阿薩伊對虛熱和虛寒證大鼠的脂肪代謝、免疫物質(zhì)和內(nèi)分泌激素的影響

王子晨+張建軍+朱映黎+瞿研+費文婷+王莎+王景霞+王林元

[摘要] 研究阿薩伊對虛熱證、虛寒證大鼠的脂肪代謝、免疫物質(zhì)及內(nèi)分泌激素水平變化。SD大鼠分為空白組、虛熱模型組、虛熱模型加黃柏組、虛熱模型加阿薩伊高、低劑量組、虛寒模型組、虛寒模型加肉桂組、虛寒模型加阿薩伊高、低劑量組；采用每日肌肉注射地塞米松磷酸鈉、氫化可的松琥珀酸鈉1次、連續(xù)21 d的方法制備大鼠虛熱模型、虛寒模型；通過比色法檢測脂肪代謝（FFA，LPL，HL）指標變化以及免疫（IgG，IgM，C3，C4）指標變化；通過放免法檢測內(nèi)分泌激素（CORT，E2，T）指標變化。阿薩伊高劑量組能降低虛熱證大鼠血清中FFA，LPL，HL值（P<0.01或P<0.001）；阿薩伊高劑量組能顯著升高虛熱證大鼠血清中IgG，IgM，C3值（P<0.05或P<0.001）；阿薩伊高劑量組能顯著升高虛熱證大鼠血清中CORT值（P<0.05），能顯著降低E2，E2/T值（P<0.05）；阿薩伊高劑量組對虛寒模型脂肪代謝指標作用不明顯，但可以升高免疫指標IgG，IgM，C3值（P<0.05或P<0.001），同時對內(nèi)分泌激素指標CORT值也有升高的作用（P<0.05）。阿薩伊的作用趨向與黃柏一致，表現(xiàn)出對虛熱模型大鼠的調(diào)整作用；與肉桂相反，對虛寒模型大鼠的指標糾正不明顯。本實驗從同類比較、異類反證角度驗證了理論推導的阿薩伊中藥寒涼藥性。

[關(guān)鍵詞] 阿薩伊；虛熱證；虛寒證；脂肪代謝；免疫物質(zhì)；內(nèi)分泌激素；中藥藥性

[Abstract] To study the effects of Aaí （Euterpe oleracea） on lipid metabolism， immune substances and endocrine hormone level in rats with deficiency-heat and deficiency-cold syndrome. SD rats were divided into blank control group， deficiency-heat model group， deficiency-heat & Phellodendri Cortex group， deficiency-heat & Aaí high dose and low dose groups， deficiency-cold model group， deficiency-cold & Cinnamomi Cortex group， deficiency-cold & Aaí high dose and low dose groups. The rats received intramuscular injection of dexamethasone sodium phosphate （0.35 mg） or hydrocortisone sodium succinate （20 mg） for 21 days to set up deficiency-heat models and deficiency-cold models. Then the changes in fatmetabolism levels （FFA， LPL， HL） and immune indexes （IgG， IgM， C3 and C4） were detected by colorimeter；and the levels of endocrine hormone indexes （CORT， E2 and T） were detected by radioimmunoassay. The levels of FFA， LPL and HL in serum were reduced （P<0.01 or P<0.001）；levels of IgG， IgM and C3 in serum were increased （P<0.05 or P<0.001）；level of CORT in serum was increased （P<0.05） and the level of E2， E2/T in serum were reduced in the Aaí high dose group （P<0.05）. The effect of high dose Aaí on fat metabolism was not obvious in deficiency-cold models， but the levels of IgG， IgM， C3 and CORT in serum were increased （P<0.05 or P<0.001）. Aaí was showed the same effect trend with Phellodendri Cortex in adjusting the levels of deficiency-heat rats；but unlike Cinnamomi Cortex， Aaí was showed no obvious effect in adjusting the levels of deficiency-cold rats. In this experiment， homogeneous comparison and heterogeneous disproof were used to verify the cold nature of Aaí.

[Key words] Aaí；deficiency-heat；deficiency-cold；lipid metabolism；immune substances；endocrine hormone；Chinese herbal properties

阿薩伊（英文名：Aaí）在我國被稱為巴西莓，一種產(chǎn)自南美的棕櫚樹Euterpe oleraceae Mart.的新鮮果實[1]，在巴西、秘魯、哥倫比亞、蘇里南等地廣泛使用[2]，2013年由衛(wèi)生部引入我國[3]。在古代，中醫(yī)藥是古絲綢之路商貿(mào)活動的重要內(nèi)容。兩晉南北朝時期，中醫(yī)藥傳入朝鮮、日本、韓國，并逐步影響到東南亞諸國。隋唐五代、宋元時期，鑒真東渡日本，玄奘西行取經(jīng)，加強了中醫(yī)藥與周邊國家的交流。隨后，乳香、沒藥、血竭等阿拉伯地區(qū)傳統(tǒng)藥物也隨絲綢之路交流傳入中國，豐富了本草學品種。如今在中醫(yī)藥現(xiàn)代化背景下，作為外來植物藥的阿薩伊能否引入中藥與我國現(xiàn)有中藥進行配伍使用發(fā)揮醫(yī)療保健作用，尚需要進行理論及實驗多方面的科學研究。

萬物以陰陽為綱，藥物以寒熱分之，在中藥藥性中寒熱藥性起著舉足輕重的地位，同時也是當今藥性研究的主要方向[4]?！端貑枴吩疲骸八^寒熱溫涼，反從其病也?！备鶕?jù)巴西、秘魯?shù)饶厦赖貐^(qū)傳統(tǒng)醫(yī)學記載，阿薩伊可用于治療痢疾，皮膚潰瘍，發(fā)燒以及糖尿病，脫發(fā)，出血，肝炎、黃疸等肝臟疾病，腎臟疾病，瘧疾，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)期疼痛和肌肉酸痛等?，F(xiàn)代藥理、臨床研究表明阿薩伊具有抗氧化、抗癌、抗炎、降脂、降糖、保肝等多方面的作用。以中醫(yī)藥理論為指導，作者提出了阿薩伊性涼的科學假說[5]，進而又通過藥理學實驗的方法通過考察cAMP，cGMP，T3，T4，rT3，TP，UA，TC，TG，ALB等指標變化，對阿薩伊的寒涼藥性進行了驗證[6]。而本實驗則進一步以同類比較、異類反證角度通過考察阿薩伊對虛熱證、虛寒證大鼠代謝、免疫以及內(nèi)分泌激素的影響，對阿薩伊的寒涼藥性進行藥理學實驗驗證。

1 材料

1.1 藥品 阿薩伊凍干粉[蒙納維（上海）貿(mào)易有限公司，批號20151102]；地塞米松磷酸鈉（天津金耀集團湖北天藥藥業(yè)股份有限公司，批號H42020020）；氫化可的松琥珀酸鈉（天津生物化學制藥有限公司，批號H21020493）；黃柏配方顆粒（北京康仁堂藥業(yè)有限公司，批號15015431）；肉桂配方顆粒（北京康仁堂藥業(yè)有限公司，批號15025691）。

1.2 動物 SD大鼠90只，雄性，體重（240±10） g。由斯貝福動物實驗中心提供，合格證號SCXK（京）2016-0002。

1.3 試劑 游離脂肪酸（FFA）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20160301）；脂蛋白酯酶（LPL）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20160301）；肝脂肪酶（HL）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20160306）；免疫球蛋白G（IgG）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20160206）；免疫球蛋白M（IgM）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20160206）；補體C3（C3）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20160208）；補體C4（C4）試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號20160208）；皮質(zhì)酮（CORT）放免試劑盒（北京華英生物技術(shù)研究所，批號20160306）；雌二醇（E2）放免試劑盒（北京華英生物技術(shù)研究所，批號20160228）；睪酮（T）放免試劑盒（北京華英生物技術(shù)研究所，批號20160228）。

1.4 儀器 XH-6020全自動放免計數(shù)儀（西安核儀器廠）；STAT FAX 2100全自動酶標儀（Awareness Technology Inc.，USA）；日本日立7160全自動生化儀；TGL-16A臺式高速冷凍離心機；JY203電子天平。

2 方法

2.1 分組、造模及給藥 SD大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，隨機分成9組，每組10只，即空白組、虛熱模型組、虛熱模型加黃柏配方顆粒組（5 g·kg^-1相當于60 kg人每日生藥量37.5 g）、虛熱模型加阿薩伊凍干粉高劑量組（3.2 g·kg^-1相當于60 kg人每日生藥量24 g）、虛熱模型加阿薩伊凍干粉低劑量組（1.6 g·kg^-1相當于60 kg人每日生藥量12 g）、虛寒模型組、虛寒模型加肉桂配方顆粒組（30 g·kg^-1相當于60 kg人每日生藥量225 g）、虛寒模型加阿薩伊凍干粉高劑量組（3.2 g·kg^-1相當于60 kg人每日生藥量24 g）、虛寒模型加阿薩伊凍干粉低劑量組（1.6 g·kg^-1相當于60 kg人每日生藥量12 g）。動物適應數(shù)天后，肌肉注射地塞米松磷酸鈉（0.35 mg·kg^-1）造成虛熱證模型，肌肉注射氫化可的松琥珀酸鈉（20 mg·kg^-1）造成虛寒證模型，每日上午造模，持續(xù)21 d[16-17]。除空白組、模型組每天灌胃去離子水外，其余各組灌胃相應藥物。造模7 d后，按大鼠每100 g體重灌胃1 mL給藥，每日下午1次，給藥14 d，根據(jù)體重適當調(diào)整灌胃量。

2.2 檢測指標 從造模第8天下午開始給藥，第22天腹主動脈取血，分離血清，采用放免、比色等方法檢測各組大鼠血清中游離脂肪酸（FFA）、脂蛋白酯酶（LPL）、肝脂肪酶（HL）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、補體C3（C3）、補體C4（C4）、皮質(zhì)酮（CORT）、雌二醇（E2）、睪酮（T）等指標的變化。

2.3 統(tǒng)計方法 數(shù)據(jù)用±s表示，采用SPSS 20.0的One-way ANOVA過程進行統(tǒng)計學分析，以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

3.1 阿薩伊凍干粉對虛熱證、虛寒證脂肪代謝水平的影響 與空白組比較，虛熱模型組FFA，LPL，HL值均明顯升高（P<0.01或P<0.001）；與模型組比較，黃柏組FFA，LPL，HL值均明顯降低（P<0.001）；阿薩伊高劑量組FFA，LPL，HL值均明顯降低（P<0.01或P<0.001）；阿薩伊低劑量組FFA，LPL，HL值均明顯降低（P<0.05，P<0.001，P<0.01）。

與空白組比較，虛寒模型組FFA，LPL，HL值均明顯降低（P<0.01或P<0.001）；與模型組比較，肉桂組FFA，LPL，HL值均明顯升高（P<0.001或P<0.05）；阿薩伊高劑量組、阿薩伊低劑量組FFA，LPL，HL值差異不顯著，見表1。

3.2 阿薩伊凍干粉對虛熱證、虛寒證免疫水平的影響 與空白組比較，虛熱模型組IgG，IgM，C3值明顯降低（P<0.05，P<0.01，P<0.001），C4值明顯升高（P<0.01）；與模型組比較，黃柏組IgG，IgM，C3值明顯升高（P<0.01或P<0.05）；C4值差異不顯著，無統(tǒng)計學意義；阿薩伊高劑量組IgG，IgM，C3值均明顯升高（P<0.01或P<0.001）；阿薩伊低劑量IgG，IgM，C3值均明顯升高（P<0.05，P<0.001，P<0.01）；C4值差異不顯著，無統(tǒng)計學意義。

與空白組比較，虛寒模型組IgG，IgM，C3，C4值明顯降低（P<0.001或P<0.05）；與模型組比較，肉桂組IgG，IgM，C3，C4值明顯升高（P<0.001）；阿薩伊高劑量組IgG，IgM，C3值明顯升高（P<0.05或P<0.001）；C4值差異不顯著，無統(tǒng)計學意義；阿薩伊低劑量組IgM值明顯升高（P<0.001）；IgG，C3，C4值差異不顯著，無統(tǒng)計學意義，見表2。

3.3 阿薩伊凍干粉對虛熱證、虛寒證內(nèi)分泌激素水平的影響 與空白組比較，虛熱模型組CORT，T值明顯降低（P<0.001，P<0.05），E2，E2/T值明顯升高（P<0.001，P<0.01）。與模型組比較，黃柏組CORT，T值明顯升高（P<0.05），E2，E2/T值明顯降低（P<0.001，P<0.01）；阿薩伊高劑量組CORT值明顯升高（P<0.05），E2，E2/T值明顯降低（P<0.05）；阿薩伊低劑量組E2/T值明顯降低（P<0.05）。

與空白組比較，虛寒模型組CORT，T值明顯降低（P<0.001，P<0.05），E2，E2/T值明顯升高（P<0.001）。與模型組比較，肉桂組CORT，T值明顯升高（P<0.001，P<0.01），E2，E2/T值明顯降低（P<0.001）；阿薩伊高劑量組CORT值明顯升高（P<0.05），E2，T，E2/T值差異不顯著，無統(tǒng)計學意義；阿薩伊低劑量組CORT值明顯升高（P<0.05），E2，T，E2/T值差異不顯著，無統(tǒng)計學意義，見表3。

4 討論

“藥有寒熱溫涼四氣”，辯其寒熱，需臨證而嘗之，“取其偏長為本?！逼诤呱浦螣嶙C，偏于熱者善治寒證，觀其證候之變，以析寒熱[7]。在中醫(yī)理論體系中，虛熱者，陰氣虧耗，失于制陽，無以滋潤、寧靜制約陽熱，常以燥熱、升動化氣太過而見之。虛寒者，陽氣虧耗，失于制陰，以至推動、氣化、溫煦功能減退，常以精神不振、面色淡白、少氣乏力、畏寒肢冷而見之[8-9]。筆者根據(jù)文獻的方法[10-12]，分別采用地塞米松磷酸鈉與氫化可的松琥珀酸鈉誘導大鼠產(chǎn)生類似中醫(yī)虛熱與虛寒的證候。

基于已有實驗研究的基礎(chǔ)，進一步分析本研究指標變化。在脂肪代謝水平上，當垂體-甲狀腺機能活躍，甲狀腺激素分泌亢進，進一步動員了脂肪內(nèi)的甘油三酯（TG），增強了脂蛋白酯酶（LPL）、肝酯酶（HL）的活性，促進了脂蛋白內(nèi)源性與外源性2條代謝途徑，使游離脂肪酸（FFA）增加，而游離脂肪酸是持久活動的所需物質(zhì)更是熱量的直接來源，故實驗大鼠出現(xiàn)虛熱證候。當垂體-甲狀腺機能減退，甲狀腺激素分泌減弱，最終使游離脂肪酸減少，熱量來源不足，故實驗大鼠出現(xiàn)虛寒證候。黃帝內(nèi)經(jīng)有云：“體虛則百病始生?！痹诿庖咧笜松?，當長期注射內(nèi)源性氫化可的松琥珀酸鈉與外源性地塞米松磷酸鈉時，抑制了機體免疫反應，影響了免疫球蛋白（IgG，IgM）與補體C3的合成，補體C4有不同程度的增高和減少，造成了中醫(yī)所謂“體虛”之證候。從皮質(zhì)酮（CORT）變化上看，由于長期應用糖皮質(zhì)激素，通過負反饋抑制下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸（HPA），導致腎上腺皮質(zhì)萎縮和功能不全，進一步導致皮質(zhì)酮產(chǎn)生減少。而皮質(zhì)酮為應激反應時產(chǎn)生的類激素，當皮質(zhì)酮含量降低，處于虛熱與虛寒等“虛性”證候時，機體對不利環(huán)境的應對能力則會相對減弱。在性激素的變化上看，下丘腦-垂體-性腺軸（HPGA）是調(diào)控人體生殖系統(tǒng)發(fā)育和功能維持的主要代謝軸，且與中醫(yī)“虛熱、虛寒”密切相關(guān)。從雌二醇（E2）、睪酮（T）以及雌二醇/睪酮（E2/T）的指標變化上看，當機體處于虛熱證候時，E2，E2/T會有所升高，T有所降低。當機體處于虛寒證候時，E2，E2/T會有所升高，T有所降低，但較虛熱證候相比變化幅度較小[13-21]。

在傳統(tǒng)中藥中，黃柏苦、寒，為寒性中藥；肉桂辛、甘、大熱，為熱性中藥。當給予寒涼黃柏干預虛熱動物模型時，實驗結(jié)果顯示，大鼠的脂肪代謝水平（FFA，LPL，HL）、免疫水平（IgG，IgM，C3，C4）以及激素水平（CORT，E2，T）均趨于正常；當給予溫熱肉桂干預虛寒動物模型時，實驗結(jié)果顯示，大鼠的脂肪代謝水平（FFA，LPL，HL）、免疫水平（IgG，IgM，C3，C4）以及激素水平（CORT，E2，T）均趨于正常，可見寒熱藥性對于寒熱證候相關(guān)指標的作用趨勢較為明顯[22]?；诎⑺_伊藥性寒涼的假說[5]，通過干預虛熱、虛寒證候大鼠，以同類比較，異類反證的藥理學實驗方法揭示其中藥藥性。結(jié)果顯示，阿薩伊對于大鼠的脂肪代謝指標（FFA，LPL，HL）、性激素指標（E2，T）的變化與黃柏的作用趨勢相似，與肉桂的作用趨勢相反。但對于皮質(zhì)酮（CORT）含量變化，阿薩伊與黃柏，肉桂都起到了促進的作用，其變化機制是否與抑制糖皮質(zhì)激素，恢復HPA軸負反饋功能有關(guān)，還有待進一步深入研究。同時阿薩伊對于大鼠的免疫指標（IgG，IgM，C3，C4）亦與黃柏、肉桂的作用趨勢均相同，通過檢索文獻分析阿薩伊化學組成成分，作者發(fā)現(xiàn)阿薩伊具有大量的原花青素、花青素以及黃酮等化學成分[23]，這些成分具有很強的抗氧化性，能夠提高機體免疫能力，而在文獻中也有相關(guān)的藥理實驗報導[24]。綜上所述，阿薩伊作用于大鼠后的指標含量變化與黃柏較為相似，而與肉桂作用趨勢略有差異，故阿薩伊的藥性與黃柏相似，性偏寒涼。但對于其功效、各化學成分及有效成分部位還需更深一步的探討研究。

本研究以同類比較、異類反證的藥理實驗研究方法，通過考察黃柏、肉桂以及阿薩伊對虛熱證、虛寒證大鼠脂肪代謝、免疫物質(zhì)以及內(nèi)分泌激素的相關(guān)指標變化，驗證了阿薩伊的中藥寒涼藥性。隨著中醫(yī)藥“一帶一路”政策的實施以及在世界文化大融合的背景下，大量的外來植物藥進入我國市場，為將這些外來植物藥“本土化”，需要不斷地通過現(xiàn)代科學技術(shù)研究其中藥藥性，以便以復方配伍的方式將其應用于臨床，使之更有效的去解除人類之疾苦，更好的提高人們的生活質(zhì)量。同時本文也為阿薩伊在中藥藥性指導下進一步的中醫(yī)功效、有效成分藥理作用等基礎(chǔ)研究奠定了實驗基礎(chǔ)。

[致謝] 本校中醫(yī)學院科研實驗中心李偉老師在藥物制備及實驗操作中給予幫助。

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[責任編輯 張寧寧]