綠原酸在小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化進(jìn)程中的作用

朱 琪，康勁翮，楊佳蒴，彭曙光*，王 征*

(1湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長(zhǎng)沙 410128； 2中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所/中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)過(guò)程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/湖南省農(nóng)業(yè)生態(tài)過(guò)程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)沙 410125；3湖南省煙草科學(xué)研究所，長(zhǎng)沙 410125)

綠原酸在小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化進(jìn)程中的作用

朱 琪1，康勁翮2，楊佳蒴3，彭曙光3*，王 征1*

(1湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，長(zhǎng)沙 410128；2中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所/中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)過(guò)程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/湖南省農(nóng)業(yè)生態(tài)過(guò)程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)沙 410125；3湖南省煙草科學(xué)研究所，長(zhǎng)沙 410125)

目的：探討綠原酸(CGA)對(duì)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響。方法：培養(yǎng)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞，分別設(shè)置空白對(duì)照組(CG)、陽(yáng)性對(duì)照組羅格列酮組(RG)、陰性對(duì)照組GW9662組 (GG)和綠原酸組(CGA)。油紅O染色觀察小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化后的細(xì)胞形態(tài)變化以及脂滴形成情況；組織細(xì)胞甘油三酯(TAG)酶法測(cè)定各組分化后的細(xì)胞TAG積累量；實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(qPCR)檢測(cè)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞在分化過(guò)程中關(guān)鍵基因PPARγ2 mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：CGA組被油紅O染色的區(qū)域大于CG組和GG組，但CGA組顏色沒(méi)有RG組鮮艷，且脂滴形狀也與RG組存在差異。CGA組TAG積累量低于CG組和RG組，與CG組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但與RG組比較有顯著性差異(P<0.05)。在分化過(guò)程中，CGA組和RG組PPARγ2 mRNA的表達(dá)量高于CG組和GG組，有顯著性差異(P<0.01)，GG組PPARγ2 mRNA的表達(dá)量自細(xì)胞分化第4d起低于CG組，有顯著性差異(P<0.01)。結(jié)論：CGA可以促進(jìn)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化，同時(shí)降低分化后成熟脂肪細(xì)胞中TAG的積累量，其機(jī)制與分化相關(guān)因子PPARγ2的表達(dá)有關(guān)。

綠原酸(CGA)；3T3-L1前脂肪細(xì)胞；細(xì)胞分化；PPARγ2；甘油三酯(TAG)

脂肪細(xì)胞分化與肥胖與胰島素抵抗等慢性疾病有密切關(guān)系。肥胖是一種慢性低度炎癥，造成肥胖的主要原因就是脂肪組織的炎癥現(xiàn)象，肥胖引起的慢性炎癥與諸多代謝性疾病如胰島素抵抗、2型糖尿病和心血管疾病等密切相關(guān)[1-3]。很多研究表明，多種茶飲、水果及蔬菜中都富含多酚類物質(zhì)，具有降糖降脂等生物活性。

綠原酸(CGA)是由咖啡酸與奎尼酸組成的羧酚酸[4]。綠原酸是植物體有氧呼吸代謝的產(chǎn)物，具有抗炎癥、抗氧化活性、抗病毒活性、抗腫瘤活性和神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)等多種生物活性[5]。Liu SL等[6]研究發(fā)現(xiàn)，綠原酸可以改善肥胖及相關(guān)代謝紊亂，通過(guò)阻礙炎癥途徑NF- kB通路，并上調(diào)PPARγ2的表達(dá)。Huang K等[7]研究發(fā)現(xiàn)，綠原酸可有效改善飼喂高脂SD大鼠的肝臟脂代謝，增加肝臟PPARα的表達(dá)，加速脂肪酸的β-氧化，下調(diào)脂肪酸合成限速酶乙酰CoA羧化酶的表達(dá)。宋卓等[8]研究表明，綠原酸可以調(diào)節(jié)大鼠脂肪組織的脂肪合成。Shimoda H等[9]研究表明，口服綠原酸有降低大鼠內(nèi)臟脂肪堆積和體脂量的作用，這可能與綠原酸能夠降低肝臟TG水平有關(guān)。De Sotillo D V R等[10]研究發(fā)現(xiàn)，大鼠通過(guò)靜脈注射綠原酸5mg/mL，連續(xù)注射3w，其血漿中的膽固醇以及甘油三醋含量分別下降了44%和58%，而且綠原酸也能夠顯著降低肝臟中的甘油三酯水平。這些研究表明，綠原酸對(duì)脂代謝的調(diào)節(jié)起到了很有效的作用，對(duì)因肥胖引起的慢性炎癥有明顯的抑制。Dos Santos M D等[11]研究表明，綠原酸對(duì)角叉萊膠和福爾馬林誘導(dǎo)炎癥的動(dòng)物具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用，這可能與動(dòng)物外周炎癥介質(zhì)的合成和釋放有關(guān)。Matsuda E等[12]研究發(fā)現(xiàn)，杜仲提取物能夠抑制脂質(zhì)在3T3-L1脂肪細(xì)胞中的堆積，杜仲提取物的主要組成成分有兒茶素、原兒茶酸、沒(méi)食子酸、綠原酸。楊斌等[13]通過(guò)研究廣西山銀花綠原酸體外抗炎作用及分子機(jī)制發(fā)現(xiàn)綠原酸具有體外抗炎作用，其作用機(jī)制可能與抑制TNF-α、IL-6等炎癥因子的活化以及影響花生四烯酸(AA)代謝有關(guān)。

我們前期工作表明，綠原酸可以上調(diào)飼喂高脂的SD大鼠脂肪細(xì)胞PPARγ的表達(dá)，但是綠原酸組SD大鼠并沒(méi)有出現(xiàn)明顯的肥胖。為了進(jìn)一步研究其機(jī)理，我們擬研究綠原酸對(duì)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響及其影響機(jī)制，探討綠原酸改善肥胖、抵抗炎癥在前脂肪細(xì)胞中的作用，為膳食結(jié)構(gòu)的調(diào)整和和優(yōu)化提供有意的參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞系、油紅O染液，中國(guó)維爾生物；乙醇、異丙醇、三氯甲烷、多聚甲醛，國(guó)藥；RIPA裂解液，中國(guó)北京普利萊；組織細(xì)胞甘油三酯酶法測(cè)定試劑盒，中國(guó)碧云天；引物，上海生工；高糖培養(yǎng)基、磷酸緩沖液，美國(guó)Hyclone公司；小牛血清、胎牛血清、胰蛋白酶、青霉素/鏈霉素溶液，美國(guó)GIBCO公司；綠原酸(≥95%)、羅格列酮(≥98%)、GW9662(≥99%)、二甲基亞砜(DMSO)、胰島素、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)(≥99%)、焦碳酸二乙酯(DEPC)，美國(guó)Sigma公司；TRIzol Reagent，美國(guó)Invitrogen公司；地塞米松，日本TCI公司；RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Premix Ex TaqTM Ⅱ(Tli RNaseH Plus)，日本TaKaRa公司。

超凈工作臺(tái)，蘇州集團(tuán)安泰空氣技術(shù)有限公司；恒溫水浴鍋HH-S2，中國(guó)河南金博；旋渦混合器，中國(guó)江蘇其林貝爾；細(xì)胞培養(yǎng)恒溫箱、超低溫冰箱、實(shí)時(shí)熒光PCR儀，美國(guó)Thermo公司；酶標(biāo)儀，美國(guó)Biotek公司；Allegra X-22R Centrifuge離心機(jī)，美國(guó)Beckman coulter公司；DMI3000B倒置顯微鏡，德國(guó)Leica公司。

1.2 方法

1.2.1 小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞的培養(yǎng) 小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞用完全培養(yǎng)基(DMEM高糖培養(yǎng)基+10%小牛血清+1%青霉素/鏈霉素溶液)在條件為37°C、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿的80%～90%時(shí)，用于接種細(xì)胞培養(yǎng)板。

1.2.2 小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化 細(xì)胞按105個(gè)/mL的密度接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，2mL/孔，當(dāng)細(xì)胞增殖至接觸抑制時(shí)，換完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)2d，然后換分化培養(yǎng)基1(DMEM高糖培養(yǎng)基+10%胎牛血清+500μmol/L IBMX+1μmol/L地塞米松+5μg/mL胰島素)培養(yǎng)(分化第0d)，2d后換分化培養(yǎng)基2(DMEM高糖培養(yǎng)基+10%胎牛血清+5μg/mL胰島素)培養(yǎng)，2d后換分化維持培養(yǎng)基(DMEM高糖培養(yǎng)基+10%胎牛血清)培養(yǎng)，之后每隔2d換1次分化維持培養(yǎng)基，連續(xù)培養(yǎng)6d，至大部分前脂肪細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞，細(xì)胞中可見(jiàn)明顯脂滴。

1.2.3 小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞加藥處理 在細(xì)胞分化的第0天分別在陽(yáng)性對(duì)照組中加入羅格列酮，在陰性對(duì)照組中加入GW9662，在綠原酸組中加入綠原酸，藥物作用2d，并設(shè)置空白對(duì)照組。

1.2.4 油紅O染色法觀察細(xì)胞誘導(dǎo)分化情況 在細(xì)胞分化的第10d，棄去細(xì)胞培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS清洗細(xì)胞兩次。加入4%多聚甲醛室溫下固定30～60min，棄去固定液。加入1mL油紅O稀釋液(油紅O染液：去離子水=3：2)，使其完全覆蓋細(xì)胞表面，室溫下染色1h，棄去染色液。75%酒精多次漂洗，除去多余的染料。超純水多次沖洗，倒置顯微鏡下觀察，拍照記錄。

1.2.5 組織細(xì)胞甘油三酯測(cè)定試劑盒檢測(cè)分化后細(xì)胞甘油三酯積累情況 在細(xì)胞分化的第10d收集細(xì)胞，按照組織細(xì)胞甘油三酯測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。測(cè)定波長(zhǎng)550nm處的吸光值。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算甘油三酯濃度。以每mg蛋白濃度或細(xì)胞數(shù)校正甘油三酯含量。

1.2.6 qPCR法檢測(cè)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞PPARγ2的表達(dá) 在細(xì)胞分化的第0、2、4、6、8、10d，提取細(xì)胞RNA并檢測(cè)RNA濃度；按RNA反轉(zhuǎn)試劑盒步驟反轉(zhuǎn)成cDNA(總體積20μL)；用Primer Premier 5.0進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，以β-actin為參照基因進(jìn)行qPCR[10μL體系：SYBR Premix Ex Taq Ⅱ(Tli RNaseH Plus)(2×)5μL+PCR Forward Primer(10μmol/L)0.5μL+PCR Reverse Primer(10μmol/L)0.5μL+樣本cDNA1μL+dH2O 3mL]。反件：stage1：預(yù)變性95°C 30sec，stage2：PCR反應(yīng)95°C 5sec、60°C 30sec(single)40cycles，stage3：溶解曲線分析95°C 5sec、60°C 1min、97°C 1cycle，stage4：降溫40°C 30sec 1cycle。反應(yīng)結(jié)束后導(dǎo)出CT值進(jìn)行分析計(jì)算，基因的相對(duì)表達(dá)量=2-△△CT。引物設(shè)計(jì)如附表。

附表 目的基因及引物序列

1.2.7 統(tǒng)計(jì)分析 所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，通過(guò)SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05表示有顯著性差異、P<0.01表示有極大顯著性差異、P>0.05表示無(wú)顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 CGA對(duì)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響

細(xì)胞分化第10d油紅O染色后，通過(guò)倒置光學(xué)顯微鏡對(duì)細(xì)胞染色情況進(jìn)行觀察拍照，結(jié)果見(jiàn)圖2。CG組被油紅O染色的區(qū)域較少，顏色較淺，呈圓形的細(xì)胞較少，大部分細(xì)胞還是呈梭形的前脂肪細(xì)胞(圖1-A)。RG組有大量被油紅O染色的圓形脂滴，顏色鮮紅，80%以上的細(xì)胞都是呈圓形的脂肪細(xì)胞(圖1-B)。GG組和其他組相比，被油紅O染色的區(qū)域是最少的，顏色很淺，呈圓形的細(xì)胞也最少(圖1-C)。CGA組也有大片區(qū)域被油紅O染成紅色，但其顏色沒(méi)有RG組鮮艷，也不是像RG組那樣是明顯的圓形脂滴，有大量呈圓形的細(xì)胞(圖1-D)。

A：CG組 B：RG組 C：GG組 D：CGA組圖1 CGA對(duì)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響(油紅o染色×200)注：*P<0.05 vs CG、**P<0.01 vs CG、#P<0.05 vs RG、##P<0.01 vs RG(同圖2、圖3)。

2.2 CGA對(duì)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化后TAG積累量的影響

細(xì)胞分化第10d后，收集細(xì)胞用組織細(xì)胞甘油三酯測(cè)定試劑盒檢測(cè)分化后細(xì)胞TAG積累情況，結(jié)果如圖2。RG組TAG積累量最大，與CG組相比有顯著性差異(P<0.05)。GG組TAG積累量最少，與CG組相比無(wú)顯著性差異，但與RG組相比有顯著性差異(P<0.05)。CGA組TAG積累量與CG組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)，與RG組相比有顯著性差異(P<0.05)。

圖2 CGA對(duì)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化后TAG積累量的影響

2.3 CGA對(duì)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中PPARγ2表達(dá)的影響

如圖3，在細(xì)胞分化的第2d各組PPARγ2 mRNA的表達(dá)量相比，RG組和CAG組的表達(dá)量高于CG組和GG組，CGA組表達(dá)量最高，與其他組相比有顯著性差異(P<0.01)，GG組與CG組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)。在細(xì)胞分化的第4d各組PPARγ2 mRNA的表達(dá)量相比，RG組和CGA組的表達(dá)量高于CG組和GG組，CGA組和RG組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)，與CG組比較有顯著性差異(P<0.01)，GG組表達(dá)量最低，與其他組比較有顯著性差異(P<0.01)。在分化的第6、8、10d各組PPARγ2 mRNA的表達(dá)量相比，RG組和CGA組的表達(dá)量高于CG組和GG組，CGA組表達(dá)量最高，GG組表達(dá)量最低，與CG組比較有顯著性差異(P<0.01)。隨著分化的進(jìn)行PPARγ2 mRNA的表達(dá)有逐漸上升的趨勢(shì)，在分化后期處于高表達(dá)的水平。

圖3 CGA對(duì)小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中PPARγ2 mRNA表達(dá)的影響

3 結(jié)論

綠原酸可以促進(jìn)小鼠 3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化，其機(jī)制是綠原酸能夠上調(diào)分化相關(guān)基因PPAPγ2的表達(dá)。與羅格列酮不同是，雖然兩者都能提高PPARγ2的表達(dá)，但被綠原酸干預(yù)的前脂肪細(xì)胞分化后的得到的成熟脂肪細(xì)胞中TAG的積累量卻并不高，我們課題組在之前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，綠原酸干預(yù)的高脂飼喂SD大鼠組中，脂肪組織激素敏感脂肪酶mRNA表達(dá)上調(diào)，三酰甘油加速代謝[8]。我們認(rèn)為，雖然綠原酸可以上調(diào)PPARγ2的表達(dá)，促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的分化，但并不造成三酰甘油的含量的積累。其機(jī)制有待作進(jìn)一步研究。

4 討論

脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成，聚集成團(tuán)的脂肪細(xì)胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉。脂肪細(xì)胞是高度分化的成熟細(xì)胞，在脂肪組織中形成并儲(chǔ)存脂肪，在脊椎動(dòng)物體內(nèi)能量的平衡中發(fā)揮著重要的作用。成人體內(nèi)脂肪細(xì)胞的數(shù)量是恒定的，保持不變的，而且約10%的脂肪細(xì)胞在成人年齡和身體質(zhì)量指數(shù)水平下，每年更新1次[14]。成熟的脂肪細(xì)胞中有大量脂滴的積累，它可以由前脂肪細(xì)胞分化形成。前脂肪細(xì)胞是呈梭形或多邊形的，且不含脂滴，成熟的脂肪細(xì)胞呈圓形，且細(xì)胞內(nèi)有大量脂滴積累[15]。

脂肪細(xì)胞增殖、分化異常會(huì)引起脂肪組織的過(guò)多堆積，繼而導(dǎo)致脂肪細(xì)胞內(nèi)分泌功能失調(diào)，引起肥胖和胰島素抵抗的發(fā)生[16]。Liu SL等[6]研究發(fā)現(xiàn)，綠原酸能降低高脂飼喂SD大鼠血清中總膽固醇、甘油三酯、游離脂肪酸水平，有效緩解高脂飲食造成的體重增加。Harmon A W等[17]研究了染料木黃酮及柚皮素對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞中脂代謝的影響，發(fā)現(xiàn)染料木黃酮能抑制3T3-L1 前脂肪細(xì)胞的增殖、減少胞內(nèi)甘油三酯的積聚并上調(diào)PPARγmRNA 的表達(dá)，而柚皮素?zé)o此作用。Hu E等[18]研究表明，PPARγ和C/EBPα是前脂肪細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，PPARγ能促進(jìn)培養(yǎng)的成肌細(xì)胞轉(zhuǎn)化為脂肪細(xì)胞，尤其在與C/EBPα共表達(dá)時(shí)作用更加明顯。本試驗(yàn)以PPARγ激動(dòng)劑羅格列酮作陽(yáng)性對(duì)照，以PPARγ抑制劑GW9662作陰性對(duì)照；油紅O染色結(jié)果可以看出RG組的細(xì)胞分化程度較其他組高，且可見(jiàn)大量被染成紅色的脂滴，脂滴形狀呈圓形。作為能抑制其表達(dá)，油紅O染色結(jié)果可以看出GG組中被染色的區(qū)域較其他組少，且顏色較淺，呈圓形的脂肪細(xì)胞也很少。CGA組被油紅O染色的區(qū)域較CG組多，但其顏色較淺，且脂滴形狀與RG組有差異，脂滴大小也較RG組小。TAG測(cè)定結(jié)果顯示，RG組TAG的積累量最多，高出空白組1倍。GG組TAG積累量最低，但其與CG組無(wú)顯著性差異，CGA組TAG積累量略低于CG組，與CG組無(wú)顯著性差異。說(shuō)明CGA可以促進(jìn)細(xì)胞的分化，并且降低分化后的脂肪細(xì)胞中的脂質(zhì)積累，其機(jī)制可能與CGA能夠上調(diào)前脂肪細(xì)胞中PPARγ表達(dá)有關(guān)。

前脂肪細(xì)胞的分化過(guò)程有很多分化相關(guān)因子的參與，其中起關(guān)鍵作用的是PPARγ[19]。PPARγ是重要的細(xì)胞分化轉(zhuǎn)錄因子，在哺乳動(dòng)物的脂肪組織、血管平滑肌組織、心肌組織中均有表達(dá)，它至少有兩種亞型：在大多數(shù)組織中都表達(dá)的PPARγ1和特異表達(dá)于脂肪組織的PPARγ2[20]。PPARγ必須與類視黃醇X受體(Retinoid X receptor，RXR)形成二聚體，才能結(jié)合DNA表現(xiàn)出轉(zhuǎn)錄活性；在前脂肪細(xì)胞中通過(guò)PPARγ、C/EBPs和ADD1/SREBP-1的相互作用來(lái)調(diào)控細(xì)胞的分化[21]。PPARγ和C/EBPα在前脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控中處于同一途徑，C/EBPα的活動(dòng)依賴于PPARγ，此外，PPARγ和C/EBPα還能協(xié)同激活分化相關(guān)基因的表達(dá)[22]。本試驗(yàn)PPARγ2 mRNA表達(dá)結(jié)果顯示：羅格列酮能夠促進(jìn)PPARγ2 mRNA的表達(dá)，在細(xì)胞分化的第2d時(shí)PPARγ2 mRNA的表達(dá)量已經(jīng)高于CG組；GW9662能夠抑制PPARγ2 mRNA的表達(dá)，在細(xì)胞分化的第4d，GG組PPARγ2 mRNA的表達(dá)量明顯低于CG組，表現(xiàn)出抑制效果。CAG組在細(xì)胞分化的第2dPPARγ2 mRNA的表達(dá)量高于CG組，之后其表達(dá)逐漸上調(diào)。說(shuō)明CGA和羅格列酮有一樣的功能，CGA可以促進(jìn)PPARγ2 mRNA的表達(dá)。總的來(lái)說(shuō)，CGA具有促進(jìn)小鼠 3T3-L1前脂肪細(xì)胞PPARγ2表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞分化的作用。這與黃康[23]綠原酸對(duì)大鼠肝臟脂肪代謝調(diào)節(jié)機(jī)制研究和Liu SL等[6]的研究結(jié)果相似?！?/p>

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(責(zé)任編輯 李婷婷)

Effects of Chlorogenic Acid During Differentiation Process of Mouse 3T3-L1 Preadipocytes

ZHU Qi1，KANG Jin-he2，YANG Jia-shuo3，PENG Shu-guang3，WANG Zheng1

(1College of Bioscience and Biotechnology，Hunan Agricultural University，Changsha 410128，China；2Institute of Subtropical Agriculture，The Chinese Academy of Sciences / Key Laboratory of Agro-ecological Processes in Subtropical Region/Hunan Key Laboratory of Agro-ecological Processes，，Changsha 410125，China；3Research Institute of Hunan Tobacco Science，Changsha 410125，China)

ObjectiveTo investigate the effects of chlorogenic acid(CGA)on the differentiation of mouse 3T3-L1 preadipocytes .MethodThe culture of mouse 3T3-L1 preadipocytes were divided into 4 groups including control group(CG)，the positive control group of rosiglitazone group(RG)，the negative control group of GW9662 group (GG)and chlorogenic acid group(CGA).The cell morphological changes and formation of lipids droplet of mouse 3T3-L1 preadipocytes after differentiation were observed by oil red O staining method.The triacylglyceride (TAG)accumulation of differentiation cells in different groups was determined by tissue cell triglyceride enzyme method.The expressions ofPPARγ2 mRNA during the differentiation process of mouse 3T3-L1 preadipocytes was determined by quantitative Real-time PCR(qPCR).ResultIn CGA group，the area of oil red O staining was larger than that of CG group and GG group，but the color of CGA group was not bright and the shape of lipids droplet was also different from that of RG group.In CGA group，the accumulation of TAG was lower than that in CG group and RG group，and compared with CG group it was not significantly (P>0.05)but compared with RG group it was significantly (P<0.05).During the differentiation process of mouse 3T3-L1 preadipocytes：The expressions ofPPARγ2 mRNA in CGA group and RG group was higher than that in CG group and GG group (P<0.01).To begin fourth days of differentiation，the expressions ofPPARγ2 mRNA in GG group was lower than that in CG group (P<0.01).ConclusionCGA can promote the differentiation of mouse 3T3-L1 preadipocytes，and decrease the accumulation of TAG in mouse 3T3-L1 preadipocytes after differentiation.The mechanism is connected with the expression ofPPARγ2.

CGA；3T3-L1 preadipocytes；cell differentiation；PPARγ2；TAG

湖南省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：14A071)；中國(guó)煙草總公司湖南省公司科技項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：15-17Aa04)。

朱琪(1993— )，女，學(xué)術(shù)型碩士研究生，研究方向：天然產(chǎn)物的開(kāi)發(fā)與利用。

*共同通信作者：王征(1967— )，女，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：食物營(yíng)養(yǎng)與藥理；彭曙光(1973— )，男，高級(jí)農(nóng)藝師，研究方向：煙草資源利用。