飼糧膽堿和裂殖壺菌油聯(lián)合添加促進(jìn)二十二碳六烯酸在雞蛋卵黃中的富集

王 浩 王曉翠 張海軍 齊廣海 王 晶 許 麗 武書(shū)庚*

(1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，哈爾濱150030；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，生物飼料開(kāi)發(fā)國(guó)家工程研究中心，北京100081)

飼糧膽堿和裂殖壺菌油聯(lián)合添加促進(jìn)二十二碳六烯酸在雞蛋卵黃中的富集

王 浩1,2王曉翠2*張海軍2齊廣海2王 晶2許 麗1**武書(shū)庚2**

(1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，哈爾濱150030；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，生物飼料開(kāi)發(fā)國(guó)家工程研究中心，北京100081)

本試驗(yàn)旨在研究飼糧添加膽堿與裂殖壺菌油(Schizochytriumoil，SO)對(duì)雞蛋卵黃脂質(zhì)及二十二碳六烯酸(DHA)富集的影響。選取26周齡京紅蛋雞288只，分4組(每組6個(gè)重復(fù)，每重復(fù)12只雞)。采用2×2因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，飼糧添加膽堿(500和1 000 mg/kg)和SO(0和0.5%)為2個(gè)主效應(yīng)，共配制4種等氮等能飼糧。預(yù)試期1周，正試期8周。結(jié)果表明：1)試驗(yàn)期內(nèi)，各組生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)均無(wú)顯著差異(P>0.05)。2)各組卵黃中干物質(zhì)、粗脂肪、膽固醇及甘油三酯含量均無(wú)顯著差異(P>0.05)。1 000 mg/kg膽堿組卵黃總磷脂含量顯著高于500 mg/kg膽堿組(P<0.05)。膽堿和SO對(duì)卵黃總磷脂含量有顯著交互作用(P=0.04)，1 000 mg/kg膽堿+0.5%SO組卵黃總磷脂含量最高。3)0.5%SO顯著提高卵黃n-3多不飽和脂肪酸(PUFA)和DHA含量(P<0.05)，顯著降低n-6 PUFA含量及n-6 PUFA/n-3 PUFA值(P<0.05)。膽堿和SO對(duì)卵黃中n-3 PUFA(P<0.001)、n-6 PUFA(P=0.01)及DHA(P<0.001)含量和n-6 PUFA/n-3 PUFA值(P=0.01)有顯著交互作用，1 000 mg/kg膽堿+0.5%SO組卵黃中n-3 PUFA和DHA含量顯著高于其他組(P<0.05)，且n-6 PUFA含量及n-6 PUFA/n-3 PUFA值顯著低于其他組(P<0.05)。綜上，本試驗(yàn)條件下，飼糧中1 000 mg/kg膽堿和0.5%SO聯(lián)合添加可促進(jìn)卵黃DHA富集，且對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)無(wú)顯著影響。

膽堿；卵黃；DHA；脂肪酸；裂殖壺菌油

二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA，C22∶6 n-3)是一種n-3系長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids，PUFA)，可促進(jìn)嬰幼兒大腦及視網(wǎng)膜發(fā)育[1]，而人體無(wú)法合成DHA只能通過(guò)外源補(bǔ)充。因此，通過(guò)各種方式增加食品中DHA具有重要意義。雞蛋卵黃中脂肪酸極易受到飼糧脂肪酸組成的影響。在飼糧中添加n-3 PUFA可增加雞蛋中的DHA含量[2-4]。裂殖壺菌(Schizochytrium)是一種富含DHA的微藻，研究顯示蛋雞飼糧中添加裂殖壺菌粉可顯著提高卵黃中DHA含量，盡管卵黃中DHA含量會(huì)隨著飼糧中裂殖壺菌粉添加劑量的升高而提高，但DHA在雞蛋中富集率則呈線性下降[5]。這也是目前DHA雞蛋成本高的原因之一。由于DHA主要存在于卵黃磷脂中[6]，磷脂與DHA結(jié)合成磷脂型DHA(DHA-PL)的反應(yīng)屬可逆反應(yīng)，當(dāng)DHA含量提高時(shí)，需要更多的磷脂來(lái)維持兩者合適的摩爾比才能產(chǎn)生更多的DHA-PL[7]。而飼糧添加膽堿卻可顯著提高卵黃中卵磷脂含量[8]。目前，關(guān)于飼糧膽堿和裂殖壺菌油聯(lián)合添加是否會(huì)促進(jìn)DHA在雞蛋卵黃中富集，尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)通過(guò)向高峰期產(chǎn)蛋雞飼糧中添加膽堿和裂殖壺菌油，探索兩者對(duì)雞蛋卵黃中DHA的富集是否存在協(xié)同作用，旨在為高效、經(jīng)濟(jì)地生產(chǎn)DHA富集蛋提供思路和試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)飼糧

采用2×2因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)(表1)，飼糧添加膽堿(500和1 000 mg/kg)和裂殖壺菌油(0和0.5%)

為2個(gè)主效應(yīng)，共配制4種飼糧，飼糧中分別添加500 mg/kg膽堿(1組)、1 000 mg/kg膽堿(2組)、500 mg/kg膽堿+0.5%裂殖壺菌油(3組)和1 000 mg/kg膽堿+0.5%裂殖壺菌油(4組)。裂殖壺菌油購(gòu)自廈門(mén)金達(dá)威集團(tuán)股份有限公司，裂殖壺菌油中DHA含量占總脂肪酸的66.3%(實(shí)測(cè)值)。膽堿(氯化膽堿，99.3%)購(gòu)自杭州海爾希畜牧科技有限公司。試驗(yàn)選取26周齡體況良好，體重相近的健康京紅1號(hào)產(chǎn)蛋雞288只，按初始產(chǎn)蛋率無(wú)顯著差異原則分成4個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12只雞。

表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)Table 1 Experimental design

其中，裂殖壺菌油的實(shí)測(cè)總能為37.63 MJ/kg，參照NRC(2012)中蛋雞代謝能計(jì)算公式，得出裂殖壺菌油的代謝能為27.28 MJ/kg。各試驗(yàn)組飼糧采用等氮(16.60%粗蛋白質(zhì))等能(11.15 MJ/kg代謝能)的模式，飼糧的營(yíng)養(yǎng)水平參照NRC(1994)和《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)，結(jié)合京紅蛋雞飼養(yǎng)手冊(cè)配制。配料時(shí)按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)在基礎(chǔ)飼糧中分別添加膽堿或裂殖壺菌油，各組飼糧中按每千克飼糧添加100 mg維生素E、50mg茶多酚和100mg乙氧基喹啉作為抗氧化劑，防止裂殖壺菌油氧化。

所有飼糧采取多點(diǎn)取樣法，每種飼糧取樣500 g于4 ℃保存待分析，試驗(yàn)飼糧中粗蛋白質(zhì)含量參照GB/T 6432—1994方法測(cè)定，鈣(Ca)含量參照GB/T 13885—2003方法測(cè)定，蛋氨酸(Met)、賴氨酸(Lys)和蛋氨酸+半胱氨酸(Met+Cys)含量參照GB/T 18246—2000方法測(cè)定。試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2，飼糧脂肪酸組成見(jiàn)表3。

表2 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 2 Composition and nutrient levels of the experimental diets (air-dry basis) %

續(xù)表2項(xiàng)目Items組別Groups1234沸石粉Zeolitepowder0.050.500.45合計(jì)Total100.00100.00100.00100.00營(yíng)養(yǎng)水平Nutrientlevels2)代謝能ME/(MJ/kg)11.1511.1511.1511.15粗蛋白質(zhì)CP16.6016.6116.6116.61鈣Ca3.373.363.373.37有效磷AP0.340.340.340.34賴氨酸Lys0.860.870.870.88蛋氨酸Met0.380.390.380.37蛋氨酸+半胱氨酸Met+Cys0.670.680.690.68

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供The premix provided the following per kg of diets：VA 12 500 IU，VD3425 IU，VE 115 IU，VK 2 mg，VB10.98 mg，VB28.5 mg，VB68 mg，D-泛酸D-pantothenic acid 50 mg，煙酸 niacin 32.5 mg，生物素 biotin 2 mg，葉酸 folic acid 5 mg，VB125 mg，Cu (as copper sulfate) 8 mg，I (as potassium iodide) 1 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 60 mg，Se (as sodium selenite) 0.3 mg，Mn (as manganese sulfate) 65 mg，Zn (as zinc sulfate) 66 mg，植酸酶 phytase 500 mg，酵母培養(yǎng)物 yeast culture 10 g，茶多酚 tea polyphenols 50 mg，乙氧基喹琳 ethoxyquin 100 mg。

2)代謝能和有效磷為計(jì)算值，其余為實(shí)測(cè)值。ME and AP were calculated values, while the others were measured values.

表3 飼糧脂肪酸組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 3 Fatty acid composition of experimental diets (DM basis) mg/g

續(xù)表3項(xiàng)目Items組別Groups1234C24∶00.150.140.130.12C22∶6n-30.290.254.074.06C24∶10.040.020.010.01飽和脂肪酸SFA9.759.6710.8410.96不飽和脂肪酸PUFA22.6721.6925.2125.22n-3不飽和脂肪酸n-3PUFA1.561.505.205.29n-6不飽和脂肪酸n-6PUFA21.0920.1820.0019.92n-6不飽和脂肪酸/n-3不飽和脂肪酸n-6PUFA/n-3PUFA13.5213.453.853.76

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)期間由專人對(duì)試驗(yàn)產(chǎn)蛋雞進(jìn)行管理和飼喂，采用3層階梯式蛋雞籠飼養(yǎng)，每籠(長(zhǎng)×寬×高為57 cm×47 cm×47 cm)3只，試驗(yàn)雞只自由采食和飲水，光照周期16 h(白天)∶8 h(黑夜)，光照強(qiáng)度20 lx，舍溫(21±2) ℃，相對(duì)濕度50%～60%，自然通風(fēng)結(jié)合縱向負(fù)壓通風(fēng)，每3 d帶雞消毒1次并清掃雞舍，每天通過(guò)自動(dòng)清糞機(jī)清理2次，試驗(yàn)期常規(guī)免疫。每天喂料3次(07:30、12:30和17:30)，撿蛋1次。預(yù)試期1周，正試期8周。

1.3 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.3.1 生產(chǎn)性能

觀察每組雞的健康狀況。試驗(yàn)期內(nèi)，每日以重復(fù)為單位準(zhǔn)確記錄總蛋重、產(chǎn)蛋數(shù)，軟破蛋及異常蛋數(shù)(各種畸形、超大、超小)用于計(jì)算平均蛋重(扣除破軟蛋及異形蛋數(shù))，每2周結(jié)料1次。計(jì)算正試期內(nèi)的產(chǎn)蛋率、日產(chǎn)蛋量、平均蛋重、平均日采食量及料蛋比。

1.3.2 雞蛋內(nèi)部品質(zhì)和卵黃比例

飼養(yǎng)試驗(yàn)的第8周末，選取最接近每重復(fù)平均蛋重的3枚樣蛋，測(cè)定卵黃顏色、蛋白高度及哈氏單位等蛋品質(zhì)指標(biāo)。卵黃顏色、蛋白高度和哈氏單位采用SONOVA蛋品質(zhì)自動(dòng)分析儀測(cè)定(Orka food technology Ltd，Ramat Hasharon，以色列)。電子天平稱量蛋重，分離卵黃并稱卵黃重，計(jì)算卵黃比例。

1.3.3 卵黃脂質(zhì)組成

飼養(yǎng)試驗(yàn)的第8周末，每重復(fù)收集3枚接近該重復(fù)平均蛋重的樣蛋，分離卵黃，電子天平稱重并記錄卵黃重，混合攪拌均勻后，-20 ℃保存。卵黃樣品真空凍干(72 h)后稱重并記錄，卵黃干物質(zhì)(%)=100×凍干后重量(g)/凍干前重量(g)。凍干后卵黃小心粉碎，過(guò)40目篩，4 ℃保存。

卵黃粗脂肪含量采用Folch法[9]分析，并計(jì)算卵黃干物質(zhì)中粗脂肪含量；卵黃干物質(zhì)中膽固醇和甘油三酯含量采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測(cè)定，測(cè)定方法及步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

卵黃中總磷脂含量的測(cè)定參照Palacios等[10]的方法，并稍作修改。具體如下：50 mL(95%)的乙醇抽提7 g卵黃凍干粉，混勻直到卵黃完全分散，2 000 r/min離心5 min，利用分液漏斗分離后，再用30 mL正己烷抽提2次，將抽提后的液體也加入之前的分液漏斗中；再用30 mL(95%)酒精抽提沉淀2次，將抽提液也加入之前的分液漏斗中，輕輕搖晃后靜置1 h待分層，移除乙醇相，正己烷相再加入50 mL(90%)的乙醇混勻，然后靜置分離，將底部的正己烷分離出來(lái)，將之前乙醇相中乙醇蒸發(fā)后，加30 mL正己烷溶解脂質(zhì)，轉(zhuǎn)移到分液漏斗后，加入100 mL(-20 ℃)丙酮，小心攪動(dòng)，沉淀出總磷脂，5 ℃條件下1 500 r/min 離心15 min，上層液體倒出后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)剩余液體，剩余的固體即總磷脂。

1.3.4 飼糧及卵黃中脂肪酸組成

脂肪酸測(cè)定：稱取卵黃凍干粉(90±10) mg[飼糧稱取(0.30±0.01) g]，轉(zhuǎn)移至15 mL螺口試管中，依次加入1 mL正己烷，1 mL內(nèi)標(biāo)液(1 mg/mL十一烷酸甲酯-正己烷溶液)再加入4 mL甲醇∶乙酰氯(體積比為10∶1)混合液?；靹蚝?，在80 ℃水浴鍋中甲酯化3 h。甲酯化后取出，冷卻至室溫，緩緩加入5 mL 7%碳酸鉀溶液，渦旋混勻后，于4 000 r/min離心5 min，取上層有機(jī)相1.2 mL用于分析。使用GC-450氣相色譜儀(天美科學(xué)儀器有限公司)，采用Agilent DB-23色譜柱(60 m×250 μm×0.25 μm)。氦氣作為載氣，柱流量：恒流為1.00 mL/min。檢測(cè)器溫度：280 ℃；進(jìn)樣口溫度，270 ℃；程序升溫：100 ℃維持5 min后，以4 ℃/min升溫至240 ℃(30 min)，進(jìn)樣量1.0 μL。以正己烷為清洗液，進(jìn)樣前后各清洗3次。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值”表示。所有數(shù)據(jù)用Excel進(jìn)行整理，并用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件中的一般線性模型(GLM)程序進(jìn)行2×2因子分析，并對(duì)膽堿水平和裂殖壺菌油水平的主效應(yīng)及其交互作用進(jìn)行多元方差分析。當(dāng)膽堿水平和裂殖壺菌油具顯著交互作用時(shí)，采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，P<0.05為顯著差異標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)高峰期產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表4可知，飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)高峰期產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能無(wú)顯著影響(P>0.05)。其中，3組日產(chǎn)蛋量略有降低，但與其他各組相比差異不顯著(P>0.05)；飼糧添加1 000 mg/kg膽堿各組的平均蛋重高于500 mg/kg膽堿各組，但差異不顯著(P>0.05)。

表4 飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)高峰期產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能的影響Table 4 Effects of dietary choline and Schizochytrium oil on performance of laying hens during peak of laying

同列平均值肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

Means within the same column with different small letter superscripts mean significantly different (P<0.05). The same as below.

2.2 飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)蛋品質(zhì)的影響

由表5可知，飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)雞蛋中蛋白高度及哈夫單位均無(wú)顯著影響(P>0.05)。飼糧添加0.5%裂殖壺菌油可一定程度上提高卵黃顏色，但差異不顯著(P>0.05)。飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)雞蛋的卵黃比例無(wú)顯著影響(P>0.05)。綜上，在本試驗(yàn)條件下，飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)雞蛋內(nèi)部品質(zhì)無(wú)顯著影響。

2.3 飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)卵黃脂質(zhì)組成的影響

由表6可知，飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)雞蛋卵黃中干物質(zhì)、粗脂肪、膽固醇及甘油三酯含量均無(wú)顯著影響(P>0.05)。飼糧添加0.5%裂殖壺菌油具有提高卵黃干物質(zhì)含量的趨勢(shì)(P=0.08)。飼糧添加0.5%裂殖壺菌油組的卵黃中粗脂肪和甘油三酯含量升高、膽固醇含量降低，但差異均不顯著(P>0.05)；相對(duì)于飼糧中添加500 mg/kg膽堿，飼糧中添加1 000 mg/kg膽堿可顯著提高卵黃中的總磷脂含量(P<0.05)；2組與4組中卵黃總磷脂含量顯著高于1組和3組(P<0.05)。綜上，產(chǎn)蛋雞飼糧中添加1 000 mg/kg膽堿可顯著提高卵黃中總磷脂含量。

表5 飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)蛋品質(zhì)的影響Table 5 Effects of dietary choline and Schizochytrium oil on egg quality

表6 飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)卵黃脂質(zhì)組成的影響(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 6 Effects of dietary choline and Schizochytrium oil on lipid composition in yolk (DM basis)

2.4 飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)卵黃脂肪酸組成的影響

由表7可知，飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)卵黃中飽和脂肪酸和PUFA含量無(wú)顯著影響(P>0.05)；飼糧膽堿水平顯著影響卵黃中n-3 PUFA、DHA含量和n-6 PUFA/n-3 PUFA值(P<0.05)，與添加500 mg/kg膽堿組相比，1 000 mg/kg膽堿組的n-3 PUFA和DHA含量顯著提高(P<0.05)，n-6 PUFA/n-3 PUFA值顯著降低(P<0.05)；飼糧裂殖壺菌油水平顯著影響卵黃中n-3 PUFA、n-6 PUFA、DHA含量和n-6 PUFA/n-3 PUFA值(P<0.05)，與未添加裂殖壺菌油組相比，0.5%裂殖壺菌油可顯著提高卵黃n-3 PUFA和DHA含量(P<

0.05)，顯著降低n-6 PUFA含量和n-6 PUFA/n-3 PUFA值(P<0.05)。對(duì)于卵黃中n-3 PUFA、n-6 PUFA、DHA含量和n-6 PUFA/n-3 PUFA值而言，膽堿和裂殖壺菌油具顯著交互作用(P<0.05)。4組卵黃中n-3 PUFA和DHA含量均顯著高于其他組(P<0.05)；與3組相比，4組卵黃中n-3 PUFA和DHA含量分別提高了15.20%和14.58%(P<0.05)。綜上，飼糧中添加0.5%裂殖壺菌油可顯著增加卵黃中n-3 PUFA和DHA含量，顯著降低n-6 PUFA含量和n-6 PUFA/n-3 PUFA值；在添加0.5%裂殖壺菌油的同時(shí)添加1 000 mg/kg膽堿可促進(jìn)卵黃中DHA的沉積。

3 討 論

3.1 飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)高峰期產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響

研究表明，蛋雞飼糧中添加1 000 mg/kg膽堿對(duì)產(chǎn)蛋率、平均日采食量、平均蛋重及料蛋比均無(wú)顯著影響[11]。此外，飼糧中添加2%裂殖壺菌粉(DHA提供量略高于0.5%裂殖壺菌油)對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能亦無(wú)顯著影響[5]，與本試驗(yàn)結(jié)果相似。在本試驗(yàn)中，各組間蛋白高度、哈夫單位、卵黃顏色及卵黃比例均無(wú)顯著差異，這些結(jié)果與飼糧中分別添加膽堿或裂殖壺菌油的蛋品質(zhì)結(jié)果相似[11-12]，表明在本試驗(yàn)中添加的膽堿和裂殖壺菌油的水平，對(duì)高峰期產(chǎn)蛋雞的蛋品質(zhì)無(wú)顯著影響。

3.2 飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)雞蛋卵黃中磷脂含量的影響

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，產(chǎn)蛋雞飼糧添加1 000 mg/kg膽堿，可使卵黃中磷脂含量顯著提高，這一結(jié)果與前人試驗(yàn)結(jié)果[8]相似。一方面，膽堿在機(jī)體內(nèi)會(huì)通過(guò)胞苷二磷酸膽堿途徑合成磷脂酰膽堿(PC)，PC會(huì)經(jīng)血液轉(zhuǎn)運(yùn)富集在卵黃中，而PC是卵黃磷脂的重要組成部分(占卵黃磷脂的78%[13])，所以飼糧中添加膽堿會(huì)促進(jìn)卵黃中PC含量增加進(jìn)而提高總磷脂含量。另一方面，膽堿還會(huì)通過(guò)甲基轉(zhuǎn)移的途徑參與磷脂酰乙醇胺(PE)的合成[14]，PE同樣是卵磷脂的重要組成成分之一(占總磷脂的18%)[13]，PE含量增高也能使卵黃磷脂的含量增加。在本試驗(yàn)中，產(chǎn)蛋雞飼糧添加裂殖壺菌油可略降低卵黃中膽固醇含量，但差異不顯著，這與前人的n-3 PUFA可降低卵黃膽固醇的結(jié)果有所不同，這是由于裂殖壺菌油中的n-3 PUFA主要是DHA，而n-3 PUFA中的α-亞麻酸(ALA)和二十碳五烯酸(EPA)是發(fā)揮降低卵黃膽固醇作用的主要脂肪酸[15]，這也很好地解釋了本試驗(yàn)中卵黃膽固醇未顯著降低的原因。此外，本試驗(yàn)中也同樣未發(fā)現(xiàn)卵黃磷脂和脂肪酸含量變化與卵黃甘油三酯含量之間的相關(guān)性[16]。

3.3 飼糧添加膽堿和裂殖壺菌油對(duì)雞蛋卵黃脂肪酸組成的影響

對(duì)比飼糧脂肪酸組成(表3)與卵黃脂肪酸組成(表7)，可以看到飼糧與卵黃PUFA、n-3 PUFA、DHA和n-6 PUFA幾種主要脂肪酸組成呈現(xiàn)出相似的特點(diǎn)，表明雞蛋卵黃脂肪酸組成與飼糧脂肪酸組成密切相關(guān)[12]。添加裂殖壺菌油飼糧中DHA含量是未添加組的15倍，而卵黃DHA含量?jī)H是未添加組的3.6倍。該結(jié)果與前人研究相似，也表示DHA在卵黃中的富集率還有可提升空間[5]。

通過(guò)比較飼糧和卵黃中脂肪酸組成，我們還注意到飼糧中DHA含量相近的2個(gè)組，添加1 000 mg/kg膽堿仍可顯著提高卵黃中DHA含量；與1組和3組相比，2組和4組中卵黃DHA含量分別提高了7.26%和14.58%，這是前人研究膽堿對(duì)卵黃脂質(zhì)影響時(shí)，并未關(guān)注的一點(diǎn)[8,11]。也是在本試驗(yàn)中首次得到證實(shí)：產(chǎn)蛋雞飼糧中膽堿和裂殖壺菌油聯(lián)合添加可促進(jìn)雞蛋卵黃中DHA沉積。該結(jié)果的出現(xiàn)可能與DHA在飼糧和卵黃中的存在形式相關(guān)。飼糧裂殖壺菌油中DHA主要為甘油三酯型DHA(DHA-TG，產(chǎn)品實(shí)測(cè))，而卵黃中富集的DHA則主要以卵磷脂型DHA(DHA-PC)的形式存在于卵磷脂中[17]。通常情況下，卵磷脂中PC的脂肪酸組成為C16∶0(33.1%)、C18∶0(11.3%)、C18∶1(32.2%)和C18∶2(9.2%)[18-19]，這表明DHA在蛋雞體內(nèi)并非單純以DHA-TG的形式轉(zhuǎn)運(yùn)，而是經(jīng)一系列的脂質(zhì)反應(yīng)后以DHA-PC的形式富集到卵黃中的。目前，在體外通過(guò)酶促反應(yīng)可以將n-3 PUFA結(jié)合到PC上[19-21]。推測(cè)在蛋雞體內(nèi)DHA-TG轉(zhuǎn)化為DHA-PC的途徑可能與之相似。其一，DHA-TG經(jīng)甘油三酯脂肪酶與激素敏感性脂肪酶水解作用下產(chǎn)生游離DHA，游離的DHA可以同溶血卵磷脂(LPC，由磷脂酶催化使PC脫去一個(gè)脂肪酸形成)發(fā)生再酯化形成DHA-PC[19]；其二，DHA-TG在甘油三酯脂肪酶的水解作用下，裂解為含有DHA的甘油二酯，并在特異性磷脂酶的催化作用下與PC直接發(fā)生酯交換反應(yīng)，進(jìn)而形成DHA-PC[22]。而膽堿促進(jìn)DHA-PC增加的原因可能與第2種合成方式有關(guān)。肝臟作為禽類脂代謝的主要場(chǎng)所[23]，其中不僅會(huì)發(fā)生膽汁酸和脂肪酶水解DHA-TG的反應(yīng)；膽堿也在肝臟中經(jīng)磷酸化轉(zhuǎn)化為胞苷二磷酸膽堿，在肝臟中磷酸膽堿二胞苷酰轉(zhuǎn)移酶催化下，胞苷二磷酸膽堿會(huì)與甘油二酯結(jié)合形成大量的PC，當(dāng)這些被結(jié)合的甘油二脂中含有DHA時(shí)形成的便是DHA-PC[24]。所以增加飼糧膽堿便相當(dāng)于間接增加肝臟中用于合成DHA-PC的磷脂底物，進(jìn)而促使了更多的DHA-PC合成。

DHA-PC從在肝臟中合成到富集于卵黃中還需要一系列的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，通常肝臟中DHA-PC、甘油三酯、固醇會(huì)與載脂蛋白B100(Apo-B100)形成極低密度脂蛋白(very low density lipoprotein，VLDL)在載脂蛋白-極低密度脂蛋白-Ⅱ(Apo-VLDL-Ⅱ)保護(hù)作用下，經(jīng)血液循環(huán)并定向轉(zhuǎn)運(yùn)到卵母細(xì)胞中。由于卵泡的基底膜和透明帶特點(diǎn)，只有直徑在25～40 nm VLDL才能與細(xì)胞膜表面的特異性受體結(jié)合，完成胞吞進(jìn)入卵母細(xì)胞中沉積[20,25]。這可能與DHA-PC通過(guò)血腦屏障,沉積在大腦中的方式有相似之處[26]，而很多特異性脂肪酸具有調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)脂類代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程的生理功能[27]，所以在這個(gè)過(guò)程中DHA-PC也許不僅是參與VLDL合成的外層結(jié)構(gòu)。此外，DHA結(jié)合到PC的途徑及轉(zhuǎn)運(yùn)DHA-PC的載脂蛋白是否具有特異性,還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)條件下：

① 飼糧添加1 000 mg/kg膽堿可增加雞蛋的卵黃磷脂含量，添加0.5%裂殖壺菌油可提高卵黃中DHA含量。

② 1 000 mg/kg膽堿和0.5%裂殖壺菌油同時(shí)添加促進(jìn)雞蛋卵黃中DHA的沉積，且對(duì)產(chǎn)蛋雞的生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)均無(wú)顯著影響。

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*Contributed equally

**Corresponding authors: XU Li, professor, E-mail: xuli_19621991@163.com; WU Shugeng, professor, E-mail: wushugeng@caas.cn

(責(zé)任編輯 田艷明)

Dietary Choline andSchizochytriumOil Enhance Docosahexaenoic Acid Enrichment in Egg Yolk

WANG Hao1,2WANG Xiaocui2*ZHANG Haijun2QI Guanghai2WANG Jing2XU Li1**WU Shugeng2**

(1.InstituteofAnimalNutrition,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030,China; 2.NationalEngineeringResearchCenterofBiologicalFeed,KeyLaboratoryofFeedBiotechnologyofMinistryofAgriculture,FeedResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalScience,Beijing100081,China)

The aim of this study was to evaluate the effects of dietary choline andSchizochytriumoil (SO) on lipid and docosahexaenoic acid (DHA) enrichment in egg yolk. Two hundred and eighty-eight 26-week-oldJinghonglaying hens were randomly divided into 4 groups consisting of 6 replicates each and 12 birds in each replicate. Using a 2×2 factorial experimental design, four isonitrogenous and isocaloric diets were supplemented with 500 mg/kg choline, 1 000 mg/kg choline, 500 mg/kg choline+0.5% SO and 1 000 mg/kg choline+0.5% SO, respectively. The feeding trial lasted for 8 weeks after 1 week adaption. The results showed as follows: 1) performance and egg quality in all groups were not significantly different (P>0.05). 2)The contents of dry matter, crude fat, cholesterol and triglycerides in yolk of different groups were not significantly different (P>0.05). The total phospholipid content in yolk of 1 000 mg/kg choline group was significantly increased compared with 500 mg/kg choline group (P<0.05). The interaction of choline and SO showed significant on the yolk total phospholipid content (P=0.04). The total phospholipid content in yolk of 1 000 mg/kg choline+0.5% SO group was the highest among all groups. 3) Dietary 0.5% SO significantly increased contents of n-3 polyunsaturated fatty acids (PUFA) and DHA, and significantly decreased n-6 PUFA content and the ratio of n-6 PUFA to n-3 PUFA (P<0.05) in yolk. The interactions of choline and SO were significant on contents of n-3 PUFA (P<0.001), n-6 PUFA (P=0.01) and DHA (P<0.001) as well as the ratio of n-6 PUFA to n-3 PUFA (P=0.01) in yolk. The contents of n-3 PUFA and DHA were significantly higher, while n-6 PUFA content and the ratio of n-6 PUFA to n-3 PUFA were significantly lower in yolk of 1 000 mg/kg choline+0.5% SO group than those in the other groups (P<0.05). It is concluded that dietary 1 000 mg/kg choline and 0.5% SO enhance the DHA enrichment in egg yolk and have no adverse effects on performance and egg quality under the experimental condition.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(7)：2374-2383]

choline; egg yolk; DHA; fatty acid;Schizochytriumoil

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.07.020

2016-12-29

現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-41-K13)；家禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系北京市創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)(CARS-PSTP)；國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2014BAD13B04)

王 浩(1986—)，男，黑龍江哈爾濱人，博士研究生，從事蛋品質(zhì)營(yíng)養(yǎng)調(diào)控研究。E-mail: kxkl3001@163.com

S816.7

A

1006-267X(2017)07-2374-10

*同等貢獻(xiàn)作者

**通信作者：許 麗，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail: xuli_19621991@163.com；武書(shū)庚，研究員，碩士生導(dǎo)師，E-mail: wushugeng@caas.cn