ER、PR、Ki-67表達與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的相關性研究

寧 靜，羅 娜，鄭冬梅

（解放軍總醫(yī)院海南分院婦產(chǎn)科，三亞 572013）

ER、PR、Ki-67表達與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的相關性研究

寧 靜，羅 娜，鄭冬梅

（解放軍總醫(yī)院海南分院婦產(chǎn)科，三亞 572013）

目的：探究雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、Ki-67表達與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的關系。方法：隨機選取2013年1月～2015年10月期間到院就診并確診為子宮內(nèi)膜癌的50例患者為觀察組（Group A）。同期隨機選擇我院接收的100例患者樣本，其中50例為子宮內(nèi)膜非典型增生病變（Group B）以及50例患者病檢結果為正常增生期子宮內(nèi)膜者（Group C）作為對照。分別采用免疫組化MaxVisionTM2/HRP染色法對三組研究對象組織中ER、PR、Ki-67進行檢測，對其表達水平及其臨床意義進行分析，最后統(tǒng)計分析所有結果。結果：癌變組中ER、PR表達明顯低于非典型增生組和正常增生期內(nèi)膜組（對照組），且非典型增生組顯著低于正常增生期內(nèi)膜組。Ki-67在癌變組中表達最為明顯，在正常增生期子宮內(nèi)膜組表達量最少，兩組比較具有統(tǒng)計學意義。結論：ER、PR、Ki-67表達情況與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展具有密切的關聯(lián)性，能夠明顯反應子宮內(nèi)膜癌的病變程度及預后，可將其作為子宮內(nèi)膜癌臨床靶向治療的重點研究方向。

ER；PR；Ki-67；子宮內(nèi)膜癌

子宮內(nèi)膜癌又稱宮體癌，是臨床診療中較為常見的一種女性生殖道惡性腫瘤，而絕經(jīng)后的婦女則是這一疾病的主要發(fā)病群體，目前，臨床上對子宮內(nèi)膜癌的治療方式主要為手術治療，為了更有效地選擇適合的治療方案，需要對子宮內(nèi)膜癌的肌層浸潤深度及淋巴結轉移情況進行精確判斷，早期發(fā)現(xiàn)及早期治療是達到子宮內(nèi)膜癌良好治療效果的關鍵，這就對該病的診斷方面提出了更高的要求［1］。臨床研究表明，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、Ki-67表達水平具有密切關聯(lián)［2］?；诖?，本研究采用免疫組化方法對子宮內(nèi)膜癌及其病變組織進行了ER、PR、Ki-67聯(lián)合檢測，進一步探究了子宮內(nèi)膜癌組織病變與ER、PR、Ki-67表達的關系?，F(xiàn)報告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料所選子宮內(nèi)膜癌患者均為2013年10月～2015年10月期間到我院就診并經(jīng)細胞學或病理診斷確診的患者，選取標準［4］：①所有患者均經(jīng)常規(guī)HE染色病理確診為子宮內(nèi)膜癌；②均具有完整的臨床記錄及病理資料；③所有患者均知情同意；將術前接受放化療等抗癌治療、有淋巴瘤、間質(zhì)瘤等其他惡性腫瘤、平滑肌瘤、不典型增生等良性腫瘤等的患者排除在外。50例子宮內(nèi)膜癌患者均為女性，年齡在26～85歲之間，平均年齡為（62.45±11.35）歲。在年齡分布方面，23例患者<60歲，27例患者≥60歲；在腫瘤徑方面，40例患者≤5cm，10例患者>5cm；在子宮內(nèi)膜癌病理分型方面，12例患者為高分化腺癌，14例患者為中分化腺癌，20例患者為低分化腺癌，4例患者為粘液腺癌及印戒細胞癌；在腫瘤浸潤深度方面，7例患者為肌層內(nèi)，43例患者為肌層-漿膜外；在局部淋巴結轉移方面，37例患者有，17例患者無；在子宮內(nèi)膜癌臨床TNM分期方面，15例患者為Ⅰ期，30例患者為Ⅱ期+Ⅲ期，5例患者為Ⅳ期。所有標本均經(jīng)固定及石蠟包埋，固定過程中均采用40g/L中性甲醛。

1.2 方法病理標本經(jīng)石蠟包埋處理，并連續(xù)切片，切片厚度在4um左右，切片采用ER、PR、Ki-67免疫組化染色觀察，免疫組織化學染色：1）切片脫蠟及水化。脫蠟前在室溫下對組織切片進行1h的放置。在二甲苯中對組織切片進行10min的浸泡，將二甲苯更換掉后再進行10min的浸泡。在95%乙醇中進行2次浸泡，每次5min。在80%乙醇中進行3min的浸泡。用pH為7.4的PBS進行3次沖洗，每次3min；2）修復抗原。應用高壓進行2min熱修復，pH值為6.0；3）將50μL3%的過氧化氫加入到每張切片上，室溫下進行10min的孵育，以將內(nèi)源性過氧化物酶的活性阻斷。用PBS進行3次沖洗，每次3min，將PBS液除去；4）將50μL的第一抗體加入到每張切片上，在4℃的溫度下過夜；5）用PBS進行3次沖洗，每次3-5min，將PBS液除去，將50μL即用型MaxVisionTM2/HRP 試劑加入到每張切片上，室溫下進行30min的孵育，用PBS進行3次沖洗，每次3min；6）將PBS液除去，將100μl配置后的DAB顯色液滴加到每張切片中，進行3-5min的作用，顯微鏡下觀察；7）沖洗將顯色終止，沖洗過程中用自來水；8）蘇木精、PBS分別復染、沖洗返藍；9）脫水干燥，在此過程中用梯度酒精，然后透明，在此過程中用二甲苯，最后封固、鏡檢，在此過程中用中性樹膠；10）將陰性對照設定為PBS液，用其替代一抗。將陽性對照設定為已知的陽性切片。

2 結果

2.1 ER、PR、K i-67在不同病理組織中的表達癌變組患者病理組織中ER、PR表達較非典型增生組低（P<0.05），非典型增生組較正常增生期子宮內(nèi)膜組低（P<0.05）；Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組中的表達最多，在非典型增生組中次之，在正常增生期宮內(nèi)膜組中表達最少，各組之間比較具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1：

表1 不同組織中ER、PR、Ki-67的表達情況

2.2 子宮內(nèi)膜癌ER、PR、K i-67表達與臨床病理特征的關系ER陽性表達率、ER陽性表達率在子宮內(nèi)膜癌病理分型、腫瘤浸潤深度方面具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；ER陽性表達率、ER陽性表達率在TNM分期和淋巴結轉移方面無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。Ki-67陽性在子宮內(nèi)膜癌病理分型、TNM分期方面具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2：

表2 不同病理組織中ER、PR、Ki-67表達

3 討論

子宮內(nèi)膜癌作為一種具有極高惡性度的婦科癌癥類型，超過2/3患者在臨床診斷確診時已經(jīng)到了腫瘤晚期［3］。世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，在我國，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率及死亡率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢［4］。在現(xiàn)階段的醫(yī)療水平下，手術切除仍然是臨床在治療子宮內(nèi)膜癌過程中主要采用的方法，子宮內(nèi)膜癌根治術早期治療能夠達到至少95%的術后生存率，治療進展期子宮內(nèi)膜癌則只能達到30%左右的術后生存率，如果臨床將其和輔助治療有機結合起來，如中藥治療及放化療等，雖然能夠降低子宮內(nèi)膜癌根治術后局部復發(fā)及轉移發(fā)生率，但是卻無法促進患者生存率的顯著提升。因此，子宮內(nèi)膜癌對人類的健康造成了嚴重威脅，現(xiàn)階段臨床研究的一個熱點仍然是由分子生物學領域對子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展機制進行研究，將早期診斷及有效治療子宮內(nèi)膜癌的分子標志物尋找出來［5］。

Ki-67是細胞增殖的生物學標記，屬于癌細胞增殖活性的標志物，其抗原直接而深刻地影響著細胞分裂周期，其開始表達于細胞分裂周期的G1后期，達到高峰的時間為M期，停止表達的時間為完成有絲分裂后［6-7］。Ki-67表達的高低直接而深刻地影響著腫瘤的生物學行為及侵襲力和預后。相關臨床研究表明，ER和PR在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用，這主要是由于雌激素在一定程度上起著穩(wěn)定子宮內(nèi)膜細胞有絲分裂的作用，子宮內(nèi)膜癌機制與雌激素紊亂具有密切關聯(lián)，進而導致DNA發(fā)生突變。此外，孕激素能夠抑制細胞有絲分裂，促進增生期子宮內(nèi)膜向分泌期轉變，從而起到拮抗內(nèi)膜發(fā)生癌變的作用。當ER和PR與各自相應的激素相結合后，激素受體將被激活，合成新的蛋白質(zhì)［8］。多項研究認為［9-10］，ER和PR與腫瘤組織類型、病理分期、分級具有一定相關性，本組研究結果顯示，ER和PR在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達分別為48.00%、50.00%。與正常正常增生期子宮內(nèi)膜組和非典型增生組比較較低，Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組病理組織中的表達達到了80.00%，并且ER和PR表達與子宮內(nèi)膜癌病理組織的病理分型及腫瘤浸潤深度具有明顯差異，不同病理程度組織的ER、PR、Ki-67表達情況具有明顯差異，提示ER、PR、Ki-67表達可以作為子宮內(nèi)膜癌臨床治療與預后評估的評價指標。

綜上所述，子宮內(nèi)膜癌患者血清ER、PR、Ki-67指標的表達情況有助于實現(xiàn)臨床上的早期診斷，可見其作為今后的重點研究方向，為子宮內(nèi)膜癌的診斷與治療研究提供相關參考依據(jù)。

［1］ 曹樺, 吳寧, 陳樑, 等. ER、PR、Ki－67在子宮內(nèi)膜癌中的表達及其臨床意義［J］. 實用癌癥雜志, 2015, 11(7): 964-966.

［2］ 蔡鳳梅, 王卉芳, 劉輝, 等. ER 、PR 、Ki-67、CA125在子宮內(nèi)膜癌中的表達及臨床意義［J］. 陜西醫(yī)學雜志, 2015, 9(2): 159-161.

［3］ G Apostolou, N Apostolou, C Nikolaidou, et al. Cytodiagnosis of endometrial carcinoma and hyperplasia on imprint smears with additional immunocytochemistry using Ki-67 and p53 biomarkers ［J］. Cytopathology, 2014, 25(2): 86-94.

［4］ 田俠, 劉愛軍, 曹晨, 等. 分子標志物在子宮內(nèi)膜癌中的表達分析［J］. 現(xiàn)代生物醫(yī)學進展, 2015, 15(10): 1891-1894.

［5］ 周穎, 廖予妹. 聯(lián)合檢測多種分子標志物及血清CA125對子宮內(nèi)膜癌的臨床意義［J］. 中國婦幼保健, 2014, 29(12): 1936-1940.

［6］ Gurda, G. T. , Baras, A. S. , Kurman, R. J. , et al. Ki-67 index as an ancillary tool in the differential diagnosis of proliferative endometrial lesions with secretory change［J］. International journal of gynecological pathology: Official journal of the International Society of Gynecological Pathologists, 2014, 33(2): 114-119.

［7］ 杜豆, 彭軍, 李智信, 等. K i-67、E2 F-1在子宮內(nèi)膜癌中的表達及意義［J］. 醫(yī)學理論與實踐, 2014, 7(11): 1507-1508.

［8］ 祁昔琴, 徐輝, 李紅, 等. 子宮內(nèi)膜癌組織中腫瘤芽的表達與臨床病理特征及預后的關系［J］. 臨床與實驗病理學雜志, 2014, 14(9): 987-990.

［9］ Kosmas, K. , Stamoulas, M. , Marouga, A. , et al. Expression of ki-67 as proliferation biomarker in imprint smears of endometrial carcinoma［J］. Diagnostic cytopathology, 2013, 41(3): 212-217.

［10］ Apostolou, G. , Apostolou, N. , Biteli, M. , et al. Utility of Ki-67, p53, Bcl-2, and Cox-2 biomarkers for low-grade endometrial cancer and disordered proliferative/benign hyperplastic endometrium by imprint cytology［J］. Diagnostic cytopathology, 2014, 42(2): 134-142.

The correlation research between ER, PR, Ki-67 expression and the occurrence of endometrial cancer

Ning Jing, Luo Na, Zheng Dong-mei
(Department of Gynecology and Obstetrics Hainan Branch of PLA General Hospital Sanya, Sanya 572013, China)

Objective To explore the relationship between the expression levels of estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR), Ki - 67 and the occurrence of endometrial carcinoma. M ethods Randomly selected 50 cases of patients as the research object which had a diagnosis of endometrial carcinoma in our hospital from January 2013 to October 2015. At the same time to random ly select 100 cases we receivered as the control group, among them 50 cases had atypical hyperplasia of endometrium and 50 cases had normal proliferative endometrium. In three groups, we tested the expression levels of ER, PR and Ki-67 in tissues by immunohistochemistry MaxVisionTM / HRP staining, then to research the clinical significance, at last we analyzed all results by statistical methods. Result The expression levels of ER and PR in the observation group were lower than the contorl group, and the expression levels in the atypical hyperplasia of endometrium group were significantly lower than in the normal proliferative endometrium group. The expression levels of Ki - 67 were the most obvious in the observation group, and the expression levels were the least in normal proliferative endometrium group, it had statistical significance in the two groups. Conclusion The expression levels of ER, PR and Ki - 67 were closely related with the occurrence and development of endometrial cancer, their expression levels could obviously reflected the degree and prognosis of endometrial carcinoma. It can be as the clinical key research direction of targeted therapy in endometrial cancer.

ER; PR; Ki - 67; endometrial cancer

R737.33

A

1673-016X（2017）03-0138-03

2017-01-03

寧靜，E-mail：ning jing8874@163.com