狗舌草的化學(xué)成分研究

唐雨，劉艷霞，張宏偉

（中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)與天然藥物化學(xué)教研室，重慶400038）

狗舌草的化學(xué)成分研究

唐雨，劉艷霞，張宏偉

（中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)與天然藥物化學(xué)教研室，重慶400038）

目的探討狗舌草的化學(xué)成分。方法采用硅膠，RP－C18，Sephadex LH－20和高效液相色譜法等色譜方法對狗舌草進行分離、純化，根據(jù)化合物的理化性質(zhì)和波譜學(xué)方法對狗舌草化學(xué)成分進行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果從狗舌草中分離得到6個化合物，分別鑒定為白楊素(chrysin，1)，芹菜素(apigenin，2)，山柰酚(kaempferol，3)，金合歡素(acacetin，4)，異鼠李素－3－O－ －D－吡喃葡萄糖苷(isorhamnetin－3－O－ －D－glucopyranoside，5)，咖啡酸乙酯(caffeic acid ethyl ester，6)。結(jié)論6個化合物均為首次從狗舌草屬中分離得到。

狗舌草；化學(xué)成分；成分分離；結(jié)構(gòu)鑒定

狗舌草Tephroseriskirilowii(Turcz.)Holub.為菊科狗舌草屬植物，具有清熱、解毒、活血消腫等功效[1]，臨床用于治療發(fā)熱、貧血、出血、肝脾和淋巴結(jié)腫大[2]。國內(nèi)外關(guān)于狗舌草化學(xué)成分的報道主要集中于生物堿，尤其是吡咯里西啶類生物堿（PAs）[3－4]。目前，對狗舌草黃酮類成分的研究僅局限于其所含黃酮的類型、總黃酮的提取工藝以及藥理作用等[5－8]。筆者對狗舌草的黃酮類化合物進行了系統(tǒng)的研究，從乙酸乙酯部位中分離得到了5個黃酮類化合物，另外還分離到1個酯類化合物，依據(jù)理化性質(zhì)與譜學(xué)數(shù)據(jù)，分別鑒定為白楊素(chrysin，1)，芹菜素(apigenin，2)，山柰酚(kaempferol，3)，金合歡素(acacetin，4)，異鼠李素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷(isorhamnetin－3－O－β－D－glucopyranoside，5)，咖啡酸乙酯(caffeic acid ethyl ester，6)，所有化合物均為首次從狗舌草屬中分離得到?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1100型半制備高效液相色譜儀；SQ Detecter電噴霧電離質(zhì)譜（美國Waters公司）；AgilentAV－600MHz核磁共振光譜儀(Agilent公司)；ZX98－1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海魯伊工貿(mào)有限公司）；ZF－7 TLC紫外檢測儀（上海嘉鵬科技有限公司）；CPA225D電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；酶標儀（Bio－Rad）。

1.2 試藥

甲醇（色譜純，上海），石油醚，乙酸乙酯，二氯甲烷，甲醇等(分析純，成都科龍化工有限公司），氘代試劑；薄層色譜硅膠板（青島海洋化工廠，德國默克公司），薄層色譜硅膠H，GF254和柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；十八烷基硅膠鍵合相柱色譜材料（RP－C18，北京京京科技公司，50μm，70μm）；羥丙基葡聚糖凝膠（Sephadex LH－20，瑞士Pharmacia公司）。狗舌草藥材購于河南藥材市場，由重慶醫(yī)科大學(xué)中藥學(xué)院何先元副教授鑒定為狗舌草屬植物狗舌草Tephroseriskirilowii(Turcz.)Holub.的干燥地上部分。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取分離

取干燥、粉碎的狗舌草藥材10 kg，用體積分數(shù)為95%的乙醇回流提取3次，每次3 h。合并提取液并在60℃減壓濃縮，得粗提物浸膏1 545.6 g。

粗提物浸膏混懸于適量水中，依次用石油醚（30～60℃）、氯仿、乙酸乙酯及正丁醇各萃取3次。合并萃取液并分別回收溶劑后，得到石油醚萃取部分346.8 g，氯仿萃取部位105.2 g，乙酸乙酯萃取部位152.5 g，正丁醇萃取部位404.2 g。

取乙酸乙酯部位（60 g）經(jīng)大孔樹脂柱色譜，以不同體積分數(shù)的乙醇進行梯度洗脫，所得組分根據(jù)薄層色譜檢測得Fr.1～Fr.6共6個組分。其中Fr.3經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜（石油醚－乙酸乙醋）分離及半制備HPLC(甲醇－水)純化得到化合物3（15 mg）、化合物5（21 mg）。Fr.4經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜（石油醚－乙酸乙醋）分離及半制備HPLC(甲醇－水)純化得到化合物1（30mg）、化合物2（12 mg）、化合物4（22mg）、化合物6（25 mg）。化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

2.2.1 化合物1

黃色針晶（甲醇）。鹽酸－鎂粉反應(yīng)陽性。

圖1 化合物1－6化學(xué)結(jié)構(gòu)

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.93(1H，s，H－3)，6.18(1H，d，J＝1.8 Hz，H－6)，6.49(1H，d，J＝1.8 Hz，H－8)，8.01(2H，d，J＝7.3 Hz，H－2′，6′)，7.54(2H，m，H－3′，5′)，7.56(1H，m，H－4′)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ163.5(C－2)，105.6(C－3)，182.2(C－4)，161.9(C－5)，99.6(C－6)，165.3(C－7)，94.6(C－8)，157.9(C－9)，104.3 (C－10)，131.2(C－1′)，126.8(C－2′)，129.6(C－3′)，132.4(C－4′)，129.6(C－5′)，126.8(C－6′)。

以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道的白楊素譜學(xué)數(shù)據(jù)對照基本一致，鑒定化合物1為白楊素(chrysin)。

2.2.2 化合物2

黃色粉末（甲醇）。鹽酸－鎂粉反應(yīng)陽性。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.74(1H，s，H－3)，6.15(1H，d，J＝1.6 Hz，H－6)，6.44(1H，d，J＝1.6 Hz，H－8)，7.89(2H，d，J＝8.5 Hz，H－2′，6′)，6.90(2H，d，J＝8.5 Hz，H－3′，5′)，12.45(1H，s，5－OH)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ164.1(C－2)，103.2(C－3)，182.1(C－4)，161.9(C－5)，99.4(C－6)，164.5(C－7)，94.4(C－8)，157.8(C－9)，104.0 (C－10)，121.6(C－1′)，128.9(C－2′)，116.4(C－3′)，161.7(C－4′)，116.4(C－5′)，128.9(C－6′)。

以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道的芹菜素譜學(xué)數(shù)據(jù)對照基本一致，鑒定化合物2為芹菜素(apigenin)。

2.2.3 化合物3

黃色粉末（甲醇）。鹽酸－鎂粉反應(yīng)陽性。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.16(1H，d，J＝1.7 Hz，H－6)，6.40(1H，d，J＝1.7 Hz，H－8)，8.01 (2H，d，J＝8.8 Hz，H－2′，6′)，6.89(2H，d，J＝8.8 Hz，H－3′，5′)，12.45(1H，s，5－OH)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ147.2(C－2)，136.1(C－3)，176.3(C－4)，161.1(C－5)，98.6(C－6)，164.3(C－7)，93.9(C－8)，156.6(C－9)，103.5(C－10)，122.1(C－1′)，129.9(C－2′)，115.9(C－3′)，159.6(C－4′)，115.9(C－5′)，129.9(C－6′)。

以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道的山柰酚譜學(xué)數(shù)據(jù)對照基本一致，鑒定化合物3為山柰酚(kaempferol)。

2.2.4 化合物4

黃色粉末（甲醇）。鹽酸－鎂粉反應(yīng)陽性。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.84(1H，s，H－3)，6.17(1H，d，J＝1.5 Hz，H－6)，6.48(1H，d，J＝1.5 Hz，H－8)，8.01(2H，d，J＝8.7 Hz，H－2′，6′)，7.08(2H，d，J＝8.7 Hz，H－3′，5′)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ163.7(C－2)，104.0(C－3)，182.2(C－4)，161.9(C－5)，99.4(C－6)，164.9(C－7)，94.5(C－8)，157.8(C－9)，104.1 (C－10)，123.3(C－1′)，128.8(C－2′)，115.0(C－3′)，162.7(C－4′)，115.0(C－5′)，128.8(C－6′)，56.0 (4′－OMe)。

以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道的金合歡素譜學(xué)數(shù)據(jù)對照基本一致，鑒定化合物4為金合歡素(acacetin)。

2.2.5 化合物5

黃色粉末（甲醇）。鹽酸－鎂粉反應(yīng)及Molish反應(yīng)均為陽性。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.16(1H，s，H－6)，6.44(1H，s，H－8)，7.72(1H，s，H－2′)，6.90 (1H，d，J＝7.6 Hz，H－5′)，7.65(1H，d，J＝7.6 Hz，H－6′)，12.43(1H，s，5－OH)，5.54(1H，d，J＝7.2 Hz，H－1′′)，3.81(3H，s，3′－OMe)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ156.9(C－2)，133.3(C－3)，177.8(C－4)，161.6(C－5)，99.2(C－6)，164.7(C－7)，94.1(C－8)，156.7(C－9)，103.3 (C－10)，122.4(C－1′)，113.9(C－2′)，147.3(C－3′)，149.8(C－4′)，115.6(C－5′)，121.5(C－6′)，101.0(C－1′′)，74.7(C－2′′)，76.8(C－3′′)，70.2(C－4′′)，77.9 (C－5′′)，61.0(C－6′′)，56.1(3′－OMe)。

以上數(shù)據(jù)與文獻[12]報道的異鼠李素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷譜學(xué)數(shù)據(jù)對照基本一致，鑒定化合物5為異鼠李素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷(isorhamnetin－3－O－β－D－glucopyranoside)。

2.2.6 化合物6

白色針晶（甲醇）。三氯化鐵顯藍色。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ7.01(1H，d，J＝1.6 Hz，H－2)，6.73(1H，d，J＝8.2 Hz，H－5)，6.97 (1H，dd，J＝8.2，1.6Hz，H－6)，7.44(1H，d，J＝15.9Hz，H－7)，6.22(1H，d，J＝15.9 Hz，H－8)，4.12(2H，q， J＝7.1 Hz，CH2)，1.20(3H，t，J＝7.1 Hz，CH3)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ125.9(C－1)，114.5(C－2)，146.0(C－3)，148.8(C－4)，116.5(C－5)，121.8(C－6)，145.4(C－7)，116.1(C－8)，167.0 (C－9)，60.1(CH2)，14.7(CH3)。

以上數(shù)據(jù)與文獻[13]報道的咖啡酸乙酯譜學(xué)數(shù)據(jù)對照基本一致，鑒定化合物6為咖啡酸乙酯(caffeic acid ethylester)。

3 討論

有關(guān)狗舌草化學(xué)成分的研究已有不少報道，但多集中在生物堿類化學(xué)成分，且多為PAs生物堿，對黃酮類化合物的研究卻很少。本研究中就狗舌草黃酮類化合物的提取、分離及鑒定進行了系統(tǒng)研究，初步得到了6個化合物，均為首次從狗舌草屬植物中發(fā)現(xiàn)。本研究結(jié)果可為進一步闡明狗舌草化學(xué)成分與藥理活性的相關(guān)性研究提供參考。

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Study on Chem ical Constituents of Tephroseris Kirilowii

Tang Yu,Liu Yanxia,Zhang Hongwei

(Teaching and Research Section of Pharmacognosy and Natural Pharmaceutical Chemistry in College of Pharmacy,3rd Military Medical University, Chongqing,China 400038)

Ob jective To study the chemical constituents of Tephroseris Kirilowii.M ethods The silica gel,RP－C18,Sephadex LH－20 and HPLC methods were adopted to isolate and purify the Tephroseris Kirilowii,and thechemical constituents were elucidated by the physicochemical properties and spectral analysis.Results 6 kinds of compounds were obtained and identified aschrysin(1),apigenin(2), kaempferol(3),acacetin(4),isorhamnetin－3－O－β－D－glucopyranoside(5),caffeic acid ethyl ester(6).Conclusion The 6 kinds of compounds are isolated from Tephroseris Kirilowii for the first time.

Tephroseris Kirilowii;chemical constituents;constituent isolation;structural identification

R284.2；R282.6

A

1006－4931(2017)11－0016－03

2017－04－10)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.11.005

國家青年自然科學(xué)基金項目[81202869]。

唐雨（1986－），女，碩士研究生，助教，主要從事天然藥物化學(xué)及其藥理作用研究，（電子信箱）tangyuflower＠163.com。

張宏偉（1977－），男，碩士研究生，副教授，主要從事天然藥物化學(xué)及其藥理作用研究，（電子信箱）zhwqz＠hotmail.com。