高效液相色譜法測定感冒疏風片中升麻素苷及5-O-基維斯阿米醇苷含量

姜雪敏，楊立志

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江雞西158100）

·檢驗檢測·

高效液相色譜法測定感冒疏風片中升麻素苷及5-O-基維斯阿米醇苷含量

姜雪敏，楊立志

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江雞西158100）

目的建立測定感冒疏風片中升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱采用Agilent Extend－C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流動相為甲醇－水(37∶63)，流速1.0 m L／min，檢測波長254 nm。結果升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷進樣量線性范圍分別為0.064 6～1.292 0 g和0.061 4～1.227 4 g，r均為1.000 0；平均回收率分別為97.56%和97.57%，RSD分別為0.40%和0.48%（n＝6)。結論該方法操作簡便、重復性好、結果準確，可作為感冒疏風片質量的控制方法。

感冒疏風片；升麻素苷；5－O－甲基維斯阿米醇苷；高效液相色譜法

感冒疏風片由麻黃絨、苦杏仁、桂枝、白芍、紫蘇葉、防風、桔梗、獨活、甘草、大棗、生姜、谷芽組方[1]，具有辛溫解表、宣肺和中功效，用于風寒感冒、發(fā)熱咳嗽、頭痛怕冷、鼻流清涕、骨節(jié)酸痛、四肢疲倦。目前，其質量標準中未對方中無定性或定量測定項，無法有效控制產品的質量和療效。本研究中參考文獻[2－13]，建立了測定感冒疏風片中升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷含量的高效液相色譜（HPLC）法，并進行了方法學驗證。現報道如下。

1 儀器與試藥

LC－2010A型高效液相色譜儀（日本島津公司）；AG285型電子分析天平(瑞士梅特勒托利多公司)；KQ－400KDE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。升麻素苷對照品(批號為111522－201008，純度為93.9%），5－O－甲基維斯阿米醇苷對照品（批號為111523－101007，純度為96.5%），均購于中國食品藥品檢定研究院；感冒疏風片（昆明中藥廠有限公司，批號為540557；云南騰藥制藥股份有限公司，批號為150602，150801）；水為屈臣氏蒸餾水，乙腈（色譜純，Merck公司）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Extend－C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇－水（37∶63）；流速：1.0m L／min；柱溫：30℃；進樣量：5μL；檢測波長：254 nm。理論板數按升麻素苷峰計算均不低于4 000。

2.2 溶液制備

稱取升麻素苷對照品12.92mg，精密稱定，5－O－甲基維斯阿米醇苷對照品12.28mg，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋，制成質量濃度分別為1.292 g／L和1.228 g／L的對照品貯備液。再分別量取對照品貯備液各1m L，置20mL容量瓶里，制成每1mL含升麻素苷64.6μg和5－O－甲基維斯阿米醇苷61.374μg的混合對照品溶液。

取樣品適量，研細，稱取1.337 3 g（平均片重為0.444 1 g），精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇10m L，密塞，稱定質量，超聲處理30 min（功率400 W，頻率40 Hz），放冷至室溫，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

按照感冒疏風片處方工藝制成不含防風的空白樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗：精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液，依法測定，記錄色譜圖，見圖1。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液相應位置上有相同保留時間的色譜峰，陰性對照品溶液對測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：分別精密吸取升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷對照品混合溶液1，2，5，10，15，20μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以對照品進樣量為橫坐標（X，μg）、峰面積積分值為縱坐標（Y）進行回歸分析?；貧w方程為升麻素苷Y＝2.1000×106X－2.728 7×103，r＝1.000 0(n＝6)；5－O－甲基維斯阿米醇苷Y＝2.300 0×106X－3.034×103，r＝1.000 0(n＝6)。結果表明，升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷進樣量分別在0.064 6～1.292 0μg和0.061 4～1.227 4μg范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取混合對照品溶液5μL，連續(xù)進樣6次。結果升麻素苷和5－O－甲基維斯阿米醇苷的平均峰面積值分別為692 518和707 398，RSD分別為0.92%和0.87%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一供試品溶液，在室溫下放置0，2，4，8，12，24 h后，分別進樣5μL，記錄峰面積。結果升麻素苷和5－O－甲基維斯阿米醇苷峰面積的平均值分別為694 537和710 119，RSD分別為0.96%和0.76%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定性良好。

重復性試驗：稱取同一批（批號為540557）樣品6份，按供試品溶液制備方法制備，測定含量和每片樣品升麻素苷和5－O－甲基維斯阿米醇苷平均含量為0.150 mg和0.145 mg，RSD分別為0.79%和0.96%（n＝6）。表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：稱取已知含量的同批（批號為540557，每片含升麻素苷0.150mg，5－O－甲基維斯阿米醇苷0.145mg）樣品約0.65 g共6份，精密稱定，分別置錐形瓶中，分別精密加入升麻素苷對照品溶液(220.0μg／mL)和5－O－甲基維斯阿米醇苷對照品溶液(210.0μg／mL)各0.8，1.0，1.2m L，甲醇稀釋按供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂色譜條件測定，計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n＝6)

2.4 樣品含量測定

取市售感冒疏風片3批，按供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂色譜條件測定樣品中升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（mg，n＝6）

3 討論

經檢測，升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷最大紫外吸收波長均在（254±2）nm處，比較發(fā)現，254 nm時兩種被測成分均有較大的吸收。

參照2015年版《中國藥典（一部）》對流動相比例進行調整，發(fā)現甲醇－水（37∶63）時分離度更好。

方中防風為主藥，升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷是其主要成分，含量高，易于測定，故采用測定處方中防風的成分含量以控制該制劑的質量。

分別考察以50%甲醇、甲醇、乙酸乙酯作為溶劑，結果表明，甲醇提取效果較好，故以甲醇為提取溶劑。

用甲醇分別提取20，30，60 min，結果表明，20 min提取含量低于提取30 min和60 min，且提取30 min和60min含量基本相同，故確定提取時間為30min。

[1]WS3－B－2251－96，衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑(第十一冊)[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015:149－150.

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Content Determ inating of Prim－O－G lucasylcim ifogin and 5－O－M ethylvisamm iosode in Ganm aoshufeng Tab lets by HPLC

Jiang Xuemin,Yang Lizhi

(Jixi Inspection and Testing Center for Food and Drug,Jixi,Heilongjiang,China 158100)

Objective To establish an HPLC method for content determination of prim－O－glucasylcimifoginand 5－O－methylvisammiosodein in Ganmaoshufeng Tablets.M ethods The separation was performed on a Agilent Extend－C18column(250 mm×4.6 mm,5μm) with methanol－water solution(37∶63),the flow rate was 1.0 mL／min,the detection wave length was 254 nm.Resu lts The linear ranges of prim－O－glucasylcimifogin and 5－O－methylvisammiosode were 0.064 6－1.292 0μg(r＝1.000 0)and 0.061 4－1.227 4μg (r＝1.000 0),respectively,the average recoveries were 97.56%and 97.57%,respectively,the RSDs were 0.40%and 0.48%,respectively(n＝6).Conclusion The method is simple,reproducidle and accurate,which can be used for the quality contorl of Ganmaoshufeng Tablets.

Ganmaoshufeng Tablets;prim－O－glucasylcimifogin;5－O－methylvisammiosode;HPLC

R284.1

A

1006－4931(2017)11－0022－03

2017－03－15)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.11.007

姜雪敏（1979－），女，大學本科，副主任藥師，主要從事食品藥品檢驗檢測工作，（電子信箱）jiangxuemin88＠163.com。