RP-HPLC法測定穿心蓮片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量

馬紀偉

（南陽醫(yī)學高等?？茖W校，河南 南陽 473058）

RP-HPLC法測定穿心蓮片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量

馬紀偉

（南陽醫(yī)學高等?？茖W校，河南 南陽 473058）

目的 測定穿心蓮片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。方法利用RP-HPLC法，采用Diamonsil（鉆石）C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，流動相為甲醇-水（55∶45），流速：1.0 mL/min，檢測波長：225 nm（穿心蓮內(nèi)酯）、254 nm（脫水穿心蓮內(nèi)酯）。結(jié)果 穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯分別在0.31～2.38 μg和0.29～2.51 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的平均回收率分別為100.53%和99.98%，RSD分別為2.06%和2.45%。結(jié)論 RP-HPLC法測定穿心蓮片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量，方法簡便，樣品處理簡便易行，可作為穿心蓮片的質(zhì)量控制方法。

穿心蓮片；穿心蓮內(nèi)酯；脫水穿心蓮內(nèi)酯；RP-HPLC法

穿心蓮片是由穿心蓮干浸膏加適量輔料壓制而成的中藥片劑，具有清熱解毒、涼血消腫的功效，臨床上用于感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、口舌生瘡[1]。穿心蓮的主要有效成分為穿心蓮內(nèi)酯及脫水穿心蓮內(nèi)酯等[2]，為了有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床用藥安全，筆者用RP-HPLC法測定穿心蓮片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量，結(jié)果證明該方法簡便易行，現(xiàn)介紹如下。

1 儀器與藥品

1.1 儀器

日本島津LC－10AD高效液相色譜儀；島津SPD－10A紫外檢測器；浙江大學智能信息研究所N2000雙通道色譜工作站。

1.2 藥品

穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品（中國藥品生物制品檢定所提供）；穿心蓮片（廣西濟民制藥廠，批號為160301、160302、160401）；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil（鉆石）C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（55：45）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：225 nm（穿心蓮內(nèi)酯）、254 nm（脫水穿心蓮內(nèi)酯）。

2.2 樣品溶液制備

取穿心蓮片樣品20片，除去包衣，精密稱定，研細，精密稱取0.2 g，置于50 mL量瓶中，加入甲醇50 mL，冷浸1小時，超聲處理30分鐘，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液即得。

2.3 對照品溶液制備

精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對照品11.35 mg、脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品12.32 mg，分別置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，濃度分別為113.5 μg/mL、123.2 μg/mL。

2.4 陰性對照實驗

取輔料適量，按2.3的方法制備陰性樣品。精密吸取陰性溶液10 μL并測定，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯分離良好，陰性樣品在穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品于相同保留時間未見有吸收峰，說明無干擾。見圖1。

圖1 穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯RP-HPLC色譜圖

2.5 線性關(guān)系

取上述兩種對照品溶液，分別精密吸取4 μL、6 μL、8 μL、10 μL、12 μL、14 μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積。以對照品進樣量（μg）為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。結(jié)果表明，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的進樣量與其色譜峰面積均呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程：穿心蓮內(nèi)酯：Y= 6 702.0X+15.08，R=0.999 9，線性范圍：0.31～2.38 μg；脫水穿心蓮內(nèi)酯：Y=4 941.29X－14.97，R=0.999 7，線性范圍：0.29～2.51 μg。

2.6 精密度實驗

精密吸取對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣5次，記錄峰面積。結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯平均峰面積為1 722 548，RSD=0.52%；脫水穿心蓮內(nèi)酯平均峰面積為1 202 541，RSD=0.56%。

2.7 重復性實驗

取同一批號樣品5份，按樣品測定方法測定，結(jié)果樣品中穿心蓮內(nèi)酯的平均含量為22.48 mg/片，RSD為0.48%；脫水穿心蓮內(nèi)酯為20.09 mg/片，RSD為0.51%。

2.8 穩(wěn)定性實驗

取同一樣品溶液10 μL，分別放置2小時、4小時、6小時、8小時、14小時、24小時測定色譜峰面積。結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯平均峰面積為2 022 152，RSD=0.36%；脫水穿心蓮內(nèi)酯平均峰面積為1 748 511，RSD=0.41%?？芍獦悠啡芤涸?4小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收實驗

精密量取已知含量樣品5份，精密加入對照品適量，按樣品溶液制備方法制備，取樣品溶液和對照品溶液10 μL，分別進樣，測定峰面積，計算回收率。結(jié)果平均回收率穿心蓮內(nèi)酯為100.53%，RSD=2.06%；脫水穿心蓮內(nèi)酯為99.98%，RSD=2.45%，具體見表1。

2.10 樣品測定

按2.2樣品溶液的制備方法，測定3批樣品的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

表1 穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯回收率實驗

表2 穿心蓮片成分含量測定

3.1 流動相的選擇

本實驗比較了甲醇-水（60∶40）、甲醇-水（55∶45）、甲醇-水（50∶50）等流動相，經(jīng)實驗摸索，最終確定流動相組成為甲醇-水（55∶45）分離效果最好。

3.2 柱溫的選擇

曾考察25℃、28℃、30℃、35℃等不同柱溫對測定結(jié)果的影響，結(jié)果表明，30℃時各色譜峰之間分離度好、峰形銳、出峰時間適宜，故選擇30℃為測定柱溫。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[M].北京：化學工業(yè)出版社，2015.

[2]唐芳，向大雄，李煥德.RP-HPLC法測定穿心蓮及其制劑中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量[J].藥物分析雜志，2000，20（6）：421.

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1671-1246（2017）12-0150-02