血液及尿液巨細胞病毒DNA檢測在嬰兒肝炎綜合征中的應(yīng)用分析

毛睿哲 封其華

·技術(shù)應(yīng)用·

血液及尿液巨細胞病毒DNA檢測在嬰兒肝炎綜合征中的應(yīng)用分析

毛睿哲 封其華

目的檢測嬰兒肝炎綜合征患者血液HCMV-DNA及尿液HCMV-DNA,比較兩者是否存在統(tǒng)計學差異。方法選取189例嬰兒肝炎綜合征的患者作為研究對象，通過熒光探針-PCR方法檢測其血液及尿液HCMV-DNA。結(jié)果189例嬰兒肝炎綜合征病例中，感染HCMV者共79例，占樣本總數(shù)的41．8%。79例HCMV感染患兒中，從尿液中檢出HCMV-DNA者共68例，占所有HCMV感染者的86．1%；從血液中檢出HCMV-DNA者共71例，占所有HCMV感染者的89．9%。兩者比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。結(jié)論尿液標本可以作為嬰兒肝炎綜合征患者合并HCMV感染的標本來源，具有重要診斷價值。

嬰兒肝炎綜合征；人巨細胞病毒脫氧核糖核酸；尿液；血液

嬰兒肝炎綜合征以肝細胞性黃疸、肝腫大及質(zhì)地異常和肝損傷為特征[1]。其病因復(fù)雜，合并癥或并發(fā)癥多，預(yù)后情況各不相同，嚴重者可出現(xiàn)肝硬化、肝昏迷、肝腎綜合征，甚至死亡[2-3]。本文將通過對嬰兒血液HCMV-DNA檢測及尿液HCMV-DNA檢測進行比較，討論兩種類型的標本在嬰兒肝炎綜合征中的診斷是否存在統(tǒng)計學差異。

1 材料及方法

1.1 研究對象

選取我院自2013年1月—2016年12月收治的嬰兒肝炎綜合征患兒189例作為研究對象。所有病例均符合嬰兒肝炎綜合征診治修訂方案[4]，其中男102例、女87例，年齡為1～12個月，平均年齡（3.8±0.5）個月。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集及儀器 （1）血液標本采集：采取嬰兒肝炎綜合征患者空腹時血液3 ml，并置于EDTA-K2抗凝管內(nèi)，充分混勻；（2）尿液標本采集：采集嬰兒肝炎綜合征患者晨尿10 ml于干燥滅菌玻璃管內(nèi)。所有標本均立刻送檢。（3）分析儀器及試劑：Roche LightCycler 489型熒光PCR儀及其配套HCMV-DNA檢測試劑盒。

1.2.2 標本處理 （1）血液標本處理：EDTA-K2抗凝血經(jīng)4 000 rpm離心10分鐘后，取上層血漿100 μl，加入等體積的濃縮液，12 000 rpm離心5分鐘，棄去上清液，加入50 μl核酸釋放劑，用槍頭挑起沉淀，吸打若干次，將沉淀打散混勻，作為待測樣本備用；（2）尿液標本處理：取1 ml樣本，12 000 rpm離心5分鐘，棄去上清液后加入50 μl核酸釋放劑，與沉淀震蕩或移液槍吸打混勻，作為待測樣品備用。

1.2.3 標本分析 標本處理完成后，將標本置于PCR反應(yīng)管內(nèi)，設(shè)定陰性及陽性對照，并加入到Roche LightCycler 489擴增儀樣品槽內(nèi)，按本實驗室SOP繼續(xù)進行標本檢測及分析程序，記錄各標本檢測結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理，計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗，以P0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)果統(tǒng)計

患兒的血液及尿液標本中均檢測出HCMV-DNA，見表1。

2.2 數(shù)據(jù)分析

189例嬰兒肝炎綜合征患者感染HCMV者共79例，占樣本總數(shù)的41.8%。79例HCMV感染患兒中，從尿液中檢出HCMVDNA者共68例，占所有HCMV感染者的86.1%；從血液中檢出HCMV-DNA者共71例，占所有HCMV感染者的89.9%。兩者比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

3 討論

嬰兒肝炎綜合征的病因及發(fā)病機制較多[5-6]，HCMV病原體檢測是鑒別嬰兒肝炎綜合征發(fā)病原因的重要篩檢要素。目前，臨床上已廣泛開展血液及尿液的HCMV-DNA檢測，用以診斷嬰兒HCMV感染及鑒別嬰兒肝炎綜合征的病因。此樣本研究過程中，仍然存在11例尿液HCMV-DNA陰性，但血液HCMV-DNA陽性的病例。從嬰兒的生長發(fā)育規(guī)律來看，這可能是由于嬰兒腎功能發(fā)育不全，尿液濃縮功能不全，導(dǎo)致尿液中病毒含量較低[7]。而在平時的尿液HCMV-DNA常規(guī)檢測過程中，也存在某些尿液標本取自于補液后，或刻意給予嬰兒飲水或飲奶后采集的尿液作為檢測標本的情況。這些尿液的比密通常比晨尿低，病毒成分被稀釋，以至于其含量低于儀器檢測底限，而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果[8-9]。因此，若采用尿液檢測HCMV-DNA，其結(jié)果為陰性時，不能完全排除HCMV感染，需采集血液進行HCMV-DNA檢測，以免漏診。在平時的日常檢測過程中，針對尿液HCMV-DNA檢測，建議使用晨尿進行檢驗，而不提倡采用補液后尿液，或經(jīng)刻意飲水或飲奶后排泄的尿液作為檢測標本。

綜上所述，血液HCMV-DNA檢測與尿液HCMV-DNA檢測均有助于嬰兒肝炎綜合征病因的鑒別及排除，而尿液標本取材較血液標本方便，更值得在臨床上推廣。

表1 嬰兒肝炎綜合征患者尿液HCMV-DNA及血液HCMV-DNA指標比較

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[2]李凡，劉晶星．醫(yī)學微生物學[M]．7版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：302-303．

[3]楊波，李剛，孫正蕓，等．嬰肝綜合征HCMV感染臨床與肝功能損害相關(guān)性研究[J]．醫(yī)學理論與實踐，2001，14（6）：482-485．

[4]朱啟镕，王曉紅，王建設(shè)．嬰兒肝病綜合征診治修訂方案[J]．中華傳染病雜志，2004，22（5）：357．

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[6]方峰，董永綏．診治巨細胞病毒感染時應(yīng)注意的幾個問題[J]．中國實用兒科雜志，2000，15（2）：86．

[7]王敬衍，程麗敏，錢冬萌，等．不同標本巨細胞病毒DNA檢測在小兒巨細胞感染中的應(yīng)用[J]．世界最新醫(yī)學信息文摘（連續(xù)型電子期刊），2016，16（80）：131-132．

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Analysis of the Application of Cytomegalovirus DNA Test in Blood and Urine for Infantile Hepatitis Syndrome

MAO Ruizhe FENG Qihua Department of Clinical Laboratory, Children's Hospital Aff i liated to Suzhou University, Suzhou Jiangsu 215003, China

ObjectiveTo detect the blood HCMV-DNA and urine HCMVDNA in infants with hepatitis syndrome, and to compare whether there is statistical difference between them.MethodsThe blood and urine HCMVDNA of 189 infants with hepatitis B syndrome were detected by fl uorescent probe -PCR.ResultsIn the 189 infants with hepatitis syndrome, 79 were infected with HCMV, accounting for 41.8% of the total sample. In the 79 infants with HCMV infection, 68 cases were detected from urine, accounting for 86.1% of all HCMV infections. 71 cases of HCMV-DNA were detected in the blood, accounting for 89.9% of all HCMV infected patients. The difference was not statistically significant between urine HCMV-DNA test and blood HCMV-DNA test, P＞0.05.ConclusionUrine specimen can be used as the source for detect HCMV infection in infants with hepatitis syndrome. And this has important diagnostic value.

infant hepatitis syndrome; integrated DNA of human cytomegalovirus; urine; blood

R725

A

1674-9308（2017）13-0066-02

10．3969/j．issn．1674-9308．2017．13．034

蘇州大學附屬兒童醫(yī)院檢驗科，江蘇 蘇州 215003

封其華