磷脂酰膽堿及膽汁酸鹽動物溶脂實驗研究*

郝 劍,劉 賓,李 菲, 韓 悅, 陶 諫

1.西安市中心醫(yī)院燒傷整形外科 (西安710003),2.西安醫(yī)學院護理學院(西安 710021)

磷脂酰膽堿及膽汁酸鹽動物溶脂實驗研究*

郝 劍1,劉 賓1△,李 菲2, 韓 悅1, 陶 諫1

1.西安市中心醫(yī)院燒傷整形外科 (西安710003),2.西安醫(yī)學院護理學院(西安 710021)

目的: 通過選用保脂妥(Lipostabil)、磷脂酰膽堿(PC)以及不同濃度脫氧膽酸鹽(DC)在動物體內(nèi)溶脂對照觀察，以探討其溶脂效果。方法:分別將1ml的Lipostabil、5%PC以及不同濃度DC注射到豚鼠皮下脂肪層，觀察注射后不同時間點，各組注射區(qū)皮膚外觀、皮下脂肪厚度、皮下脂肪組織病理學改變以及血清相關(guān)生化指標改變。結(jié)果： Lipostabil、5% PC以及1%～5% DC在動物體內(nèi)對于脂肪細胞均具有明顯的溶解破壞作用,且DC濃度越高，組織的炎性反應越強。結(jié)論：在合適的注射層次，1%濃度脫氧膽酸鹽在動物體內(nèi)具有較好的溶脂效果。

近年來，以消減局部皮下脂肪為目的的新型能源類(超聲、水動力吸脂)和注射類技術(shù)(Lipodissolve、間皮療法等)正在迅速得到研究和應用。注射溶脂是通過向皮下注射藥理活性(磷脂酰膽堿)制劑、生理清潔(膽汁鹽)制劑等對脂肪組織進行化學性燒蝕或破壞。在歐洲和美洲國家開展以來，因其創(chuàng)傷不、恢復快，操作簡單等優(yōu)點得到關(guān)注。近年來，隨著對注射溶脂的各項基礎(chǔ)研究的開展，這種方法或許會在不久的將來成為一種獲得各國許可的非手術(shù)脂肪組織不規(guī)則校正療法，為不愿意接受手術(shù)的患者提供適度脂肪消減治療。然而由于注射溶脂在多數(shù)國家并沒有得到相關(guān)法律的認可, 其缺乏標準化配方且安全性也備受爭議，因此國內(nèi)目前并未批準開展此項技術(shù)。在前期的體外實驗中，我們通過對目前最常用的注射溶脂藥保脂妥(Lipostabil)、磷脂酰膽堿(Phosphatidylcholine,PC)以及不同濃度脫氧膽酸鹽(Deoxycholate,DC)的體外對照觀察實驗，對其溶脂效果作用進行初步的觀察及探討。在接下來的實驗中，我們將保脂妥以及其有效成分磷脂酰膽堿和脫氧膽酸鹽在動物體內(nèi)的溶脂效果進行進一步的觀察與研究，對注射溶脂的可行性及安全性進行更深入的探討。

材料與方法

1 材 料 選用英國種Hartley純白豚鼠(第四軍醫(yī)大學動物中心提供)，Lipostabil(主要成分5%磷脂酰膽堿PC、4.75%脫氧膽酸鹽DC，法國 Aventis 公司)，5%PC及4．5%DC(美國 Sigma 公司), 全自動生化分析儀 7180(日本日立公司)。

2 方 法

2.1 實驗動物及分組：選用英國種Hartley純白豚鼠25只，雌雄各半，重量(200±30)g，隨機分為五組，每組5只。

2.2 試劑分組：A組: Lipostabil注射組 1ml；B組: 5%PC注射組1ml； C組:DC注射組1ml(1%DC,2%DC,3%DC,4%DC,5%DC )；空白對照組:生理鹽水1ml。

2.3 注射區(qū)域分組及觀察間隔：注射區(qū)域有：①(大體觀察、B超觀測、病理學檢查)肩部(A)、背部(B)、臀部(C)、對側(cè)為空白對照(D)；②(血清生化指標分析)各組均選擇臀部；注射深度為：脂肪層中間部位；分別于注射后12、48h、2、4、8、12周觀測各項相關(guān)指標。

3 觀察項目

3.1 大體觀察：于各個時間節(jié)點觀察注射局部皮膚及皮下大體狀況，有無紅腫、結(jié)節(jié)、潰破等。

3.2 B超檢測：于各個時間節(jié)點觀察注射溶脂藥物后局部皮下脂肪組織厚度的變化以及結(jié)節(jié)產(chǎn)生的情況。

3.3 病理學檢測：分別于注射后48h、4周及12周切取注射點及距注射點1 cm處全層組織，分別作HE染色，光鏡下進行病理學分析，觀察注射前后以及不同藥物注射后皮下脂肪及其相鄰組織的結(jié)構(gòu)變化。

3.4 相關(guān)血清生化指標分析：分別于藥物注射后48h及2周，采豚鼠心臟血約1ml,進行白細胞、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、甘油三酯、肌紅蛋白水平檢測。

結(jié) 果

1 溶脂藥物注射后局部皮膚形態(tài)觀察 A組注射Lipostabil，局部皮膚色澤全程無明顯改變，48h后注射區(qū)域出現(xiàn)輕度可見腫脹，2周后部分注射區(qū)皮膚增厚或可觸及小的硬結(jié)。B組注射5%PC，局部皮膚色澤全程無明顯改變，48h注射區(qū)域局部可見輕度腫脹，2周后部分注射區(qū)皮下可觸及小的硬結(jié)。C組注射4%和5%濃度DC后24h局部皮膚出現(xiàn)輕度紅腫，其余各濃度DC組注射局部皮膚色澤無改變及腫脹出現(xiàn)，2周后除各濃度DC組均有局部皮膚增厚或皮下結(jié)節(jié)出現(xiàn)。

2 B超檢測皮下組織的炎癥反應以及脂肪組織厚度變化 注射前實驗區(qū)域豚鼠皮下脂肪平均厚度為(9±1.08)mm,注射后各組藥物注射區(qū)皮下脂肪平均厚度為(6±0.98)mm，二者相比較有統(tǒng)計學差異。4～8周時間段各組注射區(qū)皮下B超均可探及數(shù)量不等結(jié)節(jié)，平均直徑約(3±0.67)mm(圖1)。

3 病理檢測 A組Lipostabil，B組5%PC，C組(1%～5%)DC注射后1周后皮下脂肪細胞均出現(xiàn)了明顯的皺縮、壞死以及大量淋巴細胞浸潤(其中淋巴細胞浸潤以4%，5%PC組尤為明顯)，脂肪細胞間隙可見泡沫樣細胞的出現(xiàn)，但血管等結(jié)構(gòu)清晰(圖2)；4周各組注射區(qū)域皮下組織淋巴細胞浸潤減少，大量脂肪細胞溶解伴多量泡沫樣細胞形成，鏡下可見多量纖維組織間隔產(chǎn)生(圖4)；8周左右注射區(qū)域皮下組織纖維細胞成分持續(xù)增加，脂肪細胞明顯融合減少(圖4)。4%DC，5%DC組部分標本皮下組織血管結(jié)構(gòu)出現(xiàn)破壞，部分管腔內(nèi)出現(xiàn)血栓(圖5)。

圖1 皮下脂肪層可見數(shù)個纖維結(jié)節(jié)

4 相關(guān)血清生化指標分析 注射后12h,48h及2周，各組白細胞、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、甘油三酯、肌紅蛋白水平檢測較正常對照組無明顯變化(48h與2周各生化指標結(jié)果相近，數(shù)值變化無明顯統(tǒng)計學差異)。注射后48h豚鼠血清生化指標檢查結(jié)果,見表1。

表1 不同溶脂成份注射后48h豚鼠血清生化指標的變化±s)

測試組白細胞(109/L)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(U/L)谷草轉(zhuǎn)氨酶(U/L)甘油三酯(mmol/L)肌紅蛋白(μg/L)Lipostabil3．29±1．0335．98±5．1869．73．±23．110．68±0．3219．28±2．345%PC4．04±1．1732．37±4．3975．24．±19．980．58±0．2320．45±3．211%DC3．87±1．2131．98±4．4571．88．±26．330．65±0．1917．69±1．992%DC4．32±0．9835．48±7．2779．75．±25．540．60±0．2722．64±2．673%DC3．92±1．1436．68±6．2880．86．±18．250．．66±0．3121．47±3．014%DC4．22±1．3133．13±5．7673．87±27．320．．57±0．2518．33±3．985%DC3．52±1．2437．29±8．3268．26．±24．470．54±0．2920．27±3．150．9%NaCl4．18±1．3633．13±5．7674．47±22．290．61±0．3817．98±4．01

注：各組各項與對照組(0.9%NaCl)比較，P>0.05

討 論

近年來，以消減局部皮下脂肪為目的的新型能源類(超聲、水動力吸脂)和注射類溶脂技術(shù)(Lipodissolve、間皮療法等)正在迅速得到研究和應用[1]。注射溶脂是通過向皮下注射藥理活性(磷脂酰膽堿)制劑、生理清潔(如膽汁鹽)制劑等對脂肪組織進行化學性燒蝕或破壞。目前在部分歐洲國家被許可用于脂肪組織化學性燒蝕或破壞的藥物主要是由法國Sanofi-Aventis公司生產(chǎn)的保脂妥(Lipostabil)。Lipostabil除了局部脂肪溶解，還被用于靜脈注射治療脂肪栓塞、血脂障礙和酒精性肝硬化等方面。

近年來，關(guān)于Lipostabil以及其主要成分磷脂酰膽堿(PC)、脫氧膽酸鹽(DC)局部消脂的研究報告大量涌現(xiàn)[2-7]，但許多研究對局部注射溶脂的臨床安全性也提出了很多質(zhì)疑[8]。在前面的體外試驗中，我們初步驗證了DC及Lipostabil均具有明確的體外脂肪細胞破壞作用，且DC的脂肪細胞破壞作用在一定范圍內(nèi)與其濃度無明顯正相關(guān)性[9]。

本研究的動物體內(nèi)溶脂實驗表明,Lipostabil，以脫氧膽酸鹽為溶媒的5%PC，1%～5%濃度的DC均具有明確的局部脂肪溶解和破壞作用。但注射部位的局部組織反應以及病理學檢查同時也提示：越高濃度的DC局部注射后的組織的炎性反應較Lipostabil和5%PC為重。這表明濃度越高，DC對于機體組織的炎癥誘導效應越強烈。該結(jié)論同時也在一定程度上驗證了前期實驗中我們關(guān)于PC可能具有對DC溶解脂肪組織進行乳化和消除的作用、可以減輕注射溶脂后常見副反應的推測。

B超以及組織病理學檢查顯示,注射Lipostabil、 5%PC、1%～5%濃度的DC后，局部的皮下脂肪層厚度變薄，注射區(qū)域脂肪細胞逐漸被增生的纖維組織所替代。組織學檢查同時也提示，如果注射層次深至肌肉或太淺至真皮，則有可能導致組織壞死以及血管栓塞。因此注射深度以及層次應該是局部注射溶脂最為關(guān)鍵的安全要素之一。

雖然對Lipostabil、PC，以及DC這類藥物的溶脂作用已有較多研究，但脂肪細胞在被溶解后的確切變化目前仍不清晰。75%以上的脂肪組織是甘油三酸酯，其被溶解破壞后是否會引血液內(nèi)甘油三酯的短期內(nèi)升高？此外，有研究表明經(jīng)皮下注射的PC或DC也會經(jīng)系統(tǒng)吸收，它們是否會引起肝功的一過性損害或者機體的全身炎癥反應？因此我們對于注射后不同時間節(jié)點的動物血樣標本進行了相關(guān)的血清生化學檢查。結(jié)果顯示在低劑量注射的前提下，豚鼠血清中相關(guān)生化指標與正常相比并未出現(xiàn)明顯變化，提示小劑量溶脂藥物本身以及局部溶脂后產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物對豚鼠機體無明顯的影響。

最新的研究顯示，標準濃度的Lipostabil多次注射即可能產(chǎn)生肌肉和血管組織壞死[10]。大劑量的PC或者DC局部吸收也可能導致胃腸不適而、輕度頭暈、出血等副反應。結(jié)合本實驗中的相關(guān)結(jié)果，我們認為在保證溶脂效果的前提下，低濃度、低劑量注射應該也是局部注射溶脂重要的安全要素之一。

可見，在合適的注射層次，1%濃度DC在動物體內(nèi)同樣具有較好局部溶脂效果。但其是否可以作為人體局部注射溶脂藥物的另外一種選擇，這將是要深入研究的問題。

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(收稿：2016-06-12)

*陜西省科技攻關(guān)項目(2012SF2-06)

磷脂酰膽堿類/藥物動力學 脫氧膽酸/藥物動力學 @溶脂 豚鼠

R392.5

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.07.007

△通訊作者