氣相色譜法測(cè)定紅花軟膠囊中亞油酸的含量〔1〕

翟曉茹，李永東，張紅兵，張燕

(中國(guó)輻射防護(hù)研究院，山西 太原 030006)

藥學(xué)研究

氣相色譜法測(cè)定紅花軟膠囊中亞油酸的含量〔1〕

翟曉茹，李永東，張紅兵，張燕*

(中國(guó)輻射防護(hù)研究院，山西 太原 030006)

目的：建立紅花軟膠囊中亞油酸含量的檢測(cè)方法。方法：色譜柱為固定液88%二氰丙基聚硅氧烷(60 m×0.25 mm，0.20 μm)，檢測(cè)器為氫焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)器溫度280 ℃，進(jìn)樣口溫度250 ℃，柱溫控制采用程序升溫，以140 ℃為起始柱溫，保持5 min，以4 ℃/min升溫至240 ℃，保持15 min。載氣為氮?dú)?，載氣流速：1.0 mL/min，分流比為30∶1。結(jié)果：用亞油酸甲酯作對(duì)照，其線性范圍0.270 5～5.403 3 mg/mL，γ=0.999 8，平均回收率為97.02%(RSD=1.3%，n=9)。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、靈敏高、重現(xiàn)性好，可用于紅花軟膠囊中亞油酸含量的測(cè)定。

紅花軟膠囊；氣相色譜；亞油酸

紅花軟膠囊是以紅花提取物、紅花籽油為主要成分的軟膠囊制劑，具有輔助降血脂、提高缺氧耐受力的功能。紅花提取物是以菊科植物紅花Carthamus tinctorius L.為原料，經(jīng)過加水煎煮、濃縮、干燥而來。紅花中含有黃酮類物質(zhì)、有機(jī)酸、色素、甾醇、多糖等，其中黃酮類化合物是最主要的化學(xué)成分，而總黃酮又是黃酮類化合物中的有效成分。文獻(xiàn)報(bào)道，紅花具有抗凝血、抗血栓、抗炎、抗氧化等功效；同時(shí)能夠解除血管平滑肌的痙攣，從而改善組織缺氧狀態(tài)并增強(qiáng)耐缺氧能力[1-4]。紅花籽油為紅花的果實(shí)經(jīng)榨取精制而得到的脂肪油，主要含有亞油酸、亞麻酸、維生素E等，其中亞油酸含量達(dá)80%，有“亞油酸之王”的稱號(hào)[5-8]。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，紅花籽油具有明顯的降低動(dòng)物血清脂質(zhì)的功效，具有能顯著降低高脂血癥大鼠的血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平，提高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平；另外還具有降血壓、抗血栓、抗炎、抗動(dòng)脈硬化等作用[9-12]。因此，紅花軟膠囊中的主要指標(biāo)性成分確定為總黃酮、亞油酸。目前，關(guān)于紅花軟膠囊中總黃酮的含量測(cè)定已有報(bào)道。而關(guān)于亞油酸的含量測(cè)定都是用GC法基于油脂類物質(zhì)中的含量測(cè)定，關(guān)于紅花軟膠囊中的亞油酸含量測(cè)定，尚未見報(bào)道。因此，本研究以亞油酸作為研究對(duì)象，采用氣相色譜法考察紅花軟膠囊中亞油酸含量的測(cè)定方法。本研究參照《GB5413.27-2010嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測(cè)定》的要求及相關(guān)文獻(xiàn)[13-17]，建立了紅花軟膠囊中亞油酸含量的檢測(cè)方法，以更好地控制紅花軟膠囊的生產(chǎn)過程及成品的內(nèi)在質(zhì)量。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

SP-3240A氣相色譜儀(北京北分瑞利)；MS204S萬分之一天平(梅特勒)；MS105DU十萬分之一天平(梅特勒)；紅花軟膠囊(自制，規(guī)格：每粒0.5 g，批號(hào)：11100801、11100901、11101001)；亞油酸甲酯對(duì)照品(中國(guó)生物制品鑒定所，批號(hào)：111625-200502)；正己烷、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜條件：色譜柱(安捷倫，固定液100%二氰丙基聚硅氧烷，60 m×0.25 mm，0.20 μm)，檢測(cè)器溫度280 ℃，進(jìn)樣口溫度250 ℃，柱溫控制采用程序升溫，以140 ℃為起始柱溫，保持5 min，以4 ℃/min升溫至240 ℃，保持15 min。載氣為氮?dú)?，載氣流速：1.0 mL/min，分流比為30∶1。分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液1.0 μL，進(jìn)樣，以色譜峰面積定量。

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取亞油酸甲酯對(duì)照品270.5 mg，置10 mL容量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

1.2.3 供試品溶液的制備

精密稱取紅花軟膠囊內(nèi)容物1.0 g，加入65 ℃的水10 mL，溶解后，加入2 mL氨水，置65 ℃水浴中15 min，輕搖，放至室溫。加入10 mL乙醇，混勻。加入25 mL乙醚，振搖1 min。加入25 mL石油醚，加塞振搖1 min，靜置分層后，取上層液體。重復(fù)3 次，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干。向殘?jiān)屑尤?.0 mL焦性沒食子酸甲醇溶液，濃縮至干，向殘?jiān)屑尤?0 mL氫氧化鉀甲醇溶液，置80℃水浴上回流25 min，并于回流10 min時(shí)加入5 mL三氟化硼甲醇溶液。冷卻至室溫。將液體轉(zhuǎn)移至離心管中，用飽和氯化鈉清洗3 次，每次3 mL，合并清洗液至離心管中，加入10 mL正己烷，搖勻后，離心5 min，取上清液，即得供試品溶液。

1.3 空白干擾試驗(yàn)

分別取正己烷(不含亞油酸甲酯對(duì)照品)和經(jīng)正己烷稀釋的亞油酸甲酯對(duì)照品溶液，照“1.2.1項(xiàng)”色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，記錄色譜圖。

1.4 方法學(xué)考察

1.4.1 線性考察

分別精密吸取亞油酸甲酯儲(chǔ)備液0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL至10 mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，作為亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作液。將各亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作液照“1.2.1項(xiàng)”，在氣相色譜儀上分別進(jìn)樣3次，以濃度為橫坐標(biāo)、平均峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。

1.4.2 精密度考察

精密吸取同一濃度的對(duì)照品溶液，照“1.2.1項(xiàng)”色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6 次，計(jì)算亞油酸甲酯峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。

1.4.3 重現(xiàn)性考察

取同一批號(hào)紅花軟膠囊(11100901)的內(nèi)容物1g，按“1.2.3項(xiàng)”的方法制備供試品溶液6份，并照“1.2.1項(xiàng)”色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算6 份供試品溶液的亞油酸甲酯峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.4.4 穩(wěn)定性考察

取同一批號(hào)紅花軟膠囊(11100901)的內(nèi)容物1g，按“1.2.3項(xiàng)”制備供試品溶液，密閉置于室溫條件下放置，分別于0、12、24、36、48 h，照“1.2.1項(xiàng)”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算亞油酸甲酯峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.4.5 回收率試驗(yàn)

精密稱取同一批次樣品9份，分別加入一定量的亞油酸對(duì)照品，按“1.2.3項(xiàng)”方法操作，制備加樣回收供試液，每個(gè)質(zhì)量濃度配制3 份(相當(dāng)于處方量的80%、100%、120%)，并依法測(cè)定，計(jì)算其回收率、平均回收率及RSD值。

1.5 樣品測(cè)定

分別取3批紅花軟膠囊內(nèi)容物1 g，精密稱定，按“1.2.3項(xiàng)”方法操作，制備供試品溶液，各精密吸取1 μL，連續(xù)進(jìn)樣2次，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。以相對(duì)峰面積，計(jì)算樣品中亞油酸的含量。

2 結(jié) 果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

制得的亞油酸甲酯對(duì)照品貯備液濃度為27.05 mg/mL，亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為0.270 5、0.540 3、1.350 8、2.701 7、5.403 3 mg/mL。

2.2 空白干擾實(shí)驗(yàn)

分別取正己烷(缺亞油酸甲酯對(duì)照品的陰性對(duì)照品)和經(jīng)正己烷稀釋的亞油酸甲酯對(duì)照品溶液，照“1.2.1項(xiàng)”色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，色譜圖顯示，陰性樣品溶液在29～31 min處無任何峰。亞油酸甲酯對(duì)照品溶液在30.1 min處有明顯的峰。結(jié)果表明陰性樣品無干擾，該色譜條件可用于定量分析。進(jìn)樣圖譜見圖1。

2.3 方法學(xué)考察

以不同濃度的亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作液，進(jìn)樣。得回歸方程y=61 408x+21 133，R=0.999 8。結(jié)果表明，亞油酸甲酯在0.270 5～5.403 3 mg/mL，線性良好。精密度、重現(xiàn)性及穩(wěn)定性考察的亞油酸甲酯峰面積的RSD均<3%，表明儀器精密度良好，該方法重現(xiàn)性較好，供試品溶液在48h內(nèi)較為穩(wěn)定?；厥章试囼?yàn)平均值為97.02%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.3%(n=9)，說明以此方法測(cè)定紅花軟膠囊中亞油酸的含量，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠(見表1)。

2.4 樣品測(cè)定

三批紅花軟膠囊中亞油酸含量均>30%(見表2)，樣品色譜圖見圖2。

A 正己烷色譜圖 B 亞油酸甲酯對(duì)照品

表1 亞油酸回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討 論

紅花軟膠囊是由紅花提取物、紅花籽油等配比制備而成，配方中紅花籽油達(dá)70%。紅花籽油中主要含亞油酸，因此將亞油酸作為紅花軟膠囊質(zhì)量控制的指標(biāo)之一。本試驗(yàn)考察了固定液為88%二氰丙基聚硅氧烷60 m×0.25 mm，0.20 μm；100 m×0.25 mm，0.20 μm兩個(gè)規(guī)格的色譜柱。用上述兩個(gè)色譜柱，進(jìn)行紅花軟膠囊中亞油酸的含量測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：亞油酸甲酯在兩個(gè)色譜柱中的出峰時(shí)間一致，紅花軟膠囊中亞油酸的含量測(cè)定結(jié)果基本一致。60 m色譜柱約55 min即可完成一個(gè)樣品的測(cè)定，100 m色譜柱約105 min可完成一個(gè)樣品的測(cè)定，100 m色譜柱較60 m色譜柱的測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)。為縮短樣品測(cè)試時(shí)間、節(jié)約試驗(yàn)成本，故選擇60 m×0.25 mm，0.20 μm規(guī)格的色譜柱即可滿足本試驗(yàn)的要求。

圖2 紅花軟膠囊樣品色譜圖

表2 紅花軟膠囊中亞油酸的含量測(cè)定結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)對(duì)柱溫的不同升溫速率進(jìn)行了考察。在檢測(cè)器溫度、進(jìn)樣口溫度、初始柱溫保持不變的條件下，柱溫控制采用程序升溫：以140 ℃為起始柱溫，以4 ℃/min升溫至240 ℃，以140 ℃為起始柱溫，以10 ℃/min升溫至240 ℃。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：以4 ℃/min的升溫速率，可以將組分實(shí)現(xiàn)較好分離，不拖尾，且保留時(shí)間適宜。本試驗(yàn)主要研究了紅花軟膠囊中亞油酸的含量測(cè)定方法，在測(cè)定過程中，參照《GB5413.27-2010嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測(cè)定》及相關(guān)文獻(xiàn)的檢測(cè)方法，確定了色譜條件，并對(duì)測(cè)定方法進(jìn)行了方法學(xué)考察。結(jié)果表明：本方法可靠、重現(xiàn)性好，可以作為紅花軟膠囊中亞油酸含量的測(cè)定方法；同時(shí)，確定紅花軟膠囊中主要指標(biāo)成分亞油酸的含量≥30%。

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Content determination of linoleic acid in safflower soft caplsule by gas chromatograp

ZHAI Xiaoru，LI Yongdong，ZHANG Hongbing，ZHANG Yan

(China Institute for Radiation Protection，Taiyuan 030006，China)

Objective：To establish the gas chromatograph method for quantitative determinate of linoleic acid in safflower soft caplsule.Methods：A column of 88% two cyanopropyl polysiloxane (60 m×0.25 mm，0.20 μm)was used.The FID was used as a detector，the temperature of the detector was 280 ℃.The injection port temperature was 250 ℃.The column temperature was controlled by temperature programming to 140 ℃ as a starting column，holded 5 min，with 4 ℃/min heated to 240 ℃，holded 15min，nitrogen was used an carrier gas，the flow rate was 1.0 mL/min，the splitting ratio was 30∶1.Results：The linear range of linoleum acid was 0.270 5～5.4033 mg/mL(r= 0.999 8)，the average recovery was 97.02%( RSD=1.3%，n=9).Conclusion：This GC method was accurate，sensitive and reproducible for the determination of safflower linoleic acid content in soft capsules.

safflower soft caplsule；gas chromatograp；linoleic acid

1671-8631(2017)06-0460-05

〔1〕本項(xiàng)目為新疆少數(shù)民族醫(yī)藥現(xiàn)代化專項(xiàng)課題(項(xiàng)目編號(hào)：200733146-1)

*本文通訊作者：張燕

R735.1

B

2016-10-09

(本文編輯：張紅)

翟曉茹(1982— )，女，陜西省富平縣，碩士學(xué)位，助理研究員。研究方向：藥品質(zhì)量管理及標(biāo)準(zhǔn)化研究。