不同廠家試劑盒檢測大鼠血清中堿性磷酸酶活性的比較

李 紅, 余儒洋, 李 疆, 施嘉琛

(1. 北京市疾病預(yù)防控制中心/北京市預(yù)防醫(yī)學(xué)研究中心, 北京100013;

2. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 (學(xué)生), 北京100083)

不同廠家試劑盒檢測大鼠血清中堿性磷酸酶活性的比較

李 紅1, 余儒洋2, 李 疆1, 施嘉琛1

(1. 北京市疾病預(yù)防控制中心/北京市預(yù)防醫(yī)學(xué)研究中心, 北京100013;

2. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 (學(xué)生), 北京100083)

目的 比較兩個廠家生產(chǎn)的堿性磷酸酶(ALP)試劑檢測大鼠血清是否存在差異，開展大鼠血清ALP活性的檢測。方法 用國際臨床化學(xué)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(IFCC)推薦的連續(xù)監(jiān)測法，兩個廠家生產(chǎn)的ALP試劑同時測定大鼠血清。 結(jié)果 兩個廠家的ALP試劑檢測大鼠血清差異極顯著(P<0.01)。結(jié)論 兩個廠家的ALP試劑均可開展大鼠血清檢測工作，要分別建立實(shí)驗(yàn)室的參考范圍，如果動物實(shí)驗(yàn)采用實(shí)驗(yàn)前后比較時，中間過程不能更換試劑的廠家。

堿性磷酸酶; 比對試驗(yàn); 大鼠血清

堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)存在于成骨細(xì)胞、白細(xì)胞、肝細(xì)胞、脾、腎、胎盤、前列腺和小腸內(nèi)，血清中的ALP具有四種結(jié)構(gòu)亞型: 肝-骨-腎型、小腸型、胎盤型和胚細(xì)胞型的變異體，其中肝-骨-腎型最為重要。兒童和青少年在骨骼成長時成骨細(xì)胞增加導(dǎo)致ALP活性會生理性升高, 甲狀旁腺功能亢進(jìn)、Paget病、佝僂病和骨軟化病等骨骼疾病，阻塞性黃疸、膽汁郁積都會使ALP病理性升高[1]。諸多動物實(shí)驗(yàn)研究中，準(zhǔn)確檢測ALP的活性變化是重要研究依據(jù)[2-7]。在食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)28 d經(jīng)口毒性試驗(yàn)中也新增加了ALP活性的檢測，因此，建立正確的ALP檢測方法，對于相關(guān)動物實(shí)驗(yàn)具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

7600-日立全自動生化分析儀(日立高新技術(shù)有限公司，日本)，儀器設(shè)備在中國計(jì)量科學(xué)研究院進(jìn)行年檢，檢定合格，且檢測過程在檢定期內(nèi)。

1.2 試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控血清

廠家1: ALP試劑、酶校準(zhǔn)品和多項(xiàng)質(zhì)控品均由WaKo(和光純藥工業(yè)株式會社，日本)提供。ALP試劑R1: 4×49 mL，R2: 4×15 mL; 酶校準(zhǔn)品批號: DR134，規(guī)格4×3 mL; 多項(xiàng)質(zhì)控品1批號: EK476，規(guī)格10×5 mL; 質(zhì)控品2批號：EK477，規(guī)格10×5 mL。廠家2: ALP試劑、酶校準(zhǔn)品和多項(xiàng)質(zhì)控品均由DiaSys[德賽診斷系統(tǒng)(上海)有限公司, 德國]提供。試劑貨號: 14104101001,包裝規(guī)格R1: 2×80 mL，R2: 2×20 mL; 酶校準(zhǔn)品TruLab U貨號: 591009910063，包裝規(guī)格: 20× 3 mL; 多項(xiàng)質(zhì)控品TruLab N貨號: 590009910061，包裝規(guī)格：6×5 mL; 多項(xiàng)質(zhì)控品TruLab P貨號：590509910061，包裝規(guī)格：6×5 mL。

1.3 血樣

本中心實(shí)驗(yàn)室送檢Wistar大鼠血清66例，采集腹主動脈血樣室溫放置30 min，600A BAIYANG離心機(jī)，1 500×g，10 min離心分離血清。清潔級大鼠(雌雄各半)，體質(zhì)量雌性168～216 g，雄性189～299 g，6～8 周齡。由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供[SCXK(軍) 2012-0004]。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 實(shí)驗(yàn)條件 進(jìn)行儀器設(shè)備的常規(guī)維護(hù)保養(yǎng)，在P模塊上分別建立分析參數(shù)，兩個廠家的試劑都是液體雙試劑均可直接使用，在37 ℃條件下，選用速率A法, 主波長405 nm、副波長505 nm，連續(xù)監(jiān)測吸光度的上升速率(Δ A/min)，吸光度增高速率計(jì)算ALP活性, 大鼠樣本血清為4.0 mL，WaKo試劑R1是160 mL，試劑R2是40 mL，選用24到34測光點(diǎn)。DiaSys試劑R1是200 mL，試劑R2是50 mL，選用21到31測光點(diǎn)。

1.4.2 校準(zhǔn)程序 酶校準(zhǔn)品為凍干粉狀, 小心打開瓶蓋。在酶校準(zhǔn)品中準(zhǔn)確加入3.0 mL離子交換水或者蒸餾水后，輕輕顛倒使其完全溶解混合均勻，復(fù)溶后保存于2～8℃可使用3 d。在P模塊上執(zhí)行兩點(diǎn)定標(biāo)程序。

1.4.3 質(zhì)量控制程序 在多項(xiàng)質(zhì)控品中準(zhǔn)確加入5.0 mL(或者用稱重法)離子交換水或者蒸餾水后，輕輕顛倒混合使其完全溶解分裝保存，可放置在質(zhì)控位或者是常規(guī)標(biāo)本位置檢測。

1.4.4 樣品檢測 執(zhí)行兩點(diǎn)定標(biāo)程序通過后, 首先檢測兩個廠家提供的質(zhì)控血清，再同時對66例大鼠血清進(jìn)行ALP檢測，質(zhì)控血清放置在常規(guī)標(biāo)本后再檢測。ALP結(jié)果計(jì)算(U/L)=樣品(ΔA/min)/校準(zhǔn)(Δ A/min)×校準(zhǔn)品活性(U/L)。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

全部實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果直接由生化分析系統(tǒng)輸出,數(shù)據(jù)使用SPSS 20.0軟件包進(jìn)行配對t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)處理; P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

多項(xiàng)質(zhì)控品檢測結(jié)果均在1個標(biāo)準(zhǔn)差以內(nèi)，使用兩個廠家試劑檢測大鼠血清ALP結(jié)果差異極顯著(P<0.01)(表1)。兩個廠家試劑測定大鼠血清ALP活性結(jié)果的線性回歸方程Y=1.0228x+0.635，相關(guān)系數(shù)r=0.9994, r2=0.9988。

表1 大鼠血清中ALP的檢測結(jié)果

3 討論

WaKo和DiaSys多項(xiàng)質(zhì)控血清檢測結(jié)果均在1個標(biāo)準(zhǔn)差以內(nèi)，符合室內(nèi)質(zhì)量控制要求，可以用于檢測大鼠血清ALP活性。兩個廠家生產(chǎn)的試劑檢測大鼠血清ALP結(jié)果相關(guān)性良好，但差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，應(yīng)分別建立實(shí)驗(yàn)室的參考范圍。生化檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性在動物實(shí)驗(yàn)中至關(guān)重要，使用的儀器設(shè)備、試劑以及工作人員的責(zé)任心對檢測結(jié)果都有很大影響[8～10]。實(shí)驗(yàn)組和對照組，實(shí)驗(yàn)動物結(jié)果前后比較時要使用同一檢測方法同一廠家生產(chǎn)的試劑，中間不能更換。遇到試劑批間差異大時，為確保一致性應(yīng)使用同一批號試劑，從而保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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Q95-33

C

1674-5817(2017)03-0222-02

10.3969/j.issn.1674-5817.2017.03.010

2016-11-15

李 紅(1968-), 女, 本科, 副主任技師。主要從事生化分析工作。E-mail: benlih@sina.com