鳳仙花水提物對(duì)小鼠腹瀉抑制作用的研究

王惠國(guó)，湯紅翠，秦海宏，賈琳鈺，龍文月，馮寶民

（1．大連大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，遼寧 大連 116622；2．大連大學(xué) 醫(yī)學(xué)部，遼寧 大連 116622）

鳳仙花水提物對(duì)小鼠腹瀉抑制作用的研究

王惠國(guó)1，湯紅翠1，秦海宏2，賈琳鈺2，龍文月1，馮寶民2

（1．大連大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，遼寧 大連 116622；2．大連大學(xué) 醫(yī)學(xué)部，遼寧 大連 116622）

為研究鳳仙花水提物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃腸道平滑肌的影響并對(duì)鳳仙花的止瀉機(jī)制進(jìn)行探究。按照灌胃的方式給予小鼠番瀉葉煎劑誘導(dǎo)小鼠腹瀉模型，并根據(jù)觀察腹瀉潛伏期及腹瀉次數(shù)等指標(biāo)來評(píng)價(jià)鳳仙花水提物的止瀉作用；依次進(jìn)行小鼠的胃排空和小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)，通過觀察現(xiàn)象探討其可能的作用機(jī)制。結(jié)果表明鳳仙花水提物對(duì)番瀉葉煎劑所導(dǎo)致的小鼠泄瀉以及小鼠的小腸推進(jìn)和胃排空有對(duì)抗作用。說明鳳仙花水提物對(duì)小鼠腹瀉有抑制作用，其中鳳仙花水提物中可能具有止瀉成分，其止瀉機(jī)制之一為抑制腸胃運(yùn)動(dòng)。

鳳仙花；抗腹瀉；胃排空；小腸推進(jìn)

0 引言

鳳仙花為一年生的草本植物鳳仙花Impatiens balsamina L.的干燥花，以紅、白兩色入藥為最佳，夏季花盛開時(shí)采收晾干[1]。鳳仙花性味辛、苦、溫，目前尚未被《中國(guó)藥典》收載。目前研究發(fā)現(xiàn)鳳仙花中含有豐富的化學(xué)成分，主要為黃酮類、醌類、甾醇類、糖類、香豆素類等多種化學(xué)成分[2-8]。鳳仙花的食、藥用價(jià)值研究結(jié)果顯示：鳳仙花具有多種藥理作用，其主要性質(zhì)有抗炎鎮(zhèn)痛、抗菌、抗過敏、促透皮、抗癌、抗氧化等[9-18]。民間流傳鳳仙花有良好的止瀉效果，但其止瀉作用尚未見研究報(bào)道。據(jù)此，本實(shí)驗(yàn)擬探究鳳仙花的止瀉功效及可能的作用機(jī)制，為將其開發(fā)為腹瀉治療藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)采用潔凈級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的昆明種小鼠若干，雌雄小鼠數(shù)量各半，體質(zhì)量為25±5 g，由大連醫(yī)科大學(xué)提供。

1.2 藥物及試劑

實(shí)驗(yàn)所用鳳仙花、番瀉葉均購(gòu)自大連保健大藥房。

鳳仙花水提物的制備：采用浸漬法制備鳳仙花水提物，首先將提取液進(jìn)行抽濾，之后將濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，濃縮后配置成含有生藥的濃度為1 g/mL的藥液備用，用時(shí)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要配制相應(yīng)濃度。

番瀉葉煎劑的制備：稱取番瀉葉適量粉碎，置于燒杯中，加入適量蒸餾水，加熱至沸騰，并保持微沸15 min，濾過，將濾液于50℃以下進(jìn)行減壓濃縮，濃縮成濃度為1 g/mL的藥液，冷藏備用。

營(yíng)養(yǎng)半固體糊制作：稱取奶粉16 g，淀粉8 g，葡萄糖8 g，活性碳末3 g，將其混勻置于燒杯中，加入200 mL蒸餾水充分溶解，轉(zhuǎn)移至容量瓶中定容至300 mL，稍加熱至該混合物變稠，混勻冷卻后待用。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 鳳仙花水提物對(duì)番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響[19,20]

取實(shí)驗(yàn)小鼠60只，體重25±5 g，隨機(jī)分為6組。將小鼠分為空白組、實(shí)驗(yàn)組、模型組和陽(yáng)性組，實(shí)驗(yàn)組又分為高劑量、中劑量、低劑量組。除空白對(duì)照組外，其余各組分別灌胃給予鳳仙花水提物低劑量(1 g/kg)、中劑量(5 g/kg)和高劑量(10 g/kg)，陽(yáng)性組于造模完成后進(jìn)行灌胃，根據(jù)小鼠體重給予思密達(dá)混懸液(2 g/kg)，模型組小鼠灌胃給予適量蒸餾水，給藥體積均為0.2 mL/10g體重。30 min后，分別灌胃給予番瀉葉煎劑(1 g/mL，0.2 mL/10g)，將小鼠用500 mL燒杯單獨(dú)罩在鋼絲網(wǎng)上，并在鋼絲網(wǎng)下方一定距離處放置一層潔凈濾紙。每隔一定時(shí)間換取一次墊紙，觀察并記錄小鼠灌服番瀉葉煎劑后的便數(shù)、稀便數(shù)、腹瀉潛伏期以及4 h內(nèi)的腹瀉指數(shù)。通過稀便級(jí)來表示稀便程度，并根據(jù)周氏法確定稀便級(jí)。干、稀便的區(qū)分：濾紙上有污跡為稀便，濾紙上無污跡為干便。級(jí)數(shù)直徑的測(cè)量：污跡形狀為圓形直接測(cè)量直徑，形狀為橢圓形或者不規(guī)則形狀則測(cè)量其最長(zhǎng)以及近似圓的直徑長(zhǎng)度。級(jí)數(shù)判斷標(biāo)準(zhǔn)如下1：污跡直徑＜1 cm、2：1～1.9 cm、3：2～3 cm、4：＞ 3 cm。稀便率為稀便數(shù)與總便數(shù)的百分比。腹瀉指數(shù)(DI)為稀便率與稀便級(jí)的乘積。每1 h換1次濾紙，連續(xù)觀察4 h。

通過觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，并由表1可見，與空白對(duì)照組相比，其余各組均可見稀便排出，說明腹瀉模型造模成功。各劑量組的鳳仙花提取液對(duì)番瀉葉煎劑所導(dǎo)致的小鼠泄瀉有顯著抑制作用，其表現(xiàn)在使小鼠腹瀉潛伏期延長(zhǎng)和在等時(shí)間內(nèi)的累積腹瀉指數(shù)降低等方面，并且有一定的量效關(guān)系。

表1 鳳仙花對(duì)番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響

2.2 鳳仙花水提物對(duì)正常小鼠胃排空和小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響[21-24]

取實(shí)驗(yàn)小鼠50只，雌雄各半，體重25±5 g，隨機(jī)分成5組，分別灌胃給予小鼠低劑量、中劑量、高劑量的鳳仙花水提物，陽(yáng)性組灌胃給予每只小鼠思密達(dá)混懸液，空白組灌胃給予同劑量的蒸餾水，給藥量均為0.2 mL/10 g體重。1h后按照0.8 mL/只的劑量灌胃給予每組小鼠營(yíng)養(yǎng)性半固體糊0.8 mL/只。30 min后用頸椎脫臼法處死小鼠，打開小鼠腹腔，分別將胃賁門和幽門結(jié)扎后，摘取胃部，用干凈濾紙將摘取的胃部擦干后稱全重，之后剖開小鼠胃體，將摘取的胃部洗干凈再次稱凈重。胃內(nèi)殘留物重量=胃全重－胃凈重，胃內(nèi)殘留率=胃內(nèi)殘留物/所灌半固體糊×100%。同時(shí)將實(shí)驗(yàn)小鼠小腸用鑷子輕輕剝離出，剝離后將小腸直鋪于干凈的白紙上，測(cè)量小腸幽門到回盲腸部全長(zhǎng)和幽門到黑色半固體糊前端的距離。小腸推進(jìn)率為幽門到黑色半固體糊前端的距離與幽門到回盲部全部長(zhǎng)度的百分比。

通過對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的觀察以及由表2數(shù)據(jù)可見，各劑量組的鳳仙花提取液對(duì)正常小鼠的胃排空和腸推進(jìn)均有一定的對(duì)抗作用，并且兩者之間有量效關(guān)系，高劑量組的鳳仙花水提物對(duì)正常實(shí)驗(yàn)小鼠的腸推進(jìn)有明顯的抑制作用。

表2 鳳仙花對(duì)正常小鼠胃排空小腸推進(jìn)的影響( x±s)

3 討論

腹瀉是一種可由多種疾病引起的普遍可見的癥狀，其程度輕者無明顯影響，重癥腹瀉可引起脫水現(xiàn)象和體內(nèi)電解質(zhì)紊亂等，因此，當(dāng)面對(duì)有腹瀉癥狀的患者，在明確病因進(jìn)行診斷的同時(shí)，應(yīng)適當(dāng)給予止瀉藥物，從而盡快的緩解癥狀，減少對(duì)患者的傷害以及并發(fā)癥的發(fā)生[25,26]。由此可見，治療腹瀉的藥物的研究對(duì)防治腹瀉有著極其重要的意義。鳳仙花民間常以水煎劑形式給藥用于治療腹瀉，且療效確切。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鳳仙花水提物對(duì)番瀉葉所致的小鼠腹瀉有明顯的抑制作用，表現(xiàn)在給藥組小鼠腹瀉潛伏期延長(zhǎng)和在相同時(shí)間內(nèi)的稀便數(shù)減少；通過對(duì)比胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率，可以看出鳳仙花水提物對(duì)正常小鼠的胃排空和小腸推進(jìn)有明顯的抑制作用。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步證明了鳳仙花水提物具有一定的止瀉作用，且鳳仙花水提物抑制胃腸運(yùn)動(dòng)為其止瀉機(jī)制之一。

在止瀉實(shí)驗(yàn)中，改良了傳統(tǒng)代謝籠收集糞便的方法，采取了用500 mL燒杯把小鼠單個(gè)罩于鋼絲網(wǎng)上，網(wǎng)下1 cm放置濾紙，與傳統(tǒng)止瀉實(shí)驗(yàn)的代謝鼠籠中觀察相比較，該操作更為方便，不僅排除了動(dòng)物間實(shí)驗(yàn)干擾，而且避免了動(dòng)物活動(dòng)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，使得潛伏期計(jì)時(shí)和濕糞數(shù)記數(shù)也更為準(zhǔn)確。在進(jìn)行胃腸運(yùn)動(dòng)的實(shí)驗(yàn)中，通過在營(yíng)養(yǎng)性半固體糊中加入少量炭末作為標(biāo)示物，這種方法與傳統(tǒng)使用單純墨汁溶液相比，能更接近反映藥物對(duì)胃腸生理機(jī)能的影響，還避免了墨汁混合胃液后過稀，容易導(dǎo)致在體外測(cè)量腸管中墨汁推進(jìn)時(shí)隨著腸管的移動(dòng)而繼續(xù)流動(dòng)，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

在我國(guó)，鳳仙花主要分布于西南地區(qū)，藥用資源十分豐富，但仍然是一種尚未完全開發(fā)利用的天然植物資源[27,28]。本研究對(duì)鳳仙花抗腹瀉作用的研究，不僅為其臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)也為鳳仙花的開發(fā)利用提供借鑒。

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Experimental Research on the Antidiarrheal Effect in Mice of theImpatiens BalsaminaAqueous Extract

WANG Hui-guo1, TANG Hong-cui1, QIN Hai-hong2, JIA Lin-yu2, LONG Wen-yue1, FENG Bao-min2
(1. College of Life Science and Technology, Dalian University, Dalian 116622, China; 2. College of Medicine, Dalian University, Dalian 116622, China)

To study the effects of aqueous extract ofImpatienson gastrointestinal smooth muscle of experimental animals and explore the antiperspirant mechanism ofImpatiens. The model of mice diarrhea induced by senna.According to the diarrhea period, the frequency of diarrhea and other indicators to evaluate the anti-diarrhea effect of theImpatiens Balsaminaaqueous extract. Using Gastric emptying and small intestinal propulsion experiments to discuss the possible mechanism of anti-diarrhea effect of theImpatiens Balsamina. The results showed thatImpatiens Balsaminaaqueous extract can treat senna induced diarrhea in mice by inhibiting the intestinal propulsion in mice and gastric emptying. It showed thatImpatiens Balsaminaaqueous extract had an inhibitory effect on diarrhea in mice, which may have anti diarrhea ingredients in the extract ofImpatiens, the inhibition of gastrointestinal motility is one of its antidiarrheal mechanism.

Impatiens Balsamina; antidiarrheal; gastric emptying; small intestinal propulsion

R285.5

A

1008-2395(2017)03-0048-03

2017-03-14

遼寧省教育廳項(xiàng)目（L2016）；國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（30972675）。

王惠國(guó)（1978-），女，副教授，博士，研究方向：免疫學(xué)、藥理學(xué)。