蜂膠類黃酮對糖尿病合并肺結(jié)核患者外周血WBC與T淋巴細(xì)胞亞群的影響

魏高文，魏歆然，裴 異，肖作為，朱 旭，劉蕓青，陳 書，裴 蕓*

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410208；2.長沙市中心醫(yī)院，湖南 長沙 410004)

蜂膠類黃酮對糖尿病合并肺結(jié)核患者外周血WBC與T淋巴細(xì)胞亞群的影響

魏高文1，魏歆然1，裴 異2，肖作為1，朱 旭1，劉蕓青1，陳 書1，裴 蕓1*

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410208；2.長沙市中心醫(yī)院，湖南 長沙 410004)

目的 探討蜂膠類黃酮對糖尿病合并肺結(jié)核（diabetes mellitus complicated with pulmonary tuberculosis,DM-PTB）患者外周血中WBC與T淋巴細(xì)胞亞群的影響。方法 以DM-PTB患者120人為對象，利用隨機(jī)數(shù)字表采用完全隨機(jī)法分成A（蜂膠黃酮1 000 mg/d）、B（蜂膠黃酮2 000 mg/d）、C（條件對照）三組，每組 40人，觀察 6個月，比較綜合治療前后白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）及分類（淋巴細(xì)胞L和中性粒細(xì)胞N）、T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+數(shù)量及CD4+/CD8+比值的變化，并比較組內(nèi)前后差異和組間差異。結(jié)果 三組7項(xiàng)觀測指標(biāo)自身前后配對差值（治療后-治療前）的均數(shù)比較Hotelling T2＝515.359，P＝0.000；治療7項(xiàng)觀測指標(biāo)差別Wilks λ=0.017，P＝0.000，其中多重比較結(jié)果為WBC的B組大于A與C組，L的B組>A組>C組，N的B組大于A與C組，CD3+的B 與A組大于C組，CD4+的B組>A組>C組，CD4+/CD8+比值多重比較結(jié)果為B 與A組大于C組。結(jié)論 蜂膠類黃酮能提高DM-PTB患者的細(xì)胞免疫水平。

蜂膠類黃酮；DM-PTB；WBC；T淋巴細(xì)胞亞群；細(xì)胞免疫

糖尿病(diabetes mellitus，DM)已成為繼心腦血管疾病、惡性腫瘤之后的另一種嚴(yán)重危害人民健康的慢性非傳染性疾病[1]。長期的高血糖可導(dǎo)致CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、B 細(xì)胞、NK 細(xì)胞顯著性減低，機(jī)體免疫功能下降，從而引起肺結(jié)核、腎病等并發(fā)癥的發(fā)生[2]。糖尿病合并肺結(jié)核（diabetes mellitus complicated with pulmonary tuberculosis,DM-PTB）是指集糖尿病和肺結(jié)核于一身的綜合病癥，是導(dǎo)致肺結(jié)核治療失敗最常見的因素之一[3-4]。蜂膠中包含300多種已知的物質(zhì)，其主要有效成份為類黃酮等[5]，一般說明書上以類黃酮標(biāo)注為有效成份，其具有抗菌消炎、增強(qiáng)免疫、改善微循環(huán)、抗氧化、促進(jìn)組織再生等廣泛的生物學(xué)作用[6-9]。本課題的研究，旨在探討蜂膠類黃酮對DM-PTB患者的細(xì)胞免疫水平的影響，為臨床應(yīng)用提供參考。

1 研究對象

1.1 一般資料

以2014年1月到2015年12月期間來長沙市中心醫(yī)院就診的DM-PTB患者120人為對象，其中男性62人，女性 58人，平均年齡56.3歲，最小42歲，最大72歲。利用隨機(jī)數(shù)字表采用完全隨機(jī)法分成A、B、C三組，每組40人，各組治療前的年齡、性別差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(以P＞0.20為均衡可比)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

肺結(jié)核的診斷依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會結(jié)核病學(xué)分會2013年修訂的《肺結(jié)核診斷和治療指南》進(jìn)行［10］，糖尿病的診斷依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會制定的《中國血糖監(jiān)測臨床應(yīng)用指南(2011 年版)》［11］。 對所有符合條件的DM-PTB患者進(jìn)行宣傳教育，在充分了解本研究的前提下，自愿接受本研究治療方案的治療及檢測，簽署《知情同意書》后方納入研究。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

符合下列條件之一者排除出研究對象：（1）廣泛耐藥肺結(jié)核（XDR-PTB）患者；（2）合并 HIV 感染者；（3）肝功能異常者（AST、ALT 超過正常上限 1.2倍） 或HbsAg、HbeAg和HbcAg 同時陽性者；（4）慢性腎病及腎功能異常者；（5）合并有心腦血管、腎臟、造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病，消化道潰瘍病，或影響其生存的嚴(yán)重疾?。ㄈ缒[瘤）；（6）對試驗(yàn)方案西藥治療藥物過敏或?qū)χ兴帍?fù)方中藥物過敏者；（7）妊娠、準(zhǔn)備妊娠或哺乳期婦女；（8）精神或法律上的殘疾患者。

1.4 退出（脫落）病例標(biāo)準(zhǔn)

因以下原因未完成臨床方案的入組病例應(yīng)視為脫落（脫落的病例應(yīng)詳細(xì)記錄原因）：（1）患者自行退出（療效太差、不良反應(yīng)等）；（2）失訪；（3）研究者令其退出（依從性差、出現(xiàn)夾雜癥、嚴(yán)重不良事件）。

2 研究方法

2.1 治療方法

2.1.1 常規(guī)臨床治療 對所有DM-PTB患者全程督導(dǎo)短程化學(xué)治療(directly observed treatment shortcourse，DOTS)， 初治痰涂片陽性者用 2H3R3Z3S3／4H3R3方案，其中鏈霉素過敏者予2H3R3Z3E3／4H3R3方案，初治痰涂片陰性者予2H3R3Z3／4H3R3方案，復(fù)治痰涂片陽性者予2H3R3Z3E3S3／6H3R3E3方案，其中鏈霉素過敏者用3H3R3Z3E3S3／6H3R3E3，所有病例均給予降糖治療，采用控制飲食、適當(dāng)運(yùn)動，對空腹血糖 7.0～11.1 mmol/L 者予口服降糖藥 (二甲雙胍、格列齊特或格列吡嗪等)，空腹血糖超過11.1 mmol/L者予早期正規(guī)使用小劑量(12～60 U/d)短效胰島素，待癥狀控制后，胰島素逐步減量，直至停用，后改為口服降糖藥［11-13］。

2.1.2 治療分組 蜂膠黃酮低劑量組(A組)：在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上輔以低劑量蜂膠黃酮口服，蜂膠軟膠囊購自浙江康恩貝集團(tuán)規(guī)格為500 mg/粒，服用1 000 mg/d，連續(xù)觀察6個月；蜂膠黃酮常規(guī)劑量組(B組)：在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上輔以高劑量蜂膠黃酮口服，標(biāo)準(zhǔn)為2 000 mg/d(廠家推薦劑量)，連續(xù)觀察6個月；對照組(C組)：常規(guī)臨床治療，輔以口服不含蜂膠黃酮的純化水軟膠囊，連續(xù)觀察6個月，作為試驗(yàn)條件對照。

2.2 觀測指標(biāo)

所有入選病例均在治療前空腹抽取外周靜脈血液各測定一次白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)及分類（淋巴細(xì)胞L與中性粒細(xì)胞 N）、T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值，治療結(jié)束（6 個月）時再次檢測上述觀測指標(biāo)。

2.3 檢驗(yàn)方法

血常規(guī)檢查試劑異硫氰酸（FITC）熒光抗體抗CD3+、CD4+、CD8+，藻紅蛋白（PE）熒光抗體抗 CD3+購于美國 Pharmingen公司，均為小鼠抗人IgG抗體。檢測 CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴細(xì)胞使用美國 BD公司FACS calibur流式細(xì)胞儀，用美國雅培公司全自動血細(xì)胞分析儀檢測 WBC及L與N，用直接免疫熒光標(biāo)記法檢測外周血淋巴細(xì)胞亞群，并用流式細(xì)胞儀配套軟件（cell quest）分析各樣本1×104個細(xì)胞中淋巴細(xì)胞各亞群陽性表達(dá)率。每個樣本都以FITC和PE標(biāo)記同型 IgG作為相應(yīng)的陰性對照。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本研究所獲得的數(shù)據(jù)應(yīng)用Epidata軟件建立數(shù)據(jù)庫，采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件對資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本次研究所獲取資料為計(jì)量資料，采用“±s”描述，組內(nèi)多變量治療前后配對比較采用Hotelling T2檢驗(yàn)，三組間比較采用單因素方差分析或多元方差分析（MANO-VA）［14］。

3 結(jié)果

3.1 三組白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類的變化

三組治療前與治療6個月結(jié)束時，各空腹抽取外周靜脈血測定白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)及分類（淋巴細(xì)胞L與中性粒細(xì)胞N），三組3項(xiàng)觀測指標(biāo)自身前后配對差值 （治療后-治療前）的均數(shù)，Hotelling T2＝515.359，P＝0.000，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明治療后均有所提高；治療后3項(xiàng)觀測指標(biāo)比較，Wilks λ=0.017，P＝0.000，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，為 B 組高于A、C組，結(jié)果如表1所示。

表1三組DM-PTB患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類的變化 （±s，×109/L)

表1三組DM-PTB患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類的變化 （±s，×109/L)

注：與同組治療前比較，*P＜0.05；與對照組（C 組）比較，＃P＜0.05。

組別 n治療前WBC L N治療后WBC L N ABC 39 37 39 3.83±0.53 3.87±0.50 3.91±0.59 0.96±0.13 0.95±0.14 0.94±0.15 2.69±0.38 2.74±0.34 2.77±0.41 5.08±0.56*＃6.76±0.49*＃4.90±0.61*1.71±0.16*＃2.27±0.14*＃1.52±0.20*3.16±0.37*＃4.23±0.34*＃3.23±0.39*

3.2 三組T淋巴細(xì)胞亞群平均百分比及CD4+/CD8+比值的變化

三組治療前與治療6個月結(jié)束時，各空腹抽取外周靜脈血測定T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+平均百分比及CD4+/CD8+比值，以小數(shù)來表達(dá)。三組4項(xiàng)觀測指標(biāo)自身前后配對差值 （治療后-治療前）的均數(shù)比較，Hotelling T2＝515.359，P＝0.000，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明治療后均有所提高；三組治療后3項(xiàng)觀測指標(biāo)差別 Wilks λ=0.001，P＝0.000，A、B 組治療后3項(xiàng)觀測指標(biāo)高于C組，結(jié)果如表2所示。

表2三組DM-PTB患者T淋巴細(xì)胞亞群平均百分比及CD4+/CD8+的比值變化 （±s，%)

表2三組DM-PTB患者T淋巴細(xì)胞亞群平均百分比及CD4+/CD8+的比值變化 （±s，%)

注：與同組治療前比較，*P＜0.05；與對照組（C 組）比較，＃P＜0.05。

組別 n治療前CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+治療后CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ABC 39 37 39 47.42±6.60 47.46±5.88 48.52±7.28 20.30±4.10 20.25±2.97 20.71±4.12 25.67±3.01 26.02±3.36 26.39±3.60 0.79±0.11 0.78±0.09 0.78±0.10 61.38±6.84*＃64.86±5.88*＃59.74±7.96*32.09±452*＃34.69±4.65*＃23.93±3.96*27.87±3.41*28.67±2.39*27.82±2.97*1.16±0.15*＃1.22±0.16*＃0.86±0.12*

4 討論

本次研究初始納入120例患者，試驗(yàn)過程中共脫落失訪5例，最終納入分析數(shù)據(jù)集的病例數(shù)為115例，其中 A 組 39例（男 21、女 18）、B組 37例（男 18、女 19）、C 組 39 例（男 20、女 19），三組性別構(gòu)成差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0.205，P＝0.902），治療前7項(xiàng)觀測指標(biāo)均滿足方差齊性（P>0.20），差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.20），說明三組間均衡可比。

蜂膠是由工蜂采集植物樹脂與其上顎腺、蠟腺等的分泌物混合形成的膠黏性物質(zhì)，是一種傳統(tǒng)的天然藥物，在歐洲的應(yīng)用歷史已有兩千多年?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》中記載的“露蜂房”，其主要成分是蜂蠟、蜂膠和蜂房油3種，具有“主治驚疾、寒熱邪氣、癲疾、腸痔”的作用。20世紀(jì)90年代以來，我國開始對蜂膠的成分、性質(zhì)、藥理和臨床應(yīng)用等進(jìn)行了大量研究，蜂膠產(chǎn)品的開發(fā)應(yīng)用得到了迅猛的發(fā)展，蜂膠現(xiàn)已收載于《中華人民共和國藥典》2010年版一部。

胸腺依賴性淋巴細(xì)胞（T細(xì)胞）是淋巴細(xì)胞的主要組分，具有殺傷靶細(xì)胞、輔助或抑制B細(xì)胞產(chǎn)生抗體、對特異性抗原的應(yīng)答反應(yīng)以及產(chǎn)生細(xì)胞因子等多種生物學(xué)功能，是身體中抵御疾病感染、腫瘤形成的“斗士”。1982年以來，國際上根據(jù)分化群抗原（CD抗原）已經(jīng)命名了CD1-CD166共180個分化抗原群，其中CD4和CD8是區(qū)分成熟T細(xì)胞亞群的主要表面標(biāo)志。

研究結(jié)果表明，三組治療前、后白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類3項(xiàng)觀測指標(biāo)自身前后配對差值（治療后-治療前）的均數(shù)差別有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且各組3項(xiàng)觀測指標(biāo)95%CI均>0，說明治療后各組3項(xiàng)觀測指標(biāo)均值較治療前均有提高,其中WBC均值分析的B組高于A與 C組，L均值多重比較結(jié)果為B組最高、A組其次、C組最低，N數(shù)的多重比較結(jié)果為B組高于A與 C組。這一結(jié)果提示蜂膠黃酮可改善DM-PTB患者外周血白細(xì)胞總數(shù)。三組觀察對象T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量治療后與治療前的均數(shù)差值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且各組 3 項(xiàng)觀測指標(biāo) 95%CI均>0，說明治療后各組3項(xiàng)觀測指標(biāo)均值較治療前均有提高；與治療前比較治療后患者T細(xì)胞總數(shù)、T細(xì)胞亞群及其CD4+/CD8+比值三組間3項(xiàng)觀測指標(biāo)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中CD3+T的多重比較結(jié)果 B 組、A 組均高于C組，CD4+T的多重比較結(jié)果B組最高、A組其次、C組最低；三組間CD8+的差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;CD4+/CD8+比值自身前后配對差值的均數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），各組 CD4+/CD8+比值自身前后配對差值的均數(shù)95%CI均>0，治療后各組CD4+/CD8+比值均有提高（P＜0.05）；三組治療后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示：蜂膠黃酮能提高患者外周血中T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+的比例，提升患者機(jī)體的抗結(jié)核菌能力。

肺結(jié)核合并糖尿病患者的體內(nèi)存在復(fù)雜的微環(huán)境，影響T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)揮其功能，使其保護(hù)性的免疫力降低［15］。由于蜂膠類黃酮具有較強(qiáng)的清除自由基和抗氧化能力，具有一定的抗炎功效，能有效抑制炎癥因子的生成，緩解炎癥對細(xì)胞造成的傷害［4-6］。因此，在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上輔以高劑量蜂膠類黃酮口服，有助于控制血糖、消除炎癥，對PTB-DM患者的細(xì)胞免疫水平具有增強(qiáng)作用，從而提高綜合療效。

本課題的研究結(jié)果表明，蜂膠黃酮1 000 mg/d，連續(xù)服用6個月，可以提升T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+的比例，蜂膠黃酮2 000 mg/d時，可顯著改善白細(xì)胞計(jì)數(shù)總數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+的比例及 CD4+/CD8+比值，說明蜂膠類黃酮對DM-PTB患者的細(xì)胞免疫水平具有增強(qiáng)作用，其機(jī)制值得進(jìn)一步探討。

[1]羅美莊，魏高文，黃丹丹，等.蜂膠軟膠囊輔助綜合干預(yù)對糖尿病高危人群生命質(zhì)量的影響[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008，15(6)：1969-1970.

[2]劉 偉，呂曉紅，錢東華.糖尿病合并肺結(jié)核患者外周血白細(xì)胞及T 細(xì)胞亞群的變化[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2011，15(5)：918-919.

[3]L.Guariguata,D.R.Whiting，I.Hambleton,et al.Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035[J].Diabetes Research and Clinical Practice,2014,1(3):137-149.

[4]宋 韜，李 莉.血糖水平對肺結(jié)核合并2型糖尿病療效的影響[J].臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)雜志，2016，3(5)：793-796.

[5]王 凱，張江臨，胡福良.蜂膠抗炎活性及其分子機(jī)制研究進(jìn)展[J].中草藥，2013,44(16)：2321-2329.

[6]魏高文，馮務(wù)群，夏曉凱，等.蜂膠軟膠囊對小鼠糖尿病預(yù)防作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2007，14(2)：530-531.

[7]Satman I,Omer B,Tutuncu Y,et al.Twelve-year trends in the prevalence and risk factors of diabetes and prediabetes in Turkish adults[J].Eur J Epidemiol， 2013，28(2):169-180.

[8]李雅晶，茹建甫.蜂膠桑葉復(fù)合片對 2型糖尿病病人糖脂代謝的調(diào)節(jié)作用[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（36）：20611-20613.

[9]Wenying Yang,Juming Lu,Jianping Weng,et a1.Prevalence of diabetes among men and women in China［J］.The New England Journal of Medicine， 2010，362(12)：1090-l101.

[10]中華醫(yī)學(xué)會結(jié)核病學(xué)分會.肺結(jié)核診斷和治療指南[J].中國實(shí)用鄉(xiāng)村醫(yī)生雜志，2013，20(2)：7-11.

[11]中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會.中國血糖監(jiān)測臨床應(yīng)用指南(2011年版)[J].中華糖尿病雜志，2011，1(3)：13-20.

[12]鄧澤強(qiáng)，陳玉蘭，吳榮輝，等.肺結(jié)核合并糖尿病患者的臨床治療探討—附 151 例報(bào)告[J].新醫(yī)學(xué)，2012，43（7）：492-494.

[13]劉建春，杜敬華，王曉軍，等.胸腺肽在糖尿病合并肺結(jié)核患者中的應(yīng)用[J].臨床肺科雜志，2014，19（10）：1838-1841.

[14] 魏高文.衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2014：11.

[15]Uesugi N， Sakata N， Nangaku M， et a1.Possible mechanism for medial Smooth muscle cell injury in diabetic nephropathy；glycoxidation mediated local complement activation[J].Am J Kidney Dis， 2004，44(2)：224-238.

（本文編輯 李 杰）

Effect of Propolis Flavonoids on WBC and T lymphocyte Subsets in Peripheral Blood of Patients with Diabetes Mellitus Complicated with Pulmonary Tuberculosis

WEI Gaowen1,WEI Xinran1,PEI Yi2,XIAO Zuowei1,ZHU Xu1,LIU Yunqing1,CHEN Shu1,PEI Yun1*
(1.Hunan University of Chinese Medcine,Changsha,Hunan 410208,China;2.Changsha Central Hospital,Changsha,Hunan 410004,China)

ObjectiveTo investigate the effect of propolis flavonoids on the level of the WBC and T lymphocyte subsets in peripheral blood of patients with diabetes mellitus complicated with pulmonary tuberculosis(DM-PTB).MethodsThe 120 DM-PTB patients were randomly divided into group A (propolis flavonoids 1 000 mg/d),group B (propolis flavonoids 2 000 mg/d),group C(control),40 cases in each group.The WBC count and classification (lymphocyte L and neutrophil N),T lymphocyte subsets CD3+,CD4+,CD8+and CD4+/CD8+ratio in within and between groups were compared.ResultsThe 7 sets of indicators before and after the treatment in the three groups were compared,Hotelling T2＝515.359， P＝0.000.The 7 sets of indicators after treatment were tested,Wilks λ=0.017，P＝0.000.Multiple comparison results showed that WBC:group A>group B and group C,L:group B>group A>group C,N:group B>group A and group C,CD3+:group A and B>group C,CD4+:group B>group A>group C,CD4+/CD8+ratio:group A and B>group C.Conclusion Propolis flavonoids can enhance the cellular immunity of DM-PTB patients.

propolis flavonoids;WBC;T lymphocyte subsets;cellular immunity

R932；R521；R587.1

B

doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2017.08.019

2016-09-17

湖南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（14JJ2112）。

魏高文，男，教授，主要研究方向?yàn)橹形麽t(yī)結(jié)合防治糖尿病。

*裴 蕓，女，講師，E-mail:758090368@qq.com。

本文引用：魏高文，魏歆然，裴 異，肖作為，朱 旭，劉蕓青，陳 書，裴 蕓.蜂膠類黃酮對糖尿病合并肺結(jié)核患者外周血WBC與T淋巴細(xì)胞亞群的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，37（8）：891-894.