膀胱尿路上皮癌中Klotho和Ki-67的表達(dá)及其相關(guān)性

陸浩源 白先忠 唐 勇

(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院泌尿外科，廣西 南寧 530001)

膀胱尿路上皮癌中Klotho和Ki-67的表達(dá)及其相關(guān)性

陸浩源 白先忠 唐 勇

(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院泌尿外科，廣西 南寧 530001)

目的 探討Klotho和Ki-67在膀胱尿路上皮癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及其相關(guān)性。方法 采用免疫組化SP 法檢測Klotho和Ki-67在膀胱尿路上皮癌和正常膀胱組織的表達(dá)。結(jié)果 Klotho 在膀胱尿路上皮癌組織中的表達(dá)顯著低于正常膀胱組織，在復(fù)發(fā)患者中的陽性表達(dá)率顯著低于初發(fā)組，其表達(dá)與膀胱尿路上皮癌病理分級、臨床分期以及預(yù)后有關(guān)(P<0.05)；其表達(dá)與膀胱尿路上皮癌病理分級、臨床分期以及預(yù)后有關(guān)(P<0.05) 。Klotho 與Ki-67的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.308，P<0.05) 。結(jié)論 Klotho 和Ki-67可能在膀胱尿路上皮癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用，聯(lián)合檢測二者有助于膀胱尿路上皮癌發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步研究。

膀胱尿路上皮癌；Klotho；細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原；免疫組織化學(xué)

膀胱尿路上皮癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，其生物學(xué)行為復(fù)雜多變，易于種植、復(fù)發(fā)〔1〕。近年來Klotho基因作為一種抑癌基因被廣泛關(guān)注，其異常表達(dá)可能參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。Hori等〔2〕發(fā)現(xiàn)分泌型Klotho蛋白在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要的作用。細(xì)胞核增殖相關(guān)抗原67(Ki-67)是在增殖細(xì)胞中表達(dá)的一種核抗原，其表達(dá)與膀胱尿路上皮癌臨床分期和病理分級相關(guān)〔3〕。本研究擬探討Klotho和Ki-67蛋白表達(dá)的意義及相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 臨床資料與標(biāo)本收集 廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院泌尿外科2012～2014年收治的經(jīng)手術(shù)證實且獲得隨訪的膀胱尿路上皮癌患者52例。入選患者均診斷明確，資料完整，其中男45例，女7例。年齡56～80歲，平均(64.6±13.5)歲，標(biāo)本均經(jīng)病理證實為膀胱尿路上皮癌。52例標(biāo)本病理分級按WHO標(biāo)準(zhǔn)分為：低級別16例，高級別36例。臨床分期按UICC-TNM標(biāo)準(zhǔn)分為：Tis～T1期20例，T2～T4期32例。初發(fā)23例，復(fù)發(fā)29例。另取10例正常膀胱黏膜標(biāo)本作對照。

1.2 免疫組化檢測Klotho和Ki-67的表達(dá) Klotho鼠抗人單克隆抗體購自美國Abcam公司，Ki-67鼠抗人單克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，二抗和二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑均購自福建邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.3 結(jié)果判定 Klotho陽性表達(dá)產(chǎn)物呈黃色顆粒狀，表達(dá)較強(qiáng)時呈棕黃色，定位于細(xì)胞質(zhì)中。Ki-67陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核，陽性表達(dá)表現(xiàn)為棕黃色顆粒染色。由2位病理醫(yī)師采取雙盲法觀察免疫組化結(jié)果。Klotho和Ki-67陽性率的判定和計算方式按文獻(xiàn)〔4，5〕進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 計數(shù)資料采用χ2檢驗，各指標(biāo)陽性表達(dá)相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 Ki-67和Klotho在膀胱尿路上皮癌及正常膀胱上皮中的表達(dá) Klotho在膀胱尿路上皮癌組織中的陽性率(34.6%)明顯低于正常膀胱組織(100%，P<0.01)。Ki-67在膀胱尿路上皮癌組織中的陽性率(75%)明顯高于正常膀胱組織(10%，P<0.01)。見圖1。

圖1 膀胱尿路上皮癌組織中Klotho、Ki-67陽性表達(dá)(DAB)

2.2 Klotho和Ki-67表達(dá)與膀胱尿路上皮癌生物學(xué)行為的關(guān)系 Klotho的表達(dá)隨癌細(xì)胞惡性程度及浸潤程度增加有減弱的趨勢(P<0.05)，而Ki-67的表達(dá)隨癌細(xì)胞惡性程度及浸潤程度增加有增強(qiáng)趨勢(P<0.05)。Klotho的表達(dá)在初發(fā)組的陽性率明顯高于復(fù)發(fā)組，而Ki-67的表達(dá)在初發(fā)組的陽性率明顯低于復(fù)發(fā)組(P<0.01)。見表1。

2.3 膀胱尿路上皮癌中Klotho和Ki-67表達(dá)的相關(guān)性 在膀胱尿路上皮癌組織中Klotho、Ki-67共陽性12例，共陰性3例，僅Klotho陽性6例，僅Ki-67陽性31例，Klotho和Ki-67表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.308，P<0.05)。

表1 Klotho和Ki-67陽性表達(dá)率與膀胱尿路上皮癌生物學(xué)行為的關(guān)系〔n(%)〕

3 討 論

膀胱尿路上皮癌的發(fā)生發(fā)展是多種基因和各種因素共同參與的多階段進(jìn)程。在這個進(jìn)程中，多種基因的表達(dá)和蛋白分子水平的變化共同推進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。

Klotho基因最早是作為衰老相關(guān)基因由日本學(xué)者Kuro-o等〔6〕于1997年發(fā)現(xiàn)的。近年Klotho基因作為一種抑癌基因被廣泛關(guān)注，其與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展有密切關(guān)系〔7〕。Klotho 基因多態(tài)性與膀胱尿路上皮癌的腫瘤易感性有關(guān)，其中rs1207568位點的GA 和 AA 基因型攜帶者可增加患膀胱尿路上皮癌的風(fēng)險。而膀胱尿路上皮癌的發(fā)生發(fā)展與 rs9527025位點的 GC基因型呈正相關(guān)〔8〕。Klotho基因過表達(dá)能夠降低機(jī)體DNA氧化損傷，從而影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展〔9〕。Zhu等〔10〕研究發(fā)現(xiàn)，腎癌組織中Klotho蛋白的表達(dá)與腫瘤的大小、臨床分期呈負(fù)相關(guān)，Klotho蛋白表達(dá)與腎癌病人的生存率呈正相關(guān)。本研究提示Klotho蛋白下調(diào)可能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生及發(fā)展，檢測其表達(dá)水平對于監(jiān)測膀胱尿路上皮癌發(fā)生發(fā)展有一定指導(dǎo)意義。

Ki-67是一種僅在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)，與細(xì)胞分裂增殖相關(guān)的蛋白；是目前檢測腫瘤細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)之一。Ki-67在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)與腫瘤的浸潤程度、病理分級呈正相關(guān)，這與我們先前的研究結(jié)果〔3〕一致，并在此基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)其與預(yù)后有關(guān)，提示Ki-67可能不僅與膀胱尿路上皮癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，還與浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)，這為今后評估膀胱尿路上皮癌的預(yù)后提供了依據(jù)。

研究表明，Klotho作為一個腫瘤抑制因子，能抑制多種腫瘤通路，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡〔11，12〕。本研究發(fā)現(xiàn)在膀胱尿路上皮癌組織中Klotho和Ki-67表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與Wolf等〔13〕在乳腺癌中的研究結(jié)果一致。這提示在膀胱尿路上皮癌中，Klotho蛋白通過抑制Ki-67蛋白的表達(dá)而發(fā)揮抗腫瘤作用，而Klotho蛋白表達(dá)下調(diào)可能會影響相關(guān)通路，從而導(dǎo)致膀胱尿路上皮癌的發(fā)生。

1 Jemal A，Siegel R，Xu JQ，etal.Cancer statistics，2010〔J〕.CA Cancer J Clin，2010；60(5)：277-300.

2 Hori S，Miyake M，Onishi S，etal.Clinical significance of α-and β-Klotho in urothelial carcinoma of the bladder〔J〕.Oncol Rep，2016;36(4)：2117-25.

3 楊 森，陸浩源，白先忠，等.TK1和Ki-67在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及其相關(guān)性〔J〕.廣西醫(yī)學(xué)，2015;37(1)：18-20.

4 伍 季，茍 欣，李云祥.聯(lián)合檢測ΔNp63、Ki-67和VEGF與膀胱移行細(xì)胞癌預(yù)后的相關(guān)性研究〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2010;39(22)：3056-8.

5 成 慧，宋明芮，張曉云，等.子宮頸鱗狀細(xì)胞癌中Klotho與Wnt10b的表達(dá)及其相關(guān)性〔J〕.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2014;30(5)：498-500，505.

6 Kuro-o M，Matsumura Y，Aizawa H，etal.Mutation of the mouse klotho gene leads to a syndrome resembling ageing〔J〕.Nature，1997;390(6655)：45-51.

7 湯小偉，黃 曙，范志寧.Klotho基因與惡性腫瘤生物學(xué)行為關(guān)系的研究進(jìn)展〔J〕.國際消化病雜志，2013;33(4)：220-3.

8 Pjmb EA,Adam MW.Genetic polymorphism of klotho gene and bladder cancer risk〔J〕.Folia Medica Lodziensia，2012;39(2)：189-205.

9 Arking E，Becker M，Yanek R，etal.KLOTHO allele status and the risk of early-onset occult coronary artery disease〔J〕.Am J Hum Genet，2003;72(5)：1154-61.

10 Zhu Yu，Xu Le，Zhang JP，etal.Klotho suppresses tumor progression via inhibiting PI3K/Akt/GSK3β/Snail signaling in renal cell carcinoma〔J〕.Cancer Sci，2013;104(6)：663-71.

11 Zhou XX，Wang X.Klotho：a novel biomarker for cancer〔J〕.J Cancer Res Clin Oncol，2015;141(6)：961-9.

12 Kim JH，Hwang KH，Lkhagvadorj S，etal.Klotho plays a critical role in clear cell renal cell carcinoma progression and clinical outcome〔J〕.Korean J Physiol Pharmacol，2016;20(3)：297-304.

13 Wolf I，Levanon-Cohen S，Bose S，etal.Klotho：a tumor suppressor and a modulator of the IGF-1 and FGF pathways in human breast cancer〔J〕.Oncogene，2008;27(56)：7094-105.

〔2016-12-15修回〕

(編輯 徐 杰)

Expression and correlation of Klotho and Ki-67 in bladder urothelial carcinoma

LU Hao-Yuan, BAI Xian-Zhong, TANG Yong.

Department of Urinary Surgery; Cancer Hospital Affiliated to Guangxi Medical University; Nanning 530021; Guangxi, China

Objective To study the expressions of Klotho and Ki-67 in bladder urothelial carcinoma and normal bladder tissue, and to explore their roles in the carcinogenesis and progression of bladder urothelial carcinoma.Methods The expressions of Klotho and Ki-67 were evaluated by immunohistochemical SP method staining in bladder urothelial carcinoma and normal bladder tissue. Results The expression of Klotho in bladder urothelial carcinoma was significantly lower than that in normal bladder tissue. The positive rate of Klotho in the recurred cases was lower than that of the primary cases. Klotho expression was associated with pathological grade, clinical stage and prognosis (P<0.05). Positive expression of Ki-67 was remarkable higher in bladder urothelial carcinoma than that in normal bladder tissue ,which was associated with pathological grade, clinical stage and prognosis (P<0.05).Expressions of Klotho and Ki-67 were negative relationship (rs=-0. 308，P<0.05).Conclusions The expressions of Klotho and Ki-67 may play a crucial role in the progress and metastasis of bladder urothelial carcinoma.Combined detection of Klotho with Ki-67 could provide further study of the pathogenesis of bladder urothelial carcinoma.

Bladder urothelial carcinoma; Klotho; Ki-67

國家自然科學(xué)基金項目(No.81560428)

唐 勇(1975-)，男，博士，主任醫(yī)師，主要從事泌尿系腫瘤研究。

陸浩源(1976-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事泌尿系腫瘤研究。

R737.1

A

1005-9202(2017)13-3127-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.13.003