刺玫籽油及原花青素降血脂作用

胡濟美，李倬林，岳玉蘭，容晨曦，黃 威，薛培宇，李鐵柱,*，張 杰,*（.中國國際工程咨詢公司，北京 00048；.吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，吉林 長春 304）

刺玫籽油及原花青素降血脂作用

胡濟美1，李倬林2，岳玉蘭2，容晨曦2，黃 威2，薛培宇2，李鐵柱2,*，張 杰2,*
（1.中國國際工程咨詢公司，北京 100048；2.吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，吉林 長春 130124）

通過動物實驗對刺玫籽油和刺玫籽原花青素進行降血脂功能性研究。選用昆明雄性小鼠，通過高脂飼料飼喂建立高脂模型小鼠，分別經(jīng)口灌胃刺玫籽油及原花青素5 周后，檢測分析小鼠血清及肝組織勻漿各項指標(biāo)。結(jié)果顯示，刺玫籽油及原花青素對小鼠體質(zhì)量及主要臟器指數(shù)無顯著影響；中劑量（100 mg/kg）、高劑量（200 mg/kg）的刺玫籽原花青素會顯著降低高脂小鼠血清內(nèi)低密度脂蛋白膽固醇、總膽固醇、甘油三酯含量（P＜0.05），顯著升高小鼠肝組織內(nèi)超氧化物歧化酶活力、過氧化氫酶活力、谷胱甘肽過氧化酶水平（P＜0.05），顯著降低肝組織內(nèi)丙二醛水平；低劑量（80 mg/kg）刺玫籽油能顯著降低高脂小鼠血清內(nèi)甘油三酯水平（P＜0.05）及顯著升高小鼠肝組織中過氧化氫酶活力（P＜0.05）。研究結(jié)果表明，低劑量的刺玫籽油和中、高劑量的刺玫籽原花青素對高脂血癥小鼠有一定的降血脂作用。

刺玫籽油；原花青素；降血脂

隨著我國經(jīng)濟穩(wěn)步發(fā)展，人們生活水平快速提高，高膽固醇高油脂類食物大量攝入正影響著人們的身體健康[1-3]，人們對具有降血脂功能保健食品的需求日益增長。

刺玫籽作為刺玫加工副產(chǎn)物，富含大量的原花青素及刺玫籽油，具有較高的開發(fā)價值。大量研究結(jié)果表明，原花青素有能力引導(dǎo)內(nèi)表面依賴性血管舒張功能，增加膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運，降低總膽固醇和低密度脂蛋白[4-7]。刺玫籽油中富含不飽和脂肪酸（如亞油酸、亞麻酸和油酸）以及多種維生素（如VC、VE、VB1和VB2）、β-胡蘿卜素）[8-10]。因此，研究刺玫籽油及刺玫籽原花青素降血脂功能，對于刺玫籽油及刺玫籽原花青素類保健食品的開發(fā)具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料、動物與試劑

刺玫籽油、刺玫籽原花青素由吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院實驗室提取制備；豆油 九三糧油工業(yè)集團有限公司。

清潔級雄性昆明小鼠（生產(chǎn)許可證SCXK（吉2013-0001）、使用許可證SYXK（吉2013-0005）） 吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。飼料：小鼠基礎(chǔ)飼料，高脂飼料由1%膽固醇、20%豬油、10%蛋黃粉、69%基礎(chǔ)飼料組成。

磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氯化鈉、氯化鉀 北京化工廠；總膽固醇（total cholesterol，TC）試劑盒、甘油三酯（triglyceride，TG）試劑盒、低密度脂蛋白-膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）試劑盒、高密度脂蛋白-膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）試劑盒、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒、過氧化氫酶（catalase，CAT）試劑盒、谷胱甘肽過氧化酶（glutathione peroxidas，GSH-Px）試劑盒、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor α，TNF-α）試劑盒、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）試劑盒 上海朗頓生物科技有限公司；牛血清白蛋白測定試劑盒 北京索萊寶科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

5415D型離心機 德國Eppendorf基因有限公司；705型－80 ℃超低溫冰箱、CR3i冷凍型多功能離心機美國Thermo Fisher科技公司；基因型1810a摩爾超純水器上海摩勒科學(xué)儀器有限公司；DHP-9272型電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司；722E可見分光光度計上海光譜儀器有限公司；ELx800全自動酶標(biāo)儀 美國Biotek公司 ；FSH-II型高速電動勻漿器 江蘇金壇金城國盛實驗儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 實驗動物分組設(shè)計

小鼠均自由飲食飲水，動物房通風(fēng)光照良好，自然晝夜光線照明，室溫20 ℃左右。

小鼠普通飼料適應(yīng)喂養(yǎng)6～8 d，自由飲水。適應(yīng)環(huán)境后，將小鼠隨機分為2 組，空白對照組飼喂普通飼料，高脂模型組飼喂高脂飼料。4 周后，禁食不禁水12 h，各組抽取3只，測定小鼠血清中TC、TG水平，判定小鼠高血脂模型構(gòu)造是否成功[11-12]。

待建模成功后，將小鼠進行分組，上午灌胃1 次/d，連續(xù)干預(yù)5 周，動物分組及灌胃劑量（以體質(zhì)量計）見表1。

表1 實驗動物分組及設(shè)計Table 1 Experimental design and animal grouping

1.3.2 指標(biāo)測定

1.3.2.1 生理指標(biāo)的測定

實驗第35天（5 周后），小鼠禁食不禁水14～16 h后摘除眼球采血，頸椎脫臼法處死，取肝臟、心臟、腎臟、脾臟、腎周及腹股溝脂肪，用0.02 mol/L的磷酸鹽緩沖液沖洗，濾紙吸干，稱質(zhì)量，計算臟器指數(shù)公式如下。

1.3.2.2 血清的制備及各指標(biāo)的測定

將血液置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置1 h，待其充分凝固后，放于4 ℃冰箱保存，3 000 r/min低速離心15 min，取上清液即為血清，分離血清后，分裝，于－80 ℃冰箱冷凍保存，并于2 d內(nèi)測定相關(guān)指標(biāo)[13]。切記反復(fù)凍融，避免影響各種酶活性。

以血清為材料，測定血脂指標(biāo)，包括TC、TG、LDL-C、HDL-C含量。測定血清炎癥因子指標(biāo)，包括TNF-α、IL-6含量，按試劑盒說明書操作。每組標(biāo)準(zhǔn)曲線做復(fù)孔，設(shè)定2 個平行。

1.3.2.3 肝組織勻漿的制備及各指標(biāo)的測定

用冰冷0.02 mol/L磷酸鹽將肝組織漂洗，濾紙吸干，準(zhǔn)確稱取肝組織0.3 g，剪碎后與9倍質(zhì)量的磷酸鹽緩沖液混合，組織勻漿器進行勻漿。勻漿時注意離心管下端須插入冰浴，充分研磨約20 s，4 ℃離心10 min，轉(zhuǎn)速為4 000 r/min，取上清液，得到10%的肝組織勻漿。將肝組織勻漿用磷酸鹽緩沖液稀釋為不同梯度，分裝后置于－80 ℃保存?zhèn)溆?，避免反?fù)凍融[14-15]。

肝組織各指標(biāo)測定按照試劑盒說明書操作，包括SOD活力、CAT活力、GSH-Px活力、MDA含量。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件分析處理，進行單因素方差分析（ANOVA），以Duncan’s法進行多重檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 高脂血癥模型小鼠造模結(jié)果

實驗期間，空白對照組小鼠精神狀態(tài)較好，體質(zhì)量穩(wěn)定上升；高脂模型組小鼠體質(zhì)量呈先增長后降低再增長的趨勢，實驗前期毛發(fā)粗糙，微黃色，活躍程度下降，無腹瀉。兩組都不存在搏斗現(xiàn)象，實驗期間無動物死亡狀況。由表2可知，實驗動物經(jīng)兩種飼料飼喂28 d后，高脂飼料造模組小鼠的體質(zhì)量相對空白組高出8%，TG、TC水平升高明顯，依次比空白組高出9.5%、35%，具有顯著性差異（P＜0.05），結(jié)果表明高脂模型構(gòu)建成功。

表2 飼養(yǎng)28 d高脂模型小鼠建立與判定（n=3）Table 2 Establishment and identification of hyperlipidemic mice model (n= 3)

2.2 刺玫籽油及原花青素對高膽固醇膳食小鼠生理指標(biāo)的影響

表3 刺玫籽油及原花青素對小鼠肝臟、心臟、脾臟、腎臟及脂肪指數(shù)的影響（，n=10）Table 3 Effect of the seed oil and procyanidins on visceral organ indexes and fat index in mice,n= 10)

表3 刺玫籽油及原花青素對小鼠肝臟、心臟、脾臟、腎臟及脂肪指數(shù)的影響（，n=10）Table 3 Effect of the seed oil and procyanidins on visceral organ indexes and fat index in mice,n= 10)

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灌胃5 周后，比較各組小鼠體質(zhì)量可以看出，與空白對照組相比，高脂模型組體質(zhì)量有顯著差異（P＜0.05），見表3，表明高脂飼料進食可能會導(dǎo)致小鼠體質(zhì)量增長速度加快；其他處理組間體質(zhì)量并未見顯著差異（P＞0.05），說明豆油、刺玫籽油及原花青素的攝入對小鼠的正常代謝和生長沒有顯著影響，間接說明小鼠能夠適應(yīng)各組給藥劑量。

臟器指數(shù)可以反映各組小鼠營養(yǎng)情況和機體臟器的病變情況，當(dāng)外來物質(zhì)損害某內(nèi)臟時，臟器指數(shù)會上下浮動，超出正常值。將表3各臟器指數(shù)進行差異性分析，發(fā)現(xiàn)高脂模型組的肝臟指數(shù)、脂肪指數(shù)略高于空白對照組以及其他干預(yù)組，說明高血脂癥小鼠肝臟較肥大，但各干預(yù)組小鼠臟器指數(shù)和脂肪指數(shù)與空白組、高脂模型組、豆油對照組相比，均未見顯著性差異（P＞0.05），表明刺玫籽油及原花青素對重要器官沒有毒副作用，不會造成臟器異?；虿∽儭?/p>

2.3 刺玫籽油及原花青素對高膽固醇膳食小鼠血脂指標(biāo)的影響

HDL-C能夠?qū)⒀褐械哪懝檀驾斔偷礁闻K中，從而降低血液中膽固醇含量，有效促進膽固醇的輸出和代謝，HDL-C水平的提高會減緩動脈粥樣硬化病癥的進展，起到避免冠心病等心腦血管類疾病的作用，因此HDL-C含量的升高對維持身體機能正常運轉(zhuǎn)是有利的。LDL-C是將肝臟內(nèi)部合成的膽固醇分子載入動脈壁細(xì)胞，運輸?shù)窖豪?，促使機體血液內(nèi)膽甾醇水平上漲，引起高血脂癥發(fā)生，因此LDL-C水平的提高對機體是有害的[16]。

表4 刺玫籽油及原花青素對小鼠血脂水平的影響（x±s ，n=10）Table 4 Effect of the seed oil and procyanidins on serum lipid levels in mice (x±s,n= 10)

從表4可以看出，空白對照組、高脂模型組、豆油對照組、刺玫籽油各劑量組及刺玫籽原花青素各劑量組間HDL-C含量不存在顯著差異（P＞0.05），說明刺玫籽油及原花青素的攝入不能顯著影響HDL-C的含量。高脂模型組小鼠LDL-C含量與刺玫籽原花青素高劑量組相比差異顯著（P＜0.05），平均降低14.02%，表明一定劑量的刺玫籽原花青素可以降低高血脂癥小鼠血清LDL-C的含量，并呈量效關(guān)系。刺玫籽油低、中、高劑量小組LDL-C值較高血脂模型對照組、豆油對照組略低，差異不顯著（P＞0.05），表明刺玫籽油不能顯著抑制LDL-C水平的升高。

從表4還可以看出，空白對照組TC含量與高脂模型組、豆油對照組、刺玫籽油高劑量組相比差距極顯著（P＜0.01），說明高油脂攝入能夠引起膽固醇總水平提升；刺玫籽原花青素低劑量組、刺玫籽油低、中劑量組對TC含量影響相似，略高于原花青素中劑量組；刺玫籽原花青素高劑量組顯著低于高脂模型組及豆油對照組（P＜0.05），說明高劑量的刺玫籽原花青素可以較好地抑制血液中TC含量升高。各組TG含量差異明顯，豆油對照組、刺玫籽油高劑量組和高脂模型組TG含量在最高水平，顯著高于空白對照組和其他干預(yù)組（P＜0.01或P＜0.05），說明過高的油脂攝入對血清TG含量影響較大；刺玫籽原花青素3 個劑量組、刺玫籽油低劑量組與高脂模型組差異顯著（P＜0.05），說明刺玫籽原花青素和一定劑量刺玫籽油能較好地調(diào)節(jié)血清內(nèi)TG水平。

2.4 刺玫籽油及原花青素對高膽固醇膳食小鼠血清中炎癥因子的影響

大量臨床研究表明，脂肪組織具有功能復(fù)雜的代謝活動，會滲出TNF-α和IL-6等一系列炎癥因子，從而影響生命個體代謝和健康狀態(tài)[17-19]。原因是單核細(xì)胞受油脂影響，分化成巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞激活脂肪組織，從而釋放出更多的炎癥因子包圍脂肪，引起能量的過渡蓄積，造成高血脂癥或肥胖癥患者長期處于低炎癥水平，并可能誘發(fā)糖尿病，促進動脈硬化[20-23]。

表5 刺玫籽油和刺玫籽原花青素使用對小鼠血清中 TNF-α、IL-6的影響，n=10）Table 5 Effect of the seed oil and procyanidins on serum TNF-αand IL-6 in mice (,n= 10)

表5 刺玫籽油和刺玫籽原花青素使用對小鼠血清中 TNF-α、IL-6的影響，n=10）Table 5 Effect of the seed oil and procyanidins on serum TNF-αand IL-6 in mice (,n= 10)

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由表5可知，各個干預(yù)組之間的動物血清中TNF-α及IL-6水平并不存在顯著差異（P＞0.05）。說明刺玫籽油及原花青素沒有顯著降低或提高小鼠炎癥因子，分析原因可能是：1）由于所有組別小鼠均參與灌胃，可能會對咽喉造成一定刺激，兩種炎癥因子含量略高。2）受條件限制，包括實驗條件、實驗小鼠個體差異明顯、刺玫籽油及原花青素實驗中使用劑量問題等因素影響實驗結(jié)果，造成實驗數(shù)據(jù)效果中出現(xiàn)一定范圍內(nèi)偏差。3）刺玫籽油及原花青素不能通過改善小鼠體內(nèi)炎癥的通路來降低血脂含量。以上原因有待后續(xù)驗證。

2.5 刺玫籽油及原花青素對高膽固醇膳食小鼠肝臟抗氧化系統(tǒng)的影響

SOD活力可以很好地反映生命個體對抗自由基的能力，由表6可知，豆油對照組SOD活力最低，顯著低于其他干預(yù)組（P＜0.05），表明一定劑量大豆油的攝入能夠降低機體SOD活力；與高脂模型組相比，刺玫籽原花青素中、高劑量組差異顯著（P＜0.05），表明一定給藥量刺玫籽原花青素可以提高機體SOD活力，使小鼠肝組織抗氧化能力明顯增強，從而幫助消除體內(nèi)氧自由基，并呈量效關(guān)系。刺玫籽原花青素低劑量、刺玫籽油3 個劑量與高脂模型組及空白對照組差異不明顯（P＞0.05），表明刺玫籽油的攝入對小鼠SOD活力影響不大。

表6 刺玫籽油及原花青素對小鼠肝臟抗氧化酶活力的影響（，n=8）Table 6 Effect of the seed oil and procyanidins on hepatic antioxidant enzyme activities in mices,n= 10)

表6 刺玫籽油及原花青素對小鼠肝臟抗氧化酶活力的影響（，n=8）Table 6 Effect of the seed oil and procyanidins on hepatic antioxidant enzyme activities in mices,n= 10)

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GSH-Px活力可以間接反映肝臟組織的還原能力。刺玫籽原花青素中、高劑量組GSH-Px活力顯著高于空白對照組（P＜0.05），并呈量效關(guān)系，再一次說明刺玫籽原花青素具有良好的抗氧化能力。刺玫籽油高、中、低劑量的GSH-Px水平與刺玫籽原花青素低劑量組（50 mg/kg）相似，均大于高脂模型組，差異性不顯著（P＞0.05），表明其還原能力較弱，但仍具有一定得抗氧化能力。

由表6可知，各干預(yù)組對CAT活力的影響，相比高脂模型組、豆油對照組，刺玫籽原花青素中、高劑量組，刺玫籽油低劑量組的CAT活力顯著升高，上升幅度分別為24.79%（P＜0.05）、35.04%（P＜0.01）、16.24%（P＜0.05）；刺玫籽原花青素低劑量組，刺玫籽油中、高劑量組的CAT活力與高脂模型組之間并無顯著差異（P＞0.05）。

脂質(zhì)在生物個體肝組織中進行過氧化反應(yīng)，而MDA為脂質(zhì)氧化的衍生物，同時也是不飽和脂肪酸由自由基氧化后的產(chǎn)物，因此通過檢測肝組織中MDA水平可以分析機體受氧自由基破壞的嚴(yán)重性[24-27]。由圖1可知，高脂模型組、豆油對照組與空白對照組相比MDA含量顯著增加（P＜0.05），說明過多油脂的攝入會產(chǎn)生一定危害。與高脂模型組相比，刺玫籽原花青素中、高劑量組MDA水平顯著降低（P＜0.05），刺玫籽原花青素低劑量組（50 mg/kg）MDA水平略有降低，差異性不顯著（P＞0.05），說明刺玫籽原花青素可以有效降低實驗動物小鼠肝臟組織內(nèi)MDA水平，減少氧自由基作用。刺玫籽油3個劑量組MDA含量介于空白對照組與高脂模型組、豆油對照組之間，差異性不顯著（P＞0.05），不呈量效關(guān)系，說明刺玫籽油降低MDA值有一定效果，但不顯著。

圖1 刺玫籽油及原花青素對小鼠肝組織MDA含量的影響Fig. 1 Effect of the seed oil and procyanidins on MDA content in liver of mice

3 結(jié) 論

刺玫籽油及原花青素對高脂血癥小鼠體質(zhì)量及臟器指數(shù)無顯著干擾（P＞0.05），高劑量（200 mg/kg）的刺玫籽原花青素攝入可以顯著降低高脂血癥模型小鼠血清中LDL-C、TC、TG含量（P＜0.05），進一步調(diào)節(jié)小鼠血脂代謝，有助降低動脈粥樣硬化癥發(fā)展的風(fēng)險。這與研究報道的葡萄籽原花青素單獨使用和聯(lián)合菸堿酸鉻施加能明顯影響高脂小鼠膽固醇和甘油三酯水平，以及脂質(zhì)氧化損傷所形成的硫代巴比妥酸反應(yīng)物質(zhì)的結(jié)論吻合[28-30]。低劑量（80 mg/kg）的刺玫籽油可以顯著下調(diào)高脂血癥小鼠血清內(nèi)TG水平（P＜0.05），對HDL-C、LDL-C、TC含量并無顯著效果（P＞0.05）。刺玫籽油及原花青素對高脂血癥小鼠血清中TNF-α和IL-6含量無顯著影響（P＞0.05）。刺玫籽原花青素可以顯著升高小鼠肝臟內(nèi)SOD、GSH-Px、CAT活力（P＜0.05），顯著降低MDA水平（P＜0.05），并顯示出量效依賴；刺玫籽油的適當(dāng)攝入可以顯著下調(diào)實驗動物（小鼠）肝臟中CAT活力（P＜0.05），對小鼠肝組織中SOD活力、GSH-Px活力、MDA水平無顯著影響，可能是因為刺玫籽油中有效成分較少，不能改善機體抗氧化能力。

實驗結(jié)果表明，刺玫籽原花青素能夠一定程度下調(diào)高脂血癥小鼠血脂水平，可能是因為刺玫籽原花青素分子具有顯著抗氧化的能力，起到消除氧自由基效果，從而防止血脂在動脈壁內(nèi)堆積沉降，促進血液循環(huán)；另一方面，刺玫籽原花青素能夠降低LDL-C水平，阻礙LDL-C將肝臟中膽固醇分子帶入動脈壁細(xì)胞，進一步降低機體血液內(nèi)膽固醇含量。

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Hypolipidemic Activity of Seed Oil and Procyanidins of Rosa davurica Pall.

HU Jimei1, LI Zhuolin2, YUE Yulan2, RONG Chenxi2, HUANG Wei2, XUE Peiyu2, LI Tiezhu2,*, ZHANG Jie2,* (1. China International Engineering Consulting Corporation, Beijing 100048, China; 2. Jilin Academy of Agricultural Sciences, Changchun 130124, China)

The hypolipidemic activity of the seed oil and procyanidins of Rosa davurica Pall. was investigated by animal tests. Kunming male mice fed a high fat diet were used as a hyperlipidemic animal model. After oral administration for 5 weeks, serum and liver homogenate were collected for the measurement of parameters of interest. Compared with the hyperlipidemic model group, both drugs had no significant effect on body weight and visceral organ indexes in mice. The proanthocyanidins at middle (100 mg/kg) and high doses (200 mg/kg) could significantly reduce serum LDL-C, TC and TG (P ＜ 0.05), significantly improve liver superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GSH-Px) levels (P ＜ 0.05), and significantly decrease liver MDA level. The oil at low dose (80 mg/kg) could evidently reduce serum TG levels in hyperlipidemic mice (P ＜ 0.05) and significantly increase in liver CAT activity (P ＜ 0.05). Therefore, the seed oil at low dose and the procyanidins at middle and high doses play a role in reducing blood lipids in hyperlipidemic mice.

Rosa davurica Pall. seed oil; procyanidins; lipid-lowering activity

10.7506/spkx1002-6630-201713035

TS201.1

A

1002-6630（2017）13-0213-06

胡濟美, 李倬林, 岳玉蘭, 等. 刺玫籽油及原花青素降血脂作用[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(13): 213-218. DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201713035. http://www.spkx.net.cn

HU Jimei, LI Zhuolin, YUE Yulan, et al. Hypolipidemic activity of seed oil and procyanidins of Rosa davurica Pall.[J]. Food Science, 2017, 38(13): 213-218. (in Chinese with English abstract)

10.7506/spkx1002-6630-201713035. http://www.spkx.net.cn

2016-06-16

吉林省科學(xué)技術(shù)廳重點科技攻關(guān)項目（20140204051YY）；吉林省科技廳重大科技攻關(guān)專項（20140203014NY）

胡濟美（1985—），男，工程師，碩士，研究方向為天然產(chǎn)物化學(xué)與利用。E-mail： hujimei2002@163.com

*通信作者：李鐵柱（1978—），男，副研究員，博士，研究方向為保健食品開發(fā)。E-mail：ltzjlu@126.com

張杰（1983—），男，助理研究員，博士，研究方向為保健食品開發(fā)。E-mail：narcc2007@163.com