羊口蹄疫疫病免疫效果檢測(cè)和分析

張永和 王龍 李明福 郝志耀 馬玲梅/陜西省綏德縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所白琳/陜西省綏德縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站于三科/西北農(nóng)林科技大學(xué)

羊口蹄疫疫病免疫效果檢測(cè)和分析

張永和 王龍 李明福 郝志耀 馬玲梅/陜西省綏德縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所白琳/陜西省綏德縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站于三科/西北農(nóng)林科技大學(xué)

羊口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，其特征是黏膜、四肢下端及乳房等處的皮膚形成水皰和爛斑，傳播迅速、流行廣、死亡率高，被世界衛(wèi)生組織規(guī)定為A類傳染病，我國(guó)列為一類傳染病。

近年來，養(yǎng)殖業(yè)迅速發(fā)展，養(yǎng)殖規(guī)模逐步擴(kuò)大，但是隨著養(yǎng)殖業(yè)不斷擴(kuò)建和外地引種，羊販子到處買賣羊只，導(dǎo)致羊口蹄疫疫病逐漸增多，這使得養(yǎng)羊場(chǎng)戶面臨疫病威脅也越來越嚴(yán)重。羊口蹄疫在羊群中傳播迅速，發(fā)病率高，羊群感染后，不僅飼料報(bào)酬降低，生長(zhǎng)緩慢，嚴(yán)重的引起大量死亡，不光身心健康造成損害，經(jīng)濟(jì)上也蒙受更大的損失。因此，適時(shí)檢測(cè)羊口蹄疫的疫病的抗體水平，科學(xué)制定免疫程序，及時(shí)掌握羊疫病抗體水平，對(duì)評(píng)估羊口蹄疫疫病防控效果，以及促使畜牧業(yè)健康發(fā)展具有重要影響。

本研究針對(duì)榆林市綏德縣養(yǎng)羊場(chǎng)疫苗接種實(shí)際情況，分別采集10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)20個(gè)養(yǎng)羊場(chǎng)1 000份血液樣品，然后分離血清樣品。對(duì)羊口蹄疫疫苗免疫抗體水平進(jìn)行檢測(cè)和評(píng)價(jià)，期望為養(yǎng)羊場(chǎng)口蹄疫疫病的防控提供基礎(chǔ)資料，以供下年度的防控提供參考。

本次研究對(duì)榆林市綏德縣10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)2014年、2015年養(yǎng)羊場(chǎng)戶口蹄疫免疫抗體合格率分別為88.6%，89.6%。疫苗免疫抗體檢測(cè)表明本區(qū)所抽檢養(yǎng)羊場(chǎng)戶羊口蹄疫合格率均高于農(nóng)業(yè)部要求的標(biāo)準(zhǔn)，表明本區(qū)近幾年羊主要疫病免疫工作扎實(shí)，有效。然每年仍有大量羊患病，被撲殺后無害化處理。抗體水平達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)時(shí)要求進(jìn)行再次免疫，務(wù)必達(dá)到所要求的抗體水平。

一、病原

口蹄疫病毒屬于RNA病毒，直徑為20～25 nm,呈圓形，無囊膜，內(nèi)部為單股線狀正鏈RNA,外部為蛋白質(zhì)。可分為七個(gè)血清型，即A、O、C，南非1型、2型、3型和亞洲I型。在本區(qū)主要為O型和亞洲I型，對(duì)外界環(huán)境抵抗力極強(qiáng)，耐干燥。自然條件下，飼料、飲水、皮毛、土壤中的所含病毒在數(shù)日，數(shù)周內(nèi)還能存活，且具有感染性。

二、流行病學(xué)

患病動(dòng)物及帶毒動(dòng)物是本病的主要傳染源，發(fā)病初期的患病動(dòng)物是最危險(xiǎn)傳染源，排毒量多、毒力強(qiáng)，可通過多途徑傳播。同一廄舍，可直接接觸傳播，空氣也是重要的傳播媒介。病毒能隨風(fēng)引起遠(yuǎn)距離跳躍式傳播。通常通過消化道、呼吸道以及損傷的皮膚、黏膜而感染。

本病沒有嚴(yán)格的季節(jié)性，呈現(xiàn)一定的流行性和周期性，各種應(yīng)激因素，氣候突變等成為本病的誘因。

三、臨床癥狀

潛伏期一般為一周，體溫升高達(dá)40℃～41℃，食欲不振、精神沉郁、流涎、口腔、舌面發(fā)生黃豆大水皰，一天后水皰破潰形成紅色糜爛，繼發(fā)感染化膿、壞死、站立不穩(wěn)、跛行、臥地不起，孕羊引起流產(chǎn)，嚴(yán)重時(shí)常因心肌炎而死，死亡率高達(dá)20%～50%，多呈良性經(jīng)過，一周后逐漸恢復(fù)。近年來，口蹄疫臨診表現(xiàn)和流行特點(diǎn)發(fā)生顯著變化，非典型和混合感染發(fā)生頻率增高，為診斷和治療帶來了較大困難。

四、病理變化

患病動(dòng)物口腔、蹄部、乳房、咽喉、氣管、胃粘膜可見水皰、爛斑和潰瘍及黑棕色結(jié)痂，心包有彌漫性及點(diǎn)狀出血，心肌有白色或淡黃色斑點(diǎn)或條紋，俗稱“虎斑心”。

五、診斷

根據(jù)流行病學(xué)，臨診癥狀和病例剖檢特點(diǎn)做出初步診斷，確診需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，實(shí)驗(yàn)室主要用ELISA法和免疫熒光抗體實(shí)驗(yàn)，隨著分子生物技術(shù)迅猛發(fā)展，核酶雜交技術(shù)，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和核酸序列分析的技術(shù)，使口蹄疫的診斷更加簡(jiǎn)便、快捷、特異和敏感。另外主要與水皰性口炎進(jìn)行鑒別診斷。

六、防控措施

1.加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，保持畜舍衛(wèi)生，經(jīng)常進(jìn)行消毒，打掃，減少機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)。

2.預(yù)防接種，對(duì)動(dòng)物每年春秋兩季進(jìn)行羊口蹄疫免疫接種，對(duì)檢測(cè)抗體達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)要求的進(jìn)行再次免疫。

3.糞便進(jìn)行堆積發(fā)酵處理，畜舍，場(chǎng)地。用具以2%～4%燒堿液，10%石灰乳，1%～2%福爾馬林噴灑消毒。

4.撲滅措施，一旦暴發(fā)本病，應(yīng)立即封燒，銷毀，深埋患病動(dòng)物，消滅病原，對(duì)疫區(qū)嚴(yán)格封鎖，消毒，危險(xiǎn)區(qū)緊急免疫接種，直到徹底消滅本病原微生物。

七、本區(qū)羊口蹄疫疫病免疫效果檢測(cè)和分析

綏德縣位于陜西省西北部，轄16個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，總面積1 828平方公里。按照綏德縣疫控中心組織實(shí)施一年春秋兩季集中滅疫和長(zhǎng)期補(bǔ)針免疫的工作方針，沒有發(fā)生重大疫情。目前全縣規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)有50多個(gè)，還有場(chǎng)戶正在投建之中。本研究主要針對(duì)本區(qū)羊口蹄疫疫病免疫抗體水平進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)價(jià)各個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)戶免疫效果。通過檢測(cè)和分析，進(jìn)一步摸清羊疫病防控情況，繼而提出合理建議，以期為本區(qū)羊口蹄疫疫病防護(hù)提出客觀依據(jù)。

（一）材料方法

本試驗(yàn)所用羊，均來自本區(qū)各養(yǎng)殖場(chǎng)戶。

1.樣品采集。在2014年秋季和2015年春季集中免疫后進(jìn)行隨機(jī)抽血采樣，分別從10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)20個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)戶采血，共采血1 000頭份，其中2014年500份，2015年500份。

2.疫苗基本情況?？谔阋撸嚎谔阋逴型、亞洲I型二價(jià)滅活疫苗，含毒量達(dá)到國(guó)家要求標(biāo)準(zhǔn)。肌肉注射，每只1ml，免疫期4～6個(gè)月。企業(yè)名稱金宇保靈生物藥品有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)獸藥生字（2014）050157053。冷藏保存，運(yùn)輸。

3.主要器材和試劑。塑料采血管，冰箱，恒溫培養(yǎng)箱，離心機(jī)，烘干機(jī)，工作臺(tái)，血凝版，試管，緩沖鹽水，陰性、陽(yáng)性對(duì)照血清，口蹄疫血凝抗原。

（二）方法

1.通過頸靜脈采血，對(duì)采血部位消毒后，用注射器采血約3 ml，離心，分離血清，妥善保存，貼標(biāo)簽，冷凍保存。

2.檢測(cè)方法:羊口蹄疫用口蹄疫正向間接血凝試驗(yàn)。

（三） 結(jié)果

對(duì)2014年、2015年本區(qū)羊口蹄疫免疫效果檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，統(tǒng)計(jì)結(jié)果見下表。從試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，本次檢測(cè)共抽檢羊養(yǎng)殖場(chǎng)戶20個(gè)，最低合格率為72.7%，最高合格率為94.7%。不同規(guī)模羊場(chǎng)的口蹄疫抗體合格率差異較大，但合格率均超過70%，符合國(guó)家相關(guān)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。

羊場(chǎng) 2014 2015樣本數(shù) 合格數(shù) 合格率 樣本數(shù) 合格數(shù) 合格率1 12 10 0.833 11 9 0.818 2 23 19 0.826 21 17 0.810 3 9 8 0.889 9 8 0.889 4 13 11 0.846 10 8 0.800 5 36 33 0.917 38 36 0.947 6 35 33 0.943 35 33 0.943 7 38 36 0.947 37 34 0.919 8 30 27 0.900 29 26 0.897 9 28 24 0.857 28 24 0.857 10 15 13 0.867 15 13 0.867 11 18 15 0.833 17 14 0.824 12 17 14 0.824 17 14 0.824 13 36 33 0.917 36 33 0.917 14 9 8 0.889 10 8 0.800 15 8 7 0.875 8 7 0.875 16 50 45 0.900 55 52 0.945 17 53 46 0.867 60 56 0.933 18 29 26 0.896 38 35 0.921 19 30 27 0.900 14 11 0.785 20 11 8 0.727 12 10 0.833合計(jì) 500 443 0.886 500 448 0.896

（四）討論

1.本區(qū)羊口蹄疫疫病抗體合格率變化趨勢(shì)。2014年、2015年口蹄疫合格率分別為88.6%，合格率為89.6%，合格率都超過了我國(guó)農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%的標(biāo)準(zhǔn)，反映出了本區(qū)近幾年來對(duì)羊主要疫病防控上工作扎實(shí)，成效顯著。其中，口蹄疫抗體合格率較上年提高了1.0個(gè)百分點(diǎn)，與畜牧獸醫(yī)部門強(qiáng)化防疫監(jiān)督、加強(qiáng)技術(shù)引導(dǎo)有關(guān)，從價(jià)格市場(chǎng)行情看，養(yǎng)殖者增加防疫投入等因素有關(guān)系?？谔阋咭卟〉目贵w合格率達(dá)到了國(guó)家要求，但整體合格率還需要進(jìn)一步提高，仍需要引起高度重視。

2.免疫失敗原因探討。在實(shí)地試驗(yàn)、調(diào)查過程中，我們發(fā)現(xiàn)雖然各養(yǎng)殖場(chǎng)戶羊疫病抗體合格率達(dá)到了國(guó)家相關(guān)要求，但仍有個(gè)別養(yǎng)殖場(chǎng)戶整體合格率偏低，存在疫苗免疫失敗的問題。在資金投入上造成了一定浪費(fèi)的同時(shí)，也增加了患病的可能。分析原因可能有以下幾種情況。

（1）免疫程序不合理。調(diào)查過程中發(fā)現(xiàn)，有的養(yǎng)殖戶認(rèn)為口蹄疫預(yù)防一次并不能達(dá)到保護(hù)作用，故經(jīng)常在規(guī)范注射疫苗后一個(gè)月內(nèi)二次注射口蹄疫疫苗，并未檢測(cè)抗體，便再次加強(qiáng)注射一次、甚至數(shù)次，致使之前的免疫抗體與后來的疫苗發(fā)生中和，影響了免疫效果?；驊{借個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，對(duì)羔羊注射過量的疫苗，導(dǎo)致疫苗與母源抗體發(fā)生中和，增加了感染疫病的風(fēng)險(xiǎn)。另外，疫苗注射方法不當(dāng)。例如，在疫苗注射操作上不規(guī)范，將疫苗注射到了脂肪層或皮下后誘發(fā)過敏反應(yīng)，從而影響了疫苗的使用效果。

（2）疫苗管理操作不規(guī)范。疫病防控部門對(duì)強(qiáng)制免疫疫苗的管理有非常嚴(yán)格、規(guī)范的制度和要求。通過調(diào)查，本區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、各鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站都能嚴(yán)格按照相關(guān)制度要求，規(guī)范領(lǐng)用、發(fā)放疫苗，但基層部分養(yǎng)殖者和少數(shù)村級(jí)防疫員對(duì)疫苗管理粗放，常常運(yùn)輸、保管、使用不規(guī)范，少注或不注射，甚至長(zhǎng)期暴露在陽(yáng)光下，影響了疫苗質(zhì)量，降低了疫苗效價(jià)；加之操作過程中，注射劑量不足、不注射或過量注射，均可能造成免疫失敗。

（3）羊只健康水平低下。羊只的健康狀況會(huì)對(duì)免疫應(yīng)答產(chǎn)生重要影響。若羊體質(zhì)虛弱、營(yíng)養(yǎng)條件不良，自身免疫功能會(huì)降低，從而降低免疫效果。另外，部分養(yǎng)殖場(chǎng)戶局限于個(gè)人經(jīng)濟(jì)利益，有時(shí)故意隱瞞病情，導(dǎo)致健康狀況不好，加大了疫病防控監(jiān)管的壓力。

（4）消毒不嚴(yán)格。一些小型養(yǎng)羊場(chǎng)沒有供飼養(yǎng)員和外來人員消毒的設(shè)備，甚至連消毒池也沒有，更別說紫外線消毒房，無害化處理措施也沒有，糞便自然隨意擺放，消毒也是走個(gè)過程，一個(gè)注射器和針頭連續(xù)使用，一群羊就一個(gè)針頭，幾種疫苗也就一個(gè)針頭，而且還不能嚴(yán)格清洗消毒。注射部位從來就不消毒，致使免疫低下。

（五）需要采取的預(yù)防措施

1.提高認(rèn)識(shí)，加強(qiáng)宣傳。疫病傳播途徑廣泛，故在疫病防控上，全國(guó)各養(yǎng)殖場(chǎng)戶、各地區(qū)不能各自為戰(zhàn)。首先，政府和畜牧主管部門要充分認(rèn)識(shí)動(dòng)物疫病防控的重要性，堅(jiān)持做好動(dòng)物疫病防控和流行病學(xué)調(diào)查、日常監(jiān)測(cè)，嚴(yán)把疫苗采購(gòu)關(guān)；其次，必須強(qiáng)化動(dòng)物疫病防控宣傳，使群眾深刻認(rèn)識(shí)疫病對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的危害性和防控措施，充分發(fā)動(dòng)群眾，共同防控疫病。

2.規(guī)范程序，科學(xué)免疫。堅(jiān)持疫苗免疫是防控疫病的首要有效手段，免疫接種疫苗是激發(fā)動(dòng)物機(jī)體對(duì)某種傳染病發(fā)生特異性抵抗力，使其從易感轉(zhuǎn)為不易感的一種手段。要嚴(yán)格強(qiáng)制免疫，提高免疫密度；在本地區(qū)有疫情時(shí)適當(dāng)加大免疫劑量尤為重要。要加強(qiáng)免疫技術(shù)研究和總結(jié)，根據(jù)當(dāng)?shù)匾卟×餍星闆r，及時(shí)監(jiān)測(cè)抗體水平，提高免疫針對(duì)性。要抓好春秋兩個(gè)季節(jié)的普防，并不斷完善現(xiàn)行免疫程序，制定科學(xué)、規(guī)范、具有針對(duì)性的本地免疫程序，絕不照搬其他鄰縣大養(yǎng)殖場(chǎng)戶的免疫程序，以便能提高免疫效果。

3.嚴(yán)格引種，強(qiáng)化監(jiān)督。畜牧獸醫(yī)監(jiān)管部門要依據(jù)相關(guān)法規(guī)加強(qiáng)監(jiān)督，養(yǎng)殖場(chǎng)戶引進(jìn)種畜時(shí)，要選擇非疫區(qū)的地方引進(jìn)，嚴(yán)格檢疫，防止疫情傳入。對(duì)新引進(jìn)的羊只必須按要求隔離觀察，一個(gè)月后若健康再混群飼養(yǎng)。對(duì)發(fā)生疫情的場(chǎng)戶，必須進(jìn)行隔離，禁止調(diào)出；對(duì)于病死羊只，嚴(yán)格進(jìn)行無害化處理，防止隨意拋灑、亂扔，杜絕因病害畜引起疫情的發(fā)生，及時(shí)補(bǔ)免。

4.科學(xué)管理，綜合防控。疫病的預(yù)防必須在科學(xué)飼養(yǎng)管理的基礎(chǔ)上建立健全防疫衛(wèi)生制度，要嚴(yán)格執(zhí)行防疫程序，加強(qiáng)衛(wèi)生管理，定期消毒，嚴(yán)防病原傳入。要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，盡量做到全進(jìn)全出，從而把交叉感染的機(jī)率降到最低。不使用污染和霉變的飼料或原料。規(guī)范投入品管理，防止濫用藥、亂用藥損傷免疫系統(tǒng)。可以適當(dāng)運(yùn)用保健中藥，減少藥物和各種毒素對(duì)羊只的毒副作用。每季度還要定期驅(qū)蟲一次,剪毛后進(jìn)行1次藥浴,目的是消滅體外寄生蟲和預(yù)防疥癬病。另外，疫病經(jīng)常出現(xiàn)混合感染或者繼發(fā)感染其他疾病，在臨床上應(yīng)全面考慮，特別是繼發(fā)細(xì)菌性疾病，常常會(huì)增加疾病治療的難度。一定要綜合考慮,正確判斷,并及時(shí)采取措施。

八、結(jié)論

1.對(duì)本區(qū)口蹄疫疫病免疫效果進(jìn)行的檢測(cè)，結(jié)果表明，2014、2015年口蹄疫疫苗免疫抗體合格率為72.7.%～94.7%。

2.羊疫病疫苗免疫抗體檢測(cè)結(jié)果說明，本區(qū)所抽檢口蹄疫疫苗免疫抗體合格率達(dá)到了國(guó)家規(guī)定的要求，但畜禽的抗體的整體合格率還需進(jìn)一步提高，綜合防控措施有待進(jìn)一步提高。

（略）