miR-125b靶向Sema4C調(diào)控STAT3信號(hào)通路影響非霍奇金淋巴瘤的侵襲遷移①

姜 麗 朱尊民 周 放 袁曉莉

(鄭州大學(xué)河南省人民醫(yī)院血液內(nèi)科，鄭州410003)

miR-125b靶向Sema4C調(diào)控STAT3信號(hào)通路影響非霍奇金淋巴瘤的侵襲遷移①

姜 麗 朱尊民 周 放 袁曉莉

(鄭州大學(xué)河南省人民醫(yī)院血液內(nèi)科，鄭州410003)

目的：研究miR-125b靶向Sema4C調(diào)控STAT3信號(hào)通路影響非霍奇金淋巴瘤的侵襲遷移。方法：運(yùn)用QT-PCR法檢測(cè)miR-125b在非霍奇金淋巴瘤組織和細(xì)胞株中的表達(dá)；運(yùn)用免疫組化法檢測(cè)Sema4C在正常淋巴組織和非霍奇金淋巴瘤組織中的表達(dá)；用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)miR-125b對(duì)Sema4C轉(zhuǎn)錄活性的影響；用Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-125b的表達(dá)對(duì)NK-92細(xì)胞侵襲能力的影響；用 Western blot法檢測(cè)過(guò)表達(dá)miR-125b后NK-92細(xì)胞Sema4C的表達(dá)變化；Western blot法檢測(cè)沉默Sema4C后NK-92細(xì)胞STAT3信號(hào)通路的蛋白表達(dá)水平變化。結(jié)果：與正常淋巴組織比較，miR-125b在非霍奇金淋巴瘤組織中表達(dá)明顯降低[(0.48±0.05)% vs (1.59±0.38)%,P<0.05]，Sema4C在非霍奇金淋巴瘤中表達(dá)較高[(1.36±0.25)% vs (0.34±0.08)%,P<0.05]；過(guò)表達(dá)miR-125b后，NK-92細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力明顯降低[(326.25±7.75)% vs (58.75±5.76)%]，Sema4C的表達(dá)水平下調(diào)[(84.26±6.94)% vs (15.61±4.68)%,P<0.05]。沉默Sema4C后，NK-92細(xì)胞JAK和STAT3蛋白表達(dá)下調(diào)[(85.26±6.94)% vs (12.61±4.32)%,P<0.05]；雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果顯示，miR-125b可以直接調(diào)控Sema4C的轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)論：在非霍奇金淋巴瘤組織和細(xì)胞株中，miR-125b可靶向Sema4C的表達(dá)，從而調(diào)控非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞的侵襲和遷移能力。

非霍奇金淋巴瘤；miR-125b；Sema4C；STAT3

惡性淋巴瘤是血液腫瘤中發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，發(fā)現(xiàn)晚，誤診率高，在中國(guó)發(fā)病率遠(yuǎn)高于西方發(fā)達(dá)國(guó)家，嚴(yán)重危害人類健康的疾病[1]。世界衛(wèi)生組織年將其作為惡性血液組織腫瘤中的一種獨(dú)特類型[2]。非霍奇金淋巴瘤的病因和發(fā)病機(jī)制還沒(méi)有徹底研究清楚，一般認(rèn)為是體內(nèi)和體外多種混合因素相互作用的結(jié)果，如病毒感染、理化刺激、免疫缺陷等都可能與非霍奇金淋巴瘤的發(fā)病相關(guān)。

目前化療、放療、免疫生物治療等是治療非霍奇金淋巴瘤的主要方法，盡管少部分亞型非霍奇金淋巴瘤可以通過(guò)上述方案獲得早期病情緩解，能夠獲得有效的治療效果，但是，大部分類型的非霍奇金淋巴瘤治療后收效甚微，出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，或者在治療后很快出現(xiàn)復(fù)發(fā)[3]。目前研究表明，非霍奇金淋巴瘤的復(fù)發(fā)、耐藥等生物學(xué)特性與靶基因或者分子標(biāo)志物有一定關(guān)聯(lián)，因此，對(duì)非霍奇金淋巴瘤的分子發(fā)病機(jī)制研究，可以為臨床診治提供有效的作用靶點(diǎn)和標(biāo)志物，具有重要的臨床意義。

近年來(lái)有些研究報(bào)道指出，某些miRNA與哺乳動(dòng)物血液細(xì)胞的生成、分化相關(guān)，可以干擾造血過(guò)程及血液系統(tǒng)循環(huán)的過(guò)程[4]。最近研究表明，特定的miRNA在T細(xì)胞和B細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中可以扮演重要的角色[5]。另外，miRNA與非霍奇金淋巴瘤的發(fā)生進(jìn)展也有部分關(guān)聯(lián)。例如在彌漫性大B淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)miRNA-17a家族可與癌基因C-myc相互協(xié)調(diào)，誘導(dǎo)淋巴瘤形成。miRNA-19家族也可調(diào)控PTEN腫瘤抑制基因來(lái)促進(jìn)淋巴瘤的增生和自身免疫病的形成[6]。

最近許多研究證實(shí)，miRA-125b在多種腫瘤中高表達(dá)，在造血細(xì)胞分化過(guò)程中起到重要作用，與其他下調(diào)的miRNA共同作用，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。我們推測(cè)，miR-125b可能與淋巴瘤的發(fā)展分化有一定的相關(guān)性。本試驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)miR-125b在非霍奇金淋巴瘤中表達(dá)變化，檢測(cè)過(guò)表達(dá)miR-125后Sema4C蛋白水平的變化和非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為的改變，推測(cè)miR-125b通過(guò)Sema4C對(duì)非霍奇金淋巴瘤的影響，通過(guò)檢測(cè)STAT3信號(hào)蛋白水平變化驗(yàn)證以上作用。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞株與主要試劑 人非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞株NK-92 購(gòu)于上海中山細(xì)胞庫(kù)，用含有10%胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)液在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)和傳代。胎牛血清、RPMI1640培養(yǎng)基均購(gòu)自Hyclone公司(Hyclone,Logan,UT)。Transwell小室購(gòu)自美國(guó)Millipore公司(Millipore,Billerica,MA)，Matrigel購(gòu)自Bio-Rad(Bio-Rad,Madrid,Spain)。Sema4C兔單克隆抗體購(gòu)自Abcam(ab171559)。miR-125b mimics、miR-125b inhibitors、Sema4C沉默及對(duì)照慢病毒購(gòu)自上海吉?jiǎng)P制藥技術(shù)有限公司。miR-125b和Sema4C qPCR引物以及RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑盒均購(gòu)自上海吉瑪基因有限公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化試驗(yàn) 將石蠟包埋的組織行4 μmol/L 連續(xù)切片，60℃烤箱中烘烤3～4 h；二甲苯溶液脫蠟3次，每次15 min，80%～100%的酒精逐步水化，每次3 min；PBS 洗3次，每次3 min；將切片置入檸檬酸鹽緩沖液高壓修復(fù)10 min，置于PBS液中浸洗3次，每次3 min；3%過(guò)氧化氫甲醇溶液封閉10 min，PBS液洗3次，每次3 min；加山羊血清后靜置15 min滴加一抗，4℃孵育過(guò)夜；37℃復(fù)溫 30 min，PBS+1‰ Tween20 液浸洗3次，每次3 min；室溫下滴加二抗孵育15 min，PBS+1‰ Tween20 液浸洗3次，每次3 min；滴加二氨基聯(lián)苯胺(DAB)后觀察染色情況；蘇木素染色，清水沖洗3次，烘箱內(nèi)烘干，用中性樹(shù)膠進(jìn)行封片。

1.2.2 qPCR 熒光定量PCR法檢測(cè)miR-125b和Sema4C的表達(dá) 首先合成雙向PCR引物，引物序列，miR-125b:5′-TCCCTGAGACCCTAACTTGT-3′，3′-AGGGACTCTGGGATTGAACA-5′，將反應(yīng)混合液加熱至94～98℃保持20～30 s，反應(yīng)溫度降至50～65℃時(shí)，引物與互補(bǔ)的序列形成氫鍵。退火溫度72℃，維持20～40 s，繼續(xù)降低至68℃，PCR反應(yīng)進(jìn)行30～35個(gè)循環(huán)，68～74℃延伸5～10 min，根據(jù)美國(guó)Sigma公司熒光定量試劑盒(GoTaq?qPCRMaster Mix)操作說(shuō)明配制反應(yīng)體系，每組反應(yīng)體系的體積為20 μl，并各設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，每組樣本cDNA 均需行目的RNA和內(nèi)參基因GAPDH熒光定量PCR擴(kuò)增。使DNA全部反應(yīng)完畢。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.3 Western blot法檢測(cè)蛋白表達(dá) 將細(xì)胞分為兩組，NC組為未處理的NK-92細(xì)胞組，LV3-Sema4C組為沉默Sema4C后的NK-92細(xì)胞組。制10%SDS-PAGE，每孔加入30 g蛋白樣品，在120V恒壓下條件下電泳60 min，使蛋白完全電泳散開(kāi)。使用濕轉(zhuǎn)法電轉(zhuǎn)至PVDF膜，5%脫脂奶粉封閉2 h，1∶1 000 TBST稀釋一抗(兔抗人Sema4C多克隆抗體)，4℃過(guò)夜；加入辣根過(guò)氧化酶物標(biāo)記羊抗兔IgG(1∶5 000)稀釋，室溫孵育2 h；ECL發(fā)光。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.4 Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)非霍奇金淋巴瘤瘤細(xì)胞遷移能力 Transwell小室的底面厚度為8 μmol/L，使用細(xì)胞培養(yǎng)基50 μl平鋪在小室底，Matrigel平鋪在小室上，常溫下凝膠后接種細(xì)胞。將NK92細(xì)胞濃度稀釋為 1×106個(gè)/ml，在小室上層加入300 μl含胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)基，向每個(gè)小室上層加入25 μl的細(xì)胞懸液，然后置于37℃孵箱孵育24 h。用無(wú)菌棉簽輕度擦拭上室上層的細(xì)胞，擦拭干凈后用結(jié)晶紫染色10 min，倒去染液PBS清洗5 min，然后于鏡下觀察并拍照計(jì)數(shù)。

1.2.5 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞遷移能力 將呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的NK-92細(xì)胞接種到6孔板中，分為兩組，NC組為未處理的NK-92細(xì)胞組，miR-125b-mimic組為過(guò)表達(dá)miR-125b后的NK-92細(xì)胞組。在恒溫孵箱中培養(yǎng)，等細(xì)胞長(zhǎng)滿視野時(shí)，使用黑色馬克筆孔板背后劃線，保證槍頭劃痕時(shí)垂直。使用高溫滅菌的20 μl槍頭在孔板上垂直于線劃痕。劃好后充分沖洗，將殘余懸浮細(xì)胞沖洗掉。然后向孔內(nèi)加入不含胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)基，置于恒溫孵箱孵育24、48、72 h后在顯微鏡下取點(diǎn)，觀察，拍照。分別測(cè)量細(xì)胞遷移的距離，與0 h的初始距離作對(duì)比，計(jì)算細(xì)胞的遷移率。

2 結(jié)果

2.1 miR-125b在非霍奇金淋巴瘤組織和細(xì)胞株中的表達(dá) 在非霍奇金淋巴瘤組織中，miR-125b的表達(dá)水平低于正常對(duì)照組織[(0.48±0.05)% vs (1.59±0.38)%]。在非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞株NK-92中miR-125b的表達(dá)水平低于正常對(duì)照細(xì)胞株[(0.31±0.04)% vs (1.12±0.25)%](圖1)。

2.2 免疫組化方法檢測(cè)在非霍奇金淋巴瘤中Sema4C的表達(dá)情況 在非霍奇金淋巴瘤組織中，Sema4C的表達(dá)水平高于正常對(duì)照組織[(1.36±0.25)% vs (0.34±0.08)%](圖2)。

圖1 miR-125b在非霍奇金淋巴瘤組織和NK-92細(xì)胞株中的表達(dá)Fig.1 miR-125b in non-Hodgkin′s lymphoma tissue and NK-92 cell lines were lower than normal control groupNote: Compared with NT，*.P<0.05.

2.3 雙熒光素酶驗(yàn)證Sema4C是NK-92細(xì)胞miR-125b下游的靶向基因 為了進(jìn)一步證實(shí)Sema4C是miR-125b下游的靶向基因，使用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在NK-92細(xì)胞中，Sema4C和PIK3R3是miR-214的直接靶點(diǎn)，Sema4C可能被上游miR-214調(diào)控其表達(dá)(圖3)。

2.4 過(guò)表達(dá)miR-125b后NK-92細(xì)胞Sema4C的蛋白表達(dá)情況 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與NC組相比，NK-92細(xì)胞miR-125b-mimic組中Sema4C蛋白表達(dá)水平明顯降低[(84.26±6.94)% vs(15.61±4.68)%]，說(shuō)明miR-125b-mimic轉(zhuǎn)染NK-92細(xì)胞之后可以有效的降低Sema4C蛋白的表達(dá)(圖4)。

2.5 過(guò)表達(dá)miR-125b后NK-92細(xì)胞的侵襲能力的變化 Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，miR-125b-mimic組穿透過(guò)基質(zhì)膠的NK-92細(xì)胞數(shù)量明顯少于NC組[(326.25±7.75)% vs (58.75±5.76)%]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。該結(jié)果表明，過(guò)表達(dá)miR-125b可以有效抑制NK-92細(xì)胞的侵襲能力(圖5)。

圖2 免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Sema4C在非霍奇金淋巴瘤組織中的表達(dá)情況Fig.2 Immunohistochemical test to detect expression of Sema4C in non-Hodgkin's lymphomaNote: Compared with NT,*.P<0.05.

圖3 雙熒光素酶驗(yàn)證Sema4C是miR-125b下游的靶向基因Fig.3 Sema4C is a target gene downstream of miR-125b by double luciferase assaysNote: Compared wiht NC，*.P<0.05.

圖4 Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-125b對(duì)Sema4C蛋白的調(diào)控作用Fig.4 miR-125b regulation of Sema4C protein detected by Western blotNote: Compared with NC，*.P<0.05.

圖5 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-125b對(duì)NK-92細(xì)胞侵襲能力的影響Fig.5 Effect of miR-125b on NK-92 cell invasion detected by Transwell invasion assayNote: Compared with NC，*.P<0.05.

2.6 過(guò)表達(dá)miR-125b后NK-92細(xì)胞遷移能力的變化 劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在顯微鏡下觀察，與NC對(duì)照組相比，miR-125b-mimic組細(xì)胞的遷移比率明顯降低，在24、48、72 h結(jié)果分別是(28.67±6.32)% vs (45.75±4.34)%；(48.45±6.35)% vs (67.64±6.85)%；(56.84±2.75)% vs (87.12±9.09)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。該結(jié)果表明，過(guò)表達(dá)miR-125b后可以有效抑制NK-92細(xì)胞的遷移能力(圖6)。

2.7 沉默Sema4C后NK-92細(xì)胞STAT3通路蛋白水平變化 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與NC組相比，LV3-Sema4C組NK-92細(xì)胞中JAK和STAT3蛋白表達(dá)水平明顯降低[(85.26±6.94)% vs(12.61±4.32)%]，說(shuō)明Sema4C的降低可以有效地下調(diào)信號(hào)通路STAT3蛋白的表達(dá)(圖7)。

圖6 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-125b對(duì)NK-92細(xì)胞遷移能力的影響Fig.6 Effect of miR-125b on NK-92 cell migration detected by Scratch healing testNote: Compared with NC，*.P<0.05，bar=100 μm.

圖7 Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NK-92細(xì)胞中Sema4C對(duì)STAT3通路蛋白的表達(dá)的影響Fig.7 Effect of Sema4C on STAT3 pathway protein expression in NK-92 cells detected by Western blot assayNote: Compared with NC，*.P<0.05.

3 討論

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道指出，miR-125b在乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌和肺癌中廣泛存在著表達(dá)缺失現(xiàn)象，提示其具有一定抑癌基因的功能[7-9]。不過(guò)在非霍奇金淋巴瘤中的作用機(jī)制尚未研究清楚。本課題首先驗(yàn)證了miR-125b在非霍奇金淋巴瘤組織和細(xì)胞株中的表達(dá)情況，然后通過(guò)免疫組化驗(yàn)證Sema4C在非霍奇金淋巴瘤組織中的表達(dá)情況，利用雙熒光素酶標(biāo)記證明Sema4C和miR-125b的相互關(guān)系。之后功能研究證實(shí)，過(guò)表達(dá)miR-126b可以在體外實(shí)驗(yàn)中明顯抑制非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞的侵襲和遷移。綜上所述，非霍奇金淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展與miR-125b的表達(dá)情況有密切的聯(lián)系。

miR-125b是目前研究熱度較高的腫瘤相關(guān)miRNA，Testoni 等[10]于2015年就在彌漫大B淋巴細(xì)胞瘤患者中發(fā)現(xiàn)miR-125b表達(dá)水平相對(duì)較為富集，這表示其預(yù)后可能不佳[11]。越來(lái)越多研究表明，miR-125b在炎癥、免疫系統(tǒng)和腫瘤細(xì)胞之間起到極為重要的作用，miR-125b既可以介導(dǎo)和調(diào)控炎癥的發(fā)生，又在選擇性激活或抑制免疫細(xì)胞的生長(zhǎng)和生物因子釋放，同時(shí)也參與腫瘤細(xì)胞的分化和成熟[12]。有研究表明，在蛋白激酶JNK及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子VEGF等的作用和炎性介質(zhì)的刺激下，miR-125b在高分化的B淋巴細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，提示miR-125b與淋巴瘤細(xì)胞的生物學(xué)功能密切聯(lián)系[13]。另有研究人員發(fā)現(xiàn)，在激活狀態(tài)下CD8+T細(xì)胞的miR-125b表達(dá)升高，miR-125b的表達(dá)下調(diào)能夠增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞的免疫抑制功能。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，miR-125也可以通過(guò)促進(jìn)炎性T細(xì)胞的活化，進(jìn)而導(dǎo)致自身免疫炎癥的出現(xiàn)[14,15]。同時(shí)也有相關(guān)調(diào)查表明，提高miR-125b在淋巴瘤細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄活性，可以調(diào)控STAT3通路蛋白的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲起到關(guān)鍵作用[16]。

Shi 等[17]運(yùn)用Targetscans/PICTAR預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)，miR-125b下游可能存在的靶基因位點(diǎn)，檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-125b可以與下游STAT3的某些保守序列相結(jié)合。因此我們推測(cè)，STAT3可能是miR-125b的潛在下游靶基因。

STAT是一種廣泛存在于多種人類惡性腫瘤組織及細(xì)胞系中的分子，在正常組織中很少出現(xiàn)STAT及其家族蛋白的活化情況，即使有，也只是短暫的活化。而且，STAT3也是眾多抑癌和促癌基因信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)的樞紐[18]。STAT家族中的STAT3蛋白，廣泛存在于多種腫瘤組織中，影響腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲等一系列的生物學(xué)行為，扮演促癌基因的角色。某些因子(IL-6、VEGF)在腫瘤細(xì)胞和其免疫微環(huán)境中起抑制某些抑癌基因的表達(dá)，從而導(dǎo)致免疫抑制的增強(qiáng)，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[19]。為了進(jìn)一步探討非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞中miR-125b的表達(dá)改變對(duì)Sema4C蛋白的影響。我們通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-125b到非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞，使miR-125b過(guò)表達(dá)后能夠有效降低Sema4C蛋白的表達(dá)。相反，在非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞中，可以通過(guò)抑制miR-125b表達(dá)，能上調(diào)Sema4C的表達(dá)。上述結(jié)果與其他腫瘤組織中Sema4C受miR-125b的調(diào)控情況相似[20,21]。

通過(guò)對(duì)非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，miR-125b過(guò)表達(dá)可以抑制非霍奇金淋巴瘤的增殖和侵襲。miR-125b在非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，Sema4C在非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞系中上調(diào)。通過(guò)以上結(jié)果可以推測(cè)，在生理狀態(tài)下，miR-125b/Sema4C保持低水平表達(dá)狀態(tài)，一旦進(jìn)入病理狀態(tài)，環(huán)路的平衡狀態(tài)被打破，則很大可能引起腫瘤的出現(xiàn)或發(fā)展。綜上所述，miR-125b/Sema4C/STAT3可能在非霍奇金淋巴瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，有可能成為預(yù)測(cè)非霍奇金淋巴瘤的發(fā)生和進(jìn)展的標(biāo)志物。

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[收稿2017-02-18 修回2017-03-11]

(編輯 許四平 劉格格)

miR-125b targets Sema4C regulating invasion and migration of Non-Hodgkin′s lymphoma by STAT3 signaling pathway involved

JIANGLi，ZHUZun-Min，ZHOUFang,YUANXiao-Li.

DepartmentofHematology,HenanProvincialPeople′sHospital,ZhengzhouUniversity，Zhengzhou410003，China

Objective:To investigate the effect of miR-125b targeting Sema4C on STAT3 signaling pathway on invasion and metastasis of non-Hodgkin′s lymphoma.Methods: Expression of miR-125b in non-Hodgkin′s lymphoma tissues and cell lines was detected by QT-PCR.Expression of Sema4C in normal lymphocyte tissues and non-Hodgkin′s lymphoma tissues was detected by immunohistochemistry.Dual luciferase effect of miR-125b on the transcriptional activity of Sema4C was examined by the reporter gene system.Transwell invasion assay was used to detect the expression of miR-125b in the non-Hodgkin′s lymphoma cell line NK-92.Scratch test Western blot was used to detect the expression of Sema4C.Western blot was used to detect the protein expression of STAT3 signal pathway after silencing Sema4C.The protein expression of Sema4C was detected by Western blot.Results: Expression of miR-125b was significantly lower in non-Hodgkin′s lymphoma tissues than that in normal tissues[(0.48±0.05)% vs (1.59±0.38)%,P<0.05].Sema4C was highly expressed in non-Hodgkin′s lymphoma[(326.25±7.75)% vs (58.75±5.76)%].After overexpression of miR-125b,non-Hodgkin′s lymphoma cells expression level of Sema4C was down-regulated after silencing Sema4C[(326.25±7.75)% vs (58.75±5.76)%],and the expression of JAK and STAT3 protein were down-regulated after miR-125b overexpression[(85.26±6.94)% vs (12.61±4.32)%,P<0.05].The dual luciferase reporter gene system showed that miR-125b could directly regulate the transcriptional activity of Sema4C.Conclusion: miR-125b can regulate the invasion and migration of non-Hodgkin′s lymphoma cells by targets the expression of Sema4C.

Non-Hodgkin′s lymphoma；miR-125b；Sema4C；STAT3

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.07.013

姜 麗(1981年-)，女，在讀博士，主治醫(yī)師，主要從事多發(fā)性骨髓瘤的診治、異基因造血干細(xì)胞移植方面的研究，E-mail：chenyanccai@sina.com。

及指導(dǎo)教師：朱尊民(1964年-)，男，博士，主任醫(yī)師，主要從事淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、急性白血病等血液系統(tǒng)疾病方面的研究。

R733.4

A

1000-484X(2017)07-1018-06

①本文為2012年度河南省醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(201203068)。