高效液相色譜法測(cè)定食用植物油中TBHQ、BHA、BHT含量

續(xù)穎 劉雪瑩 伍鎣

摘要 [目的]建立食用植物油中3種抗氧化劑含量的測(cè)定方法。[方法]利用甲醇溶解提取與離心相結(jié)合的技術(shù)進(jìn)行脫脂處理，采用反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食用植物油中特丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）、丁基羥基茴香醚（BHA）和二丁基羥基甲苯（BHT）含量。[結(jié)果]TBHQ、BHA、BHT濃度在1～10 mg/L時(shí)線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)分別為0.999 92、0.999 95、0.999 93；檢出限分別為0.54、0.48、0.48 mg/kg，回收率為73.7%～97.3%。[結(jié)論]該方法準(zhǔn)確、靈敏，適用于各類(lèi)植物油的TBHQ、BHA、BHT含量分析。

關(guān)鍵詞 食用植物油；特丁基對(duì)苯二酚；丁基羥基茴香醚；二丁基羥基甲苯；脫脂處理；高效液相色譜法

中圖分類(lèi)號(hào) TS225.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2017）18-0089-02

Abstract [Objective] To establish a method for determination of 3 antioxidants content in edible vegetable oil.[Method] The content of TBHQ，BHA，BHT in edible vegetable oil was determined by reversed phase high performance liquid chromatography （HPLC），using the technology of methanol extraction and centrifugation to conduct degreasing.[Result] Experimental results showed that the experiment of TBHQ，BHA，BHT had a good liner relationship in concentration range of 1-10 mg/L，the correlation coefficient of linear curve were 0.999 92，0.999 95，0.999 93； the limits of detection were 0.54，0.48，0.48 mg/kg； the recovery of 3 antioxidants ranged from 73.7% to 97.3%.[Conclusion] The method was proved to be highly efficient，robust and sensitive，and was suitable for the analysis of TBHQ，BHA，BHT in edible vegetable oil.

Key words Edible vegetable oil；TBHQ；BHQ；BHT；Degreasing treatment；High liquid performance chromatography

食用植物油是人們?nèi)粘Ｉ畋匦枋称分?，近年?lái)頻頻發(fā)生的食品安全事件中不乏與食用油有關(guān)的事件，抗氧化劑等安全性指標(biāo)超出限量標(biāo)準(zhǔn)的情況會(huì)對(duì)人們身體健康造成不可逆轉(zhuǎn)的傷害，加劇了消費(fèi)者對(duì)食品安全的信任危機(jī)。

特丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）、丁基羥基茴香醚（BHA）、二丁基羥基甲苯（BHT）3類(lèi)合成酚類(lèi)抗氧化劑作為食品添加劑，能起到防止或延緩油脂氧化，提高油脂的穩(wěn)定性和延長(zhǎng)貯存期的作用，在食用植物油生產(chǎn)環(huán)節(jié)中常被單獨(dú)或混合使用。然而過(guò)量食用含抗氧化劑的食品，對(duì)人體肝、脾、腎等器官均有不利的影響，因此各國(guó)對(duì)食用抗氧化劑都有嚴(yán)格的使用限量規(guī)定。在我國(guó)食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB2760中，對(duì)3種抗氧化劑在油及食用油脂食品中使用限量規(guī)定均≤0.2 g/kg。食用植物油TBHQ、BHA、BHT在現(xiàn)行GB/T 23373介紹的檢測(cè)方法中，樣品經(jīng)有機(jī)溶劑提取、并用價(jià)格昂貴的凝膠滲透色譜凈化系統(tǒng)進(jìn)行樣品脫脂預(yù)處理，應(yīng)用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)。凝膠滲透色譜凈化系統(tǒng)價(jià)格昂貴、前處理繁瑣、時(shí)間長(zhǎng)，筆者采用甲醇溶解提取與離心相結(jié)合技術(shù)進(jìn)行脫脂處理優(yōu)化，采用液相色譜法檢測(cè)食用植物油中TBHQ、BHA、BHT 3類(lèi)抗氧化劑的含量，重點(diǎn)考察了方法的檢出限、線(xiàn)性范圍、重復(fù)性、回收率等重要的色譜方法學(xué)參數(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料 供試花生油樣品，市售。主要儀器：Agilent 1260液相色譜儀（配紫外檢測(cè)器）；Sartorius BSA124S電子天平；森田 TD5A 離心機(jī)；Vortex XH-B漩渦混勻器。主要試劑：甲醇（色譜純）；試驗(yàn)用水為一級(jí)水；TBHQ、BHA、BHT標(biāo)準(zhǔn)品（Dr.Ehrenstorfer）。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別稱(chēng)取3種抗氧化劑標(biāo)準(zhǔn)品各50.0 mg，用甲醇定容至50 mL，濃度為1 mg/mL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液。將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用甲醇稀釋成1、2、4、8、10 mg/L 5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.3 液相色譜參考條件 色譜柱為C18柱（4.6 mm×250 mm，粒度2.7 μm）；進(jìn)樣量15 μL；

流動(dòng)相：甲醇（A），水（B）。洗脫梯度：0～5.0 min，流動(dòng)相A為30%；5.0～21.5 min，流動(dòng)相A從30%變化為80%；21.5～40.0 min，流動(dòng)相A為80%；40.0～50.0 min，流動(dòng)相A為30%。流速1 mL/min；柱溫40 ℃；紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)280 nm。

1.4 樣品前處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取2 g植物油樣于10 mL塑料離心管中，用10 mL甲醇分3次（3+3+4）分別在漩渦混勻器上快速混勻1 min，離心（2 000 r/min）5 min，吸取上清液合并于10 mL離心管中；搖勻后經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾，供分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及檢出限

標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜見(jiàn)圖1。將濃度為1、2、4、8、10 μg/L 5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液上機(jī)測(cè)定，根據(jù)峰的積分面積繪制5點(diǎn)校正曲線(xiàn)。獲得線(xiàn)性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限（S/N）結(jié)果分別如下（圖2）：TBHQ的線(xiàn)性回歸方程為y=5.208 621 66x-0.185 173 5，相關(guān)系數(shù)r2=0.999 92，檢出限為0.54 mg/kg；BHA的線(xiàn)性回歸方程為y=5.809 462 9x+0.218 803 4，相關(guān)系數(shù)r2=0.999 95，檢出限為0.48 mg/kg；BHT的線(xiàn)性回歸方程為y=3.799 519 6x+0.265 006 1，相關(guān)系數(shù)r2=0.999 93，檢出限為0.48 mg/kg。

2.2 樣品重復(fù)性及回收率

2.2.1 重復(fù)性試驗(yàn)。選取市售2款花生油進(jìn)行測(cè)定，平行測(cè)定6次，測(cè)得樣品中TBHQ、BHA、BHT的平均濃度、RSD試驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。表1中重復(fù)性試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，該方法具有良好的重現(xiàn)性。

2.2.2 回收率試驗(yàn)。

取花生油陰性樣品，分別對(duì)該花生油進(jìn)行3個(gè)濃度的加標(biāo)試驗(yàn)，每個(gè)加標(biāo)濃度樣品平行測(cè)定6次，測(cè)得回收率、RSD具體試驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。表2回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，該方法具有較高的精密度和準(zhǔn)確度。

3 結(jié)論

該研究通過(guò)對(duì)食用油脂苯并（α）芘、抗氧化劑含量檢測(cè)方法進(jìn)行優(yōu)化，試驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單，試劑消耗量少，檢測(cè)時(shí)間大大縮短，檢測(cè)成本低，并且方法重現(xiàn)性良好、加標(biāo)回收率較高，具有較高的精密度和準(zhǔn)確度。表明上述方法滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)室對(duì)使用油脂苯并（α）芘、抗氧化劑的定量分析測(cè)定。

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