風(fēng)輪菜酚酸類化學(xué)成分研究

王凌天+孫忠浩+鐘明亮+吳海峰+張海晶+朱乃亮，孫桂波+葉曉霞+許旭東+朱寅荻+楊峻山

[摘要] 綜合運(yùn)用硅膠Sephadex LH-20，ODS，MCI gel等柱色譜及制備高效液相色譜等方法，對(duì)風(fēng)輪菜酚類部位進(jìn)行化學(xué)成分分離純化得到28個(gè)化合物。利用NMR和MS解析技術(shù)鑒定為芹菜素（1）、芹菜素-7-O-葡萄糖苷（2）、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷（3）、羊紅膻酯（4）、芹菜素-7-O-蕓香糖苷（5）、木犀草素（6）、木犀草素-4′-O-葡萄糖苷（7）、木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷正丁醇酯（8）、木犀草素-7-O-蕓香糖苷（9）、木犀草素-7-O-新橙皮糖苷（10）、金合歡素（11）、金合歡素-7-O-葡萄糖醛酸苷（12）、蒙花苷（13）、柚皮素（14）、江戶櫻花苷（15）、柚皮素-7-O-蕓香糖苷（16）、異櫻花素（17）、異櫻花苷（18）、香蜂草苷（19）、橙皮苷（20）、山柰酚（21）、槲皮素（22）、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷（23）、對(duì)羥基桂皮酸（24）、咖啡酸（25）、cis-3-[2-[1-（3，4-dihydroxy-phenyl）- 1-hydroxymethyl]-1，3-ben-zodioxol-5-yl]-（E）-2-propenoic acid （26）、mesaconic acid （27）、gentisic acid 5-O-β-D-（6′-salicylyl）-glucopyranoside （28），其中化合物7， 9～10， 12， 23， 26～28首次從風(fēng)輪菜屬植物中分離得到。采用H₂O₂氧化心肌細(xì)胞損傷為模型，對(duì)化合物1～6， 8～17和19進(jìn)行心肌保護(hù)活性篩選，江戶櫻花苷（15）顯示出顯著的心肌保護(hù)作用；與模型組的細(xì)胞存活率（62.12±6.18）%，陽性對(duì)照（槲皮素）在20.0 mg·L^-1下的細(xì)胞存活率為（84.55±8.26）%，江戶櫻花苷在25.0 mg·L^-1下的細(xì)胞存活率為（84.25±7.36）%。

[關(guān)鍵詞] 唇形科；風(fēng)輪菜屬；風(fēng)輪菜；黃酮；心肌保護(hù)

[Abstract] Twenty-eight compounds were isolated and purified from Clinopodium chinense by Sephedax LH-20， ODS， MCI and preparative HPLC. Their structures were identified as apigenin （1）， apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside （2）， apigenin-7-O-β-D-glucuronopyranoside （3）， thellungianol （4）， apigenin-7-O-β-D-rutinoside （5）， luteolin （6）， luteolin-4′-O-β-D-glucopyranoside （7）， apigenin-7-O-β-D-pyranglycuronate butyl ester （8）， luteolin-7-O-β-D-rutinoside （9）， luteolin-7-O-β-D-noehesperidoside （10）， acacetin （11）， acacetin-7-O-β-D-glucuronopyranoside （12）， buddleoside （13）， naringenin （14）， pruning （15）， nairutin （16）， isosakuranetin （17）， isosakuranin （18）， didymin （19）， hesperidin （20）， kaempferol （21）， quercetin （22）， kaempferol-3-O-α-L-rahmnoside （23）， p-hydroxycinnamic acid （24）， caffeic acid （25）， cis-3-[2-[1-（3，4-dihydroxy-phenyl）-1 -hydroxymethyl]-1，3-ben-zodioxol-5-yl]-（E）-2-propenoic acid （26）， mesaconic acid （27）， gentisic acid 5-O-β-D-（6′-salicylyl）-glucopyranoside （28）. Among them， compounds 7， 9-10， 12， 23， 26-28 were isolated from the Clinopodium for the first time. The protective effects of compounds 1-6， 8-17 and 19 against H₂O₂-induced H9c2 cardiomyocyte injury were tested， compounds 15 exhibited significantly protective effects. Compared with the cell viability of （62.12±6.18）% in the model， pruning exhibited viabilities of （84.25±7.36）% at 25.0 mg·L^-1， respectively， using quercetin as a positive control [cell viability of （84.55±8.26）%， 20 mg·L^-1].

[Key words] Lamiaceae；Clinopodium；Clinopodium chinense；favonoid；myocardial protection

風(fēng)輪菜Clinopodium chinense（Benth.） O. Kuntze為唇形科風(fēng)輪菜屬植物。風(fēng)輪菜屬植物約20種，我國(guó)產(chǎn)12種，5變種，2變型，主要分布于浙江、江蘇、安徽、江西、福建等地。首載于《救荒本草》（1406年）草部，在我國(guó)有悠久的民間藥用歷史?，F(xiàn)已被2015年版《中國(guó)藥典》收載為斷血流藥用，具有收斂止血的功效，用于治療崩漏、尿血、鼻衄，牙齦出血，創(chuàng)傷出血[1]。風(fēng)輪菜的止血作用對(duì)治療和預(yù)防心血管疾病方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，有著良好的研究開發(fā)前景。本研究希望通過對(duì)風(fēng)輪菜的化學(xué)成分研究，從中獲得結(jié)構(gòu)多樣的天然產(chǎn)物，篩選心肌保護(hù)活性顯著成分，為進(jìn)一步深入研究風(fēng)輪菜化學(xué)成分及其藥理活性奠定基礎(chǔ)。

1 材料

Bruker Avance Ⅲ 600 型核磁共振儀核磁共振儀（德國(guó)Bruker 公司）；LTQ-Obitrap XL質(zhì)譜儀（美國(guó)ThermoFisher 公司）；LC3000高效液相色譜儀（北京創(chuàng)新通恒科技有限公司）；YMC Pack ODS-A半制備色譜柱（10 mm×250 mm，5 μm，日本YMC公司）；Sephadex LH-20凝膠為Pharmacia公司產(chǎn)品；柱色譜和薄層色譜硅膠GF₂₅₄（青島海洋化工廠）；顯色劑為10%硫酸乙醇溶液；常規(guī)所用試劑均為分析純（北京化工廠）。

風(fēng)輪菜藥材于2013年購(gòu)自安徽，經(jīng)北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所廣西分所袁經(jīng)權(quán)教授鑒定為唇形科風(fēng)輪菜屬植物C. chinense。樣品標(biāo)本現(xiàn)存于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，編號(hào)201303012。

2 提取與分離

風(fēng)輪菜地上部分15 kg粉碎后，以70%乙醇回流提取2次，回收乙醇得浸膏約1.8 kg。以6 000 mL水溶解此浸膏后，依次用6 000 mL石油醚萃取3次，每次2 000 mL，減壓回收溶劑，得石油醚萃取物（FS，100 g）；用18 000 mL乙酸乙酯萃取3次，每次6 000 mL，減壓回收溶劑，得乙酸乙酯萃取物（FY，700 g），乙酸乙酯部分（FY，500 g）經(jīng)硅膠柱色譜以氯仿-甲醇（100∶0～50∶50）進(jìn)行梯度洗脫，分為FY-a～g 7個(gè)部分。FYa經(jīng)過ODS柱，以甲醇-水（30∶70～75∶25）梯度洗脫，得到3個(gè)流分FYa-1～FYa-3。FYa-1～FYa-3經(jīng)過MCI柱以甲醇-水（30∶70～75∶25）梯度洗脫，得到9個(gè)組分（FYa-1.1～ FYa-1.3，F(xiàn)Ya-2.1～ FYa-2.3和FYa-3.1～ FYa-3.3）；FYa-1.1經(jīng)甲醇重結(jié)晶得到化合物27（15 mg），F(xiàn)Ya-1.3經(jīng)甲醇重結(jié)晶得到化合物1（64 mg），F(xiàn)Ya-2.1經(jīng)甲醇重結(jié)晶得到化合物25（10 mg），F(xiàn)Ya-2.2經(jīng)甲醇重結(jié)晶得到化合物24（30 mg）；FYa-2.2經(jīng)過高效制備液相色譜，以甲醇-水（55∶45）等度洗脫，得到化合物6（10 mg），21（5 mg） 和22（7 mg），F(xiàn)Ya-3.2經(jīng)過高效制備液相色譜，以甲醇-水（60∶40）等度洗脫，得到化合物11（6 mg）和14（8 mg），F(xiàn)Ya-3.3經(jīng)過高效制備液相色譜，以甲醇-水（65∶35）等度洗脫，得到化合物17（9 mg）和22（7 mg）。FYb甲醇重結(jié)晶得到化合物4（15g），剩余濾液經(jīng)過ODS柱，以甲醇-水（30∶70～75∶25）梯度洗脫，得到3個(gè)流分FYb-1～ FYb-3。FYb-2分別經(jīng)過Sephadex LH-20（甲醇）、高效制備液相色譜（甲醇-水50∶50）得到化合物28（11 mg）。FYc經(jīng)甲醇重結(jié)晶得到化合物8（3 g），剩余濾液經(jīng)過ODS柱，以甲醇-水（30∶70～75∶25）梯度洗脫，得到3個(gè)流分FYc-1～FYc-3。FYc-1～FYc-3分別經(jīng)過Sephadex LH-20（甲醇）、高效制備液相色譜（甲醇-水45∶55），得到化合物2（10 mg），5（4 mg），18（2 mg）。FYd經(jīng)甲醇重結(jié)晶得到化合物19（20 g），剩余濾液經(jīng)過ODS柱，以甲醇-水（30∶70～75∶25）梯度洗脫，得到3個(gè)流分FYd-1～FYd-3。FYd-1～FYd-3分別經(jīng)過Sephadex LH-20，以甲醇洗脫，得到9個(gè)組分（FYd-1.1～FYd-1.3，F(xiàn)Yd-2.1～FYd-2.3和FYd-3.1～FYd-3.3）；FYd-1.2經(jīng)過高效制備液相色譜，以甲醇-水（35∶65）等度洗脫，得到化合物3（16 mg）和12（13 mg），F(xiàn)Yd-2.2經(jīng)過高效制備液相色譜，以甲醇-水（40∶60）等度洗脫，得到化合物7（3 mg）和15（13 mg），F(xiàn)Yd-3.2經(jīng)過高效制備液相色譜，以甲醇-水（40∶60）等度洗脫，得到化合物23（3 mg）。FYe經(jīng)甲醇重結(jié)晶得到化合物13（6 g），剩余濾液經(jīng)過ODS柱，以甲醇-水（30∶70～75∶25）梯度洗脫，得到3個(gè)流分FYe-1～FYe-3，F(xiàn)Ye-1～FYe-3分別經(jīng)過Sephadex LH-20（甲醇）、高效制備液相色譜（甲醇-水35∶65），得到化合物9（16 mg），10（8 mg），16（9 mg），20（4 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.96（1H，s，5-OH），7.93（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.78（1H，s，H-3），6.48（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.19（1H，d，J=1.8 Hz，H-6）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[2]對(duì)比，確定化合物為芹菜素。

化合物2 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.97（1H，s，5-OH），7.96（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.87（1H，s，H-3），6.83（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.44（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），5.07（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：164.3（C-2），103.1（C-3），182.0（C-4），161.4（C-5），99.5（C-6），162.9（C-7），94.8（C-8），156.9（C-9），105.3（C-10），121.0（C-1′），128.6（C-2′），116.0（C-3′），161.1（C-4′），116.0（C-5′），128.6（C-6′），99.9（C-1″），73.1（C-2″），77.2（C-3″），69.5（C-4″），76.4（C-5″），60.6（C-6″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]對(duì)比，確定化合物為芹菜素-7-O-葡萄糖苷。

化合物3 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.96（1H，s，5-OH），7.92（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.82（1H，br s，H-8），6.82（1H，s，H-3），6.43（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.16（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：164.3（C-2），103.0（C-3），181.9（C-4），161.5（C-5），99.4（C-6），162.7（C-7），94.6（C-8），156.9（C-9），105.3（C-10），120.8（C-1′），128.5（C-2′），116.0（C-3′），161.1（C-4′），116.0（C-5′），128.5（C-6′），99.5（C-1″），72.8（C-2″），74.6（C-3″），71.6（C-4″），76.0（C-5″），171.0（C-6″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]對(duì)比，確定化合物為芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷。

化合物4 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.96（1H，s，5-OH），7.95（2H，d，J=7.2 Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=7.2 Hz，H-3′，5′），6.87（1H，s，H-3），6.85（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.46（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.30（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），4.18（2H，t，J=7.2 Hz，H-1），1.55（2H，m，H-2），1.32（2H，m，H-3），0.83（3H，t，J=7.2 Hz，H-4）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：164.3（C-2），103.1（C-3），182.0（C-4），161.4（C-5），99.2（C-6），162.4（C-7），94.7（C-8），156.9（C-9），105.5（C-10），121.0（C-1′），128.6（C-2′），116.0（C-3′），161.1（C-4′），116.0（C-5′），128.6（C-6′），99.4（C-1″），72.7（C-2″），75.2（C-3″），71.1（C-4″），75.5（C-5″），168.6（C-6″），59.7（OMe），64.3（C-1），30.0（C-2），18.4（C-3），13.4（C-4）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]對(duì)比，確定化合物為芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷丁酯。

化合物5 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.96（1H，s，5-OH），7.94（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.87（1H，s，H-3），6.80（1H，s，H-8），6.38（1H，s，H-6），5.25（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），4.66（1H，s，H-1），1.18（3H，d，J=6.0 Hz，H-6）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：165.5（C-2），104.4（C-3），183.2（C-4），162.6（C-5），101.5（C-6），163.7（C-7），95.7（C-8），159.1（C-9），106.7（C-10），122.1（C-1′），129.6（C-2′），117.1（C-3′），162.1（C-4′），117.1（C-5′），129.6（C-6′），99.1（C-1″），77.4（C-2″），78.2（C-3″），70.9（C-4″），78.5（C-5″），67.1（C-6″），100.6（C-1），71.5（C-2），71.7（C-3），73.1（C-4），69.6（C-5），19.2（C-6）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]對(duì)比，確定化合物為芹菜素-7-O-蕓香糖苷。

化合物6 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：7.41（1H，d，J=8.4，2.4 Hz，H-6′），7.39（1H，d，J=2.4 Hz，H-2′），6.89（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.67（1H，s，H-3），6.44（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.18（1H，d，J=2.4 Hz，H-6）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]對(duì)比，確定化合物為木犀草素。

化合物7 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：7.49（1H，br d，J=8.4 Hz，H-6′），7.48（1H，br s，H-2′），7.23（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.79（1H，s，H-3），6.44（1H，s，H-8），6.15（1H，s，H-6），4.88（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″）。¹³C-NMR（MeOD，150 MHz） δ：162.8（C-2），102.1（C-3），182.3（C-4），160.2（C-5），98.4（C-6），160.8（C-7），93.9（C-8），156.8（C-9），103.3（C-10），121.6（C-1′），114.6（C-2′），145.5（C-3′），147.2（C-4′），116.4（C-5′），117.0（C-6′），100.8（C-1″），72.8（C-2″），76.5（C-3″），70.4（C-4″），75.2（C-5″），60.6（C-6″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]對(duì)比，確定化合物為木犀草素-4′-O-葡萄糖苷。

化合物8 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.99（1H，s，5-OH），7.95（1H，d，J=2.4 Hz，H-2′），7.44（1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6′），7.42（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.81（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.75（1H，s，H-3），6.46（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），5.30（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），4.10（2H，t，J=7.2 Hz，H-1），1.55（2H，m，H-2），1.31（2H，m，H-3），0.82（3H，t，J=7.2 Hz，H-4）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：164.5（C-2），103.1（C-3），181.9（C-4），161.2（C-5），99.4（C-6），162.4（C-7），94.6（C-8），156.9（C-9），105.5（C-10），119.1（C-1′），113.6（C-2′），145.8（C-3′），149.9（C-4′），116.4（C-5′），121.4（C-6′），99.3（C-1″），72.8（C-2″），75.2（C-3″），71.2（C-4″），75.5（C-5″），168.7（C-6″），64.4（C-1），30.0（C-2），18.4（C-3），13.4（C-4）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9] 對(duì)比，確定化合物為木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷正丁醇酯。

化合物9 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.96（1H，s，5-OH），7.40（2H，m，H-2′，6′），6.91（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.72（1H，s，H-3），6.72（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.46（1H，d，J=1.8 Hz，H-6）。5.08（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），4.56（1H，s，H-1），1.09（3H，d，J=6.0 Hz，H-6）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：164.7（C-2），103.2（C-3），182.1（C-4），161.3（C-5），100.8（C-6），162.9（C-7），95.1（C-8），157.2（C-9），105.6（C-10），121.4（C-1′），119.3（C-2′），146.2（C-3′），150.9（C-4′），116.5（C-5′），120.2（C-6′），99.9（C-1″），73.1（C-2″），76.0（C-3″），70.5（C-4″），75.2（C-5″），66.6（C-6″），99.6（C-1），70.5（C-2），70.2（C-3），72.2（C-4），68.3（C-5），18.1（C-6）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]對(duì)比，確定化合物為木犀草素-7-O-蕓香糖苷。

化合物10 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.95（1H，s，5-OH），7.44（2H，m，H-2′，6′），6.91（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.79（1H，s，H-3），6.74（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.39（1H，d，J=1.8 Hz，H-6）。5.22（1H，d，J=7.8 Hz，H-1″），5.16（1H，s，H-1），1.15（3H，d，J=6.6 Hz，H-6）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：164.5（C-2），103.2（C-3），182.0（C-4），162.6（C-5），99.5（C-6），161.5（C-7），94.5（C-8），157.4（C-9），105.8（C-10），121.6（C-1′），114.1（C-2′），145.8（C-3′），149.9（C-4′），116.4（C-5′），119.5（C-6′），98.1（C-1″），77.3（C-2″），76.4（C-3″），70.4（C-4″）、77.2（C-5″），60.6（C-6″），100.7（C-1），70.5（C-2），69.6（C-3），70.2（C-4），68.2（C-5），18.1（C-6）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]對(duì)比，確定化合物為木犀草素-7-O-新橙皮糖苷。

化合物11 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.91（1H，s，5-OH），8.03（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），7.11（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.84（1H，s，H-3），6.51（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.21（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），3.86（3H，s，OMe）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]對(duì)比，確定化合物為金合歡素。

化合物12 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.97（1H，s，5-OH），7.95（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.86（1H，s，H-3），6.86（1H，J=1.8 Hz，H-6），6.47（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.31（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），3.67（3H，s，OMe）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：164.3（C-2），103.1（C-3），182.0（C-4），161.4（C-5），99.1（C-6），162.4（C-7），94.6（C-8），157.0（C-9），105.5（C-10），121.0（C-1′），128.6（C-2′），116.0（C-3′），161.2（C-4′），116.0（C-5′），128.6（C-6′），52.0（OMe），99.3（C-1″），72.7（C-2″），75.2（C-3″），71.3（C-4″），75.4（C-5″），169.2（C-6″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]對(duì)比，確定化合物為金合歡素-7-O-葡萄糖醛酸苷。

化合物13 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.91（1H，s，5-OH），8.06（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′），7.15（1H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′），6.95（1H，s，H-3），6.79（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.45（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.06（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），4.55（1H，br s，H-1），3.86（3H，s，OMe），1.08（3H，d，J=6.0 Hz，H-6）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：156.7（C-2），103.5（C-3），181.7（C-4），162.7（C-5），99.4（C-6），163.7（C-7），94.5（C-8），162.1（C-9），105.2（C-10），122.4（C-1′），128.2（C-2′），114.4（C-3′），160.8（C-4′），114.4（C-5′），128.2（C-6′），55.3（OMe），99.6（C-1″），72.8（C-2″），75.9（C-3″），69.3（C-4″），75.4（C-5″），65.8（C-6″），100.2（C-1），70.0（C-2），70.4（C-3），71.8（C-4），68.0（C-5），17.5（C-6）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]對(duì)比，確定化合物為蒙花苷。

化合物14 白色針狀結(jié)晶，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.15（1H，s，5-OH），7.31（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.79（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），5.88（2H，br s，H-8，H-6），5.43（1H，dd，J=13.2，3.0 Hz，H-2），3.26（1H，dd，J=16.8，13.2 Hz，H-3a），2.68（1H，dd，J=16.8，3.0 Hz，H-3e）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]對(duì)比，確定化合物為柚皮素。

化合物15 淡黃色粉末¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.11（1H，s，5-OH），7.36（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.82（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.15（2H，br s，H-6，8），5.51（1H，dd，J=12.6，2.4 Hz，H-2），4.98（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），3.17（1H，dd，J=16.8，12.6 Hz，H-3b），2.77（1H，dd，J=16.8，2.4 Hz，H-3a）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：77.2（C-2），42.1（C-3），196.9（C-4），165.1（C-5），95.5（C-6），165.5（C-7），96.7（C-8），162.6（C-9），103.2（C-10），128.7（C-1′），128.5（C-2′），115.2（C-3′），158.1（C-4′），115.2（C-5′），128.5（C-6′），103.2（C-1″），73.2（C-2″），77.1（C-3″），69.7（C-4″），78.6（C-5″），60.6（C-6″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]對(duì)比，確定化合物為江戶櫻花苷。

化合物16 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：7.34（2H，d，J=7.8 Hz，H-2′，6′），6.80（2H，d，J=7.8 Hz，H-3′，5′），6.14（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.11（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.40（1H，dd，J=13.2，3.0 Hz，H-2），3.15（1H，dd，J=16.8，12.6 Hz，H-3a），2.75（1H，dd，J=16.2，3.0 Hz，H-3e），4.99（1H，t，J=7.8 Hz，H-1″），4.52（1H，s，H-1），1.08（3H，d，J=6.0 Hz，H-6）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：78.6（C-2），42.2（C-3），197.1（C-4），163.0（C-5），99.4（C-6），165.1（C-7），96.4（C-8），162.6（C-9），103.2（C-10），128.6（C-1′），128.4（C-2′），115.2（C-3′），157.7（C-4′），115.2（C-5′），128.4（C-6′），96.3（C-1″），72.9（C-2″），76.2（C-3″），69.6（C-4″），75.1（C-5″），66.0（C-6″），100.5（C-1），70.2（C-2），70.7（C-3），72.1（C-4），69.9（C-5），18.1（C-6）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]對(duì)比，確定化合物為柚皮素-7-O-蕓香糖苷。

化合物17 白色針晶，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.15（1H，s，5-OH），7.53（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），7.03（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），5.94（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），5.92（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.56（1H，dd，J=13.2，3.0 Hz，H-2），3.32（1H，dd，J=16.8，13.2 Hz，H-3a），2.78（1H，dd，J=16.8，3.0 Hz，H-3e），3.82（3H，s，OMe）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]對(duì)比，確定化合物為異櫻花素。

化合物18 白色粒狀晶體，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.05（1H，s，5-OH），7.34（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.80（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.20（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.16（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），5.52（1H，dd，J=13.2，3.0 Hz，H-2），4.90（1H，d，J=7.8 Hz，H-1），3.36（1H，dd，J=16.8，13.2 Hz，H-3a），2.73（1H，dd，J=16.8，3.0 Hz，H-3e），3.65（3H，s，OMe）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：77.3（C-2），41.0（C-3），196.0（C-4），161.8（C-5），95.4（C-6），164.2（C-7），94.4（C-8），161.7（C-9），102.1（C-10），129.2（C-1′），127.3（C-2′），113.1（C-3′），159.1（C-4′），113.1（C-5′），127.3（C-6′），98.6（C-1″），73.1（C-2″），76.2（C-3″），69.4（C-4″），76.8（C-5″），60.4（C-6″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]對(duì)比，確定化合物為異櫻花苷。

化合物19 白色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.01（1H，s，5-OH），7.46（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′），6.98（2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′），6.14（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.13（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.57（1H，dd，J=12.6，2.4 Hz，H-2），3.10（1H，dd，J=17.4，12.6 Hz，H-3b），2.78（1H，dd，J=17.4，2.4 Hz，H-3a），3.77（3H，s，OMe），4.98（1H，t，J=7.8 Hz，H-1″），4.52（1H，br s，H-1），1.09（3H，m，rha-Me）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：78.3（C-2），41.8（C-3），197.0（C-4），163.0（C-5），96.4（C-6） 165.1（C-7），95.4（C-8），162.5（C-9），103.3（C-10），130.4（C-1′），128.3（C-2′），113.9（C-3′），159.4（C-4′），113.9（C-5′），128.3（C-6′），55.2（OMe），100.6（C-1″），72.9（C-2″），75.5（C-3″），70.7（C-4″），76.2（C-5″），66.0（C-6″），99.3（C-1），69.6（C-2），70.2（C-3），72.0（C-4），68.3（C-5），17.8（C-6）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]對(duì)比，確定化合物為香蜂草苷。

化合物20 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.03（1H，s，5-OH），6.93（3H，m，H-2′，5′，6′），6.14（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.12（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），5.50（1H，dd，J=12.6，3.0 Hz，H-2），4.97（1H，d，J=7.8 Hz，H-1″），4.53（1H，br s，H-1），3.32（1H，dd，J=16.8，12.6 Hz，H-3b），2.78（1H，dd，J=16.8，3.0 Hz，H-3a），3.77（3H，s，OMe）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：78.4（C-2），42.3（C-3），197.0（C-4），163.0（C-5），99.4（C-6），165.4（C-7），95.6（C-8），162.5（C-9），103.3（C-10），131.0（C-1′），114.1（C-2′），148.0（C-3′），146.5（C-4′），112.1（C-5′），117.9（C-6′），55.7（OMe），96.4（C-1″），73.0（C-2″），75.5（C-3″），70.7（C-4″），76.3（C-5″），66.1（C-6″），100.6（C-1），69.6（C-2），70.3（C-3），72.1（C-4），68.3（C-5），17.8（C-6）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]對(duì)比，確定化合物為橙皮苷。

化合物21 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.48（1H，s，5-OH），8.04（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.43（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.18（1H，d，J=1.8 Hz，H-6）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]對(duì)比，確定化合物為山柰酚。

化合物22 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.49（1H，s，5-OH），6.18（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），6.40（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），7.67（1H，d，J=2.4 Hz，H-2′），6.88（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），7.53（1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6′）。該化合物碳?xì)渥V數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]對(duì)比，確定化合物為槲皮素。

化合物23 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：7.76（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′），6.93（2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′），6.38（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.21（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），5.21（1H，d，J=1.8 Hz，H-1″），0.99（3H，d，J=6.0 Hz，H-6″）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：158.1（C-2），134.4（C-3），178.7（C-4），160.8（C-5），99.7（C-6） 161.8（C-7），94.8（C-8），159.4（C-9），109.5（C-10），122.8（C-1′），130.9（C-2′），116.4（C-3′），159.2（C-4′），116.4（C-5′），130.9（C-6′），99.7（C-1″），70.2（C-2″），70.3（C-3″），71.4（C-4″），70.1（C-5″），18.1（C-6″）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]對(duì)比，確定化合物為山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物24 白色針晶，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：7.51（1H，d，J=8.4 Hz，H-2，6），7.49（1H，d，J=16.2 Hz，H-7），6.79（1H，d，J=8.4 Hz，H-3，5），6.28（1H，d，J=16.2 Hz，H-8）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]對(duì)比，確定化合物為對(duì)羥基桂皮酸。

化合物25 白色針晶，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：7.41（1H，d，J=15.6 Hz，H-7），7.02（1H，d，J=1.8 Hz，H-2），6.96（1H，dd，J=8.4，1.8 Hz，H-6），6.75（H，d，J=8.4 Hz，H-5），6.16（1H，d，J=15.6 Hz，H-8）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[26]對(duì)比，確定化合物為咖啡酸。

化合物26 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ： 7.24（1H，s，J=1.2 Hz，H-2），6.85（1H，d，J=8.4 Hz，H-5），7.08（1H，dd，J=8.4，1.2 Hz，H-6），7.47（1H，d，J=16.2 Hz，H-7），6.34（1H，d，J=16.2 Hz，H-8），6.85（1H，br s，H-2′），6.68（2H，br s，H-5′，6′），4.64（1H，J=3.6 Hz，H-7′），6.25（1H，d，J=3.6 Hz，H-8′）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ： 129.9（C-1），105.9（C-2），148.5（C-3），149.7（C-4），107.8（C-5），124.2（C-6），144.0（C-7），116.7（C-8），129.9（C-1′），114.8（C-2′），144.8（C-3′），144.8（C-4′），115.0（C-5′），118.2（C-6′），72.4（C-7），112.9（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[27]對(duì)比，確定化合物為cis-3-[2-[1-（3，4-dihydroxy-phenyl）-1-hydroxylmethyl]-1，3-ben-zodioxol-5-yl]-（E）-2-propenoic acid。

化合物27 白色針晶，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ： 10.87（-OH），10.65（-OH），7.23（1H，s，H-3），1.72（3H，s，H-5）；¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ： 164.8（C-4），151.4（C-1），137.6（C-2），107.6（C-3），11.7（C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[28]對(duì)比，確定化合物為mesaconic acid。

化合物28 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ： 6.75（1H，d，J=9.0 Hz，H-3），7.23（1H，dd，J=9.0，3.0 Hz，H-4），7.41（1H，d，J=3.0 Hz，H-6），10.25（1H，s，H-7），4.85（1H，d，J=7.8 Hz，H-1′），6.98（1H，br d，J=8.4 Hz，H-3′），7.54（1H，ddd，J=8.4，7.8，1.7 Hz，H-4″），6.94（1H，td，J=7.8，1.8 Hz，H-5″），7.76（1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6″）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ： 112.7（C-1），156.3（C-2），117.4（C-3），117.6（C-4），149.2（C-5），125.1（C-6），171.3（C-7），101.2（C-1′），73.4（C-2′），76.1（C-3′），70.1（C-4′），73.1（C-5′），64.6（C-6′），112.9（C-1″），160.2（C-2″），119.3（C-3″），135.8（C-4″），117.2（C-5″），129.9（C-6″），168.6（C-7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[29]對(duì)比，確定化合物為gentisic acid 5-O-β-D-（6′-salicylyl）-glucopyranoside。

4 體外抗心肌保護(hù)活性的測(cè)定

采用H₂O₂氧化心肌細(xì)胞損傷為模型，對(duì)化合物1～6，8～17，19進(jìn)行活性篩選，以槲皮素[31]為陽性對(duì)照見表1。將實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組：實(shí)驗(yàn)過程中使用無血清培養(yǎng)液處理；H₂O₂模型組：無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)2 h后，加入終濃度為200 μmol·L^-1H₂O2 作用2 h；主要活性成分預(yù)處理組（4 h）：分別將含有相應(yīng)濃度的各種活性成分的無血清培養(yǎng)液作用4 h后，棄去含藥培養(yǎng)液。加入終濃度為200 μmol·L^-1H₂O₂作用 2 h；陽性對(duì)照組（4 h）：將含有20 mg·L^-1槲皮素[30]的無血清培養(yǎng)液作用4 h后，棄去含藥培養(yǎng)液，后面操作與主要活性成分預(yù)處理組一致。

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的H9c2心肌細(xì)胞以5×10⁴個(gè)/孔的密度接種于96孔板中，在5% CO₂，37 ℃ 條件培養(yǎng)36 h后，進(jìn)行處理。處理結(jié)束后，每孔加入5 g·L MTT 溶液20 μL，37 ℃孵育4 h后小心移除培養(yǎng)液，每孔中加入100 μL DMSO，微孔板震蕩器震蕩10 min使甲臜結(jié)晶充分溶解后，在微孔板掃描酶標(biāo)儀測(cè)570 nm處吸光度（A）。將各測(cè)試孔的A減去本底A（無血清培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞），根據(jù)各孔A計(jì)算±s。細(xì)胞存活率=（A加藥細(xì)胞-A本底）/（A對(duì)照細(xì)胞-A本底）×100%。

5 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)從風(fēng)輪菜種分離得到28個(gè)化合物，其中化合物7，9～10，12，23，26～28首次從風(fēng)輪菜屬植物中分離得到，豐富了風(fēng)輪菜的化學(xué)成分。風(fēng)輪菜中分離得到的單體成分木犀草素（6） 木犀草素-7-O-新橙皮糖苷（10）、金合歡素-7-O-葡萄糖醛酸苷（12）、柚皮素（14）、江戶櫻花苷（15）、柚皮素-7-O-蕓香糖苷（16）均可不同程度降低H₂O₂氧化引起的細(xì)胞損傷，其中江戶櫻花苷顯示出較強(qiáng)保護(hù)作用，與模型組的細(xì)胞存活率（62.12±6.18）%，陽性對(duì)照（槲皮素）在20.0 mg·L^-1下的細(xì)胞存活率為（84.55±8.26）%，江戶櫻花苷在25.0 mg·L^-1下的細(xì)胞存活率為（84.25±7.36）%。二氫黃酮類抗H₂O₂氧化誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞損傷活性較顯著，且呈一定的劑量依賴性。

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