010年1月至2011年5月于三峽大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院行胸腔鏡根治術(shù)治療食管癌患者50例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均診斷為食管癌且年齡>60歲；(2)均積極配合治療且可接受長時間隨訪；(3)沒有手術(shù)史或其他腫瘤病史〔5〕。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴有肝腎等其他器官性疾??；(2)伴有其他全身性代謝疾病等其他嚴(yán)重疾病；(3)有手術(shù)禁忌證。其中男30例，女20例，年齡61～72歲，平均(67.32±6.12)歲，TNM分期為Ⅰ期9例，Ⅱ期12例，Ⅲ期21例，Ⅳ期8例，病理診斷為鱗癌35例，腺癌10例，腺鱗癌5例。胸腔鏡下根治術(shù)中采集全部患者食管癌組織及對應(yīng)的癌旁組織。本研究通過本院倫理委員會審核及批準(zhǔn)。

1.2 試劑與操作方法 采用美國Neomarkers公司生產(chǎn)的Livin鼠抗人單克隆抗體，抗體稀釋濃度為1∶150，采用免疫組織化學(xué)檢查法檢測Livin。采用美國Santa Cruz公司生產(chǎn)的Survivin鼠抗人單克隆抗體，抗體稀釋濃度為1∶100，同時采用免疫組織檢查法檢測Survivin，由福州邁新生物技術(shù)科技公司提供即用型快捷 MaxvisionTM檢測試劑盒，每批染色均設(shè)已知陽性切片作陽性對照，磷酸鹽緩沖液(PBS) 代替一抗為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 選用兩位有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師采用雙盲法觀察每張切片。Survivin定位在細(xì)胞質(zhì)，染色為棕褐色顆粒為陽性表達(dá)，Livin主要定位在細(xì)胞質(zhì)，也有少部分在細(xì)胞核中，染色為黃色顆粒的為陽性表達(dá)，依照相關(guān)報(bào)道定下陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)〔6〕。對切片中組織染色強(qiáng)度進(jìn)行計(jì)分：細(xì)胞無顯色為0分，細(xì)胞呈淡黃色為1分，細(xì)胞呈棕黃色為2分，細(xì)胞呈棕褐色為3分(參照背景著色相而確定染色深淺)。對切片中癌細(xì)胞數(shù)的百分比進(jìn)行評分：陰性為0分，陽性癌細(xì)胞≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分，染色強(qiáng)度計(jì)分與陽性細(xì)胞的百分比計(jì)分的乘積>3分為免疫反應(yīng)陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 凋亡抑制基因Livin和Survivin在食管癌及癌旁組織中表達(dá)比較 癌組織中凋亡抑制基因Livin和Survivin表達(dá)陽性率〔32例(64.00%)、35例(70.00%)〕高于癌旁組織〔4例(8.00%)，3例(6.00%)，χ2=34.03,43.46,均P<0.05〕。

2.2 凋亡抑制基因Livin和Survivin表達(dá)與患者臨床療效的關(guān)系 有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的凋亡抑制基因Livin和Survivin表達(dá)陽性率高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者，有復(fù)發(fā)患者的兩基因表達(dá)陽性率高于無復(fù)發(fā)患者，≤5年生存患者的兩基因表達(dá)陽性高于>5年的患者(P<0.05)。見表1。

2.3 患者凋亡抑制基因Livin和Survivin表達(dá)及兩者聯(lián)合評價(jià)療效的價(jià)值 凋亡抑制基因Livin和Survivin均表達(dá)陽性時，兩者聯(lián)合評價(jià)食管癌患者胸腔鏡下根治術(shù)療效敏感性、特異性及準(zhǔn)確性均高于兩基因單獨(dú)評價(jià)(P<0.05)，見表2。

表1 凋亡抑制基因Livin和Survivin表達(dá)與患者臨床療效的關(guān)系〔n(%),n=50〕

表2 患者凋亡抑制基因Livin和Survivin表達(dá)及兩者聯(lián)合評價(jià)療效的價(jià)值(%)

3 討 論

細(xì)胞凋亡紊亂會直接或間接促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，細(xì)胞凋亡受到抑制時會延長細(xì)胞存活時間，同時有助于突變的細(xì)胞生長，促進(jìn)腫瘤形成。機(jī)體能穩(wěn)定生存有賴于細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、抑制凋亡蛋白家族(IAPS)、Smac、細(xì)胞凋亡通路和 p53、C-myc、Bcl-2 家族等通路構(gòu)成復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)對凋亡進(jìn)行精細(xì)地調(diào)控〔7〕。不斷有學(xué)者依據(jù)此理論對腫瘤細(xì)胞特異性因子進(jìn)行深入研究，最終發(fā)現(xiàn)凋亡抑制基因Livin和Survivin均是抑制凋亡蛋白家族成員之一。有研究顯示〔8〕，兩者在腫瘤組織呈高表達(dá)狀態(tài)，參與腫瘤的惡性演進(jìn)過程，能作為腫瘤的惡性程度的評價(jià)指標(biāo)之一。

Livin有Livinα和 Livinβ兩種mRNA亞型，能通過其BIR 區(qū)與 Caspase 結(jié)合而使Caspase 酶的活性受到抑制，而達(dá)到抑制細(xì)胞凋亡。有研究顯示，其可能參與組織胚胎的生長發(fā)育，而在正常成人的大多數(shù)終末組織中呈低表達(dá)或不表達(dá)，但在惡性腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，能作為腫瘤治療的重要靶點(diǎn)〔9，10〕。本研究證明了Livin在食管癌組織中是呈高表達(dá)其表達(dá)與食管癌手術(shù)后療效及預(yù)后密切相關(guān)，參與了食管癌的惡性演進(jìn)過程。

Survivin是IAP 家族成員之一也是目前研究熱點(diǎn)，其抗細(xì)胞凋亡主要是通過直接阻滯 Caspase-3 和Caspase-7 而促進(jìn)細(xì)胞異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化，同時對抗G2/M期凋亡的誘導(dǎo)，促進(jìn)異常細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂異常增殖，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的形成〔11〕。有研究顯示，其在惡性腫瘤組織中呈高表達(dá)，而在正常組織中呈關(guān)閉狀態(tài)，其可在腫瘤的發(fā)生早期過程中被激活并參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，其表達(dá)與惡性腫瘤的侵襲和預(yù)后密切相關(guān)〔12，13〕。本研究證明Survivin在食管癌組織中呈高表達(dá)，另外提示其與食管癌的惡性進(jìn)展及預(yù)后有關(guān)。最后結(jié)果顯示，凋亡抑制基因Livin和Survivin均表達(dá)陽性時，聯(lián)合兩者對食管癌術(shù)后療效評價(jià)的敏感性、特異性及準(zhǔn)確性均高于單獨(dú)使用其中任意一個，可能是兩者聯(lián)合能減少單獨(dú)評價(jià)的漏診率和誤診率，從而提高其評價(jià)的敏感性、特異性及準(zhǔn)確性。

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〔2016-10-25修回〕

(編輯 郭 菁)

劉 泉(1980-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事普胸外科手術(shù)及胸腔鏡普胸外科手術(shù)(肺癌、食管癌、縱隔腫瘤、胸部外傷) 研究。

R73

A

1005-9202(2017)14-3513-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.14.060

1 三峽大學(xué)心血管病研究所