頂空氣相色譜法同時測定艾司奧美拉唑鎂原料藥中6種有機溶劑的殘留量Δ

姜鷹雁，耿志鵬，劉 燕，索 棟，楊海霞（山東省藥學科學院生物藥物重點實驗室，濟南 250101）

頂空氣相色譜法同時測定艾司奧美拉唑鎂原料藥中6種有機溶劑的殘留量Δ

姜鷹雁＊，耿志鵬，劉 燕，索 棟，楊海霞#（山東省藥學科學院生物藥物重點實驗室，濟南 250101）

目的：建立同時測定艾司奧美拉唑鎂原料藥中甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯6種有機溶劑殘留量的方法。方法：采用頂空氣相色譜法。色譜柱為DB-624毛細管柱，程序升溫，進樣口溫度為200℃，檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為250℃，載氣為氮氣，氮氣流速為2.0m L/min，分流比為5∶1，頂空進樣量為1m L，頂空平衡溫度為80℃，平衡時間為20m in。結果：甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯檢測質量濃度線性范圍分別為12.56～628.00μg/m L（r＝0.999 7）、20.22～1 011.20μg/m L（r＝0.999 9）、1.96～97.76μg/m L（r＝0.999 7）、3.10～154.88μg/m L（r＝0.999 8）、20.69～1 034.56μg/m L（r＝0.999 8）、3.53～176.72μg/m L（r＝0.999 8）；定量限分別為1.00、0.91、0.47、0.93、0.41、0.35μg/m L，檢測限分別為0.31、0.30、0.14、0.31、0.12、0.11μg/m L；精密度、穩(wěn)定性、重復性試驗的RSD＜3%；加樣回收率分別為94.53%～101.29%（RSD＝2.15%，n＝9）、97.78%～103.42%（RSD＝1.77%，n＝9）、96.99%～105.76%（RSD＝2.59%，n＝9）、96.83%～102.05%（RSD＝1.86%，n＝9）、97.98%～101.13%（RSD＝0.88%，n＝9）、97.80%～102.40%（RSD＝1.41%，n＝9）。結論：該方法靈敏、準確，可用于艾司奧美拉唑鎂原料藥中甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯6種有機溶劑殘留量的同時測定。

艾司奧美拉唑鎂；頂空氣相色譜法；有機溶劑；殘留量；甲醇；異丙醇；乙腈；二氯甲烷；乙酸乙酯；甲苯

艾司奧美拉唑鎂是奧美拉唑的S異構體的鎂鹽[1]，是一種弱堿性物質，臨床主要用于胃食管反流性疾病、十二指腸潰瘍、消化性食管炎等相關疾病的治療[2-3]。艾司奧美拉唑鎂與奧美拉唑相比，其肝臟的首關效應更低，不良反應發(fā)生率更低，臨床治療效果更好[4-6]。艾司奧美拉唑鎂質量標準收載于《美國藥典》（USP）、《歐洲藥典》（EP）、《英國藥典》（BP）等國外藥典[7-9]，但均未對其殘留溶劑檢測方法作出規(guī)定。而人用藥品注冊技術要求國際協(xié)調會議（ICH）對藥品中殘留溶劑的種類和限度有明確規(guī)定[10]。艾司奧美拉唑鎂在合成工藝中使用了甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯6種有機溶劑，為有效控制該制劑質量，保證用藥安全，必須對上述有機溶劑殘留量進行有效控制[11]。鑒于此，本課題組參考相關文獻[12-15]，首次采用頂空氣相色譜法建立了同時測定艾司奧美拉唑鎂原料藥中甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯6種有機溶劑殘留量的方法，以期為艾司奧美拉唑鎂原料藥的質量控制提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

7890B型氣相色譜儀，包括氫火焰離子化檢測器（FID）、色譜工作站及7697A頂空進樣器（美國Agilent公司）；XS-205型電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

1.2 藥品與試劑

艾司奧美拉唑鎂原料藥（山東省藥學科學院生物藥物重點實驗室自制，批號：20140301、20140302、20140303）；甲醇對照品（批號：130308，純度：≥99.5%）、異丙醇對照品（批號：121220，純度：≥99.5%）、乙腈對照品（批號：130913，純度：≥99.5%）均購自天津市康科德科技有限公司；二氯甲烷對照品（批號：130731，純度：≥99.5%）、乙酸乙酯對照品（批號：130701，純度：≥99.5%）均購自西隴化工股份有限公司；甲苯對照品（萊陽經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)精細化工廠，批號：20110308，純度：≥99.5%）；N，N-二甲基乙酰胺為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624毛細管柱（30 m×0.53 mm，3.0 μm）；升溫程序：初始溫度50℃，保持5min，以3℃/min升溫至100℃，再以30℃/m in升溫至230℃，保持3 min；進樣口溫度：200℃；檢測器：FID；檢測器溫度：250℃；載氣：氮氣；氮氣流速：2.0m L/min；分流比：5∶1；頂空進樣量：1m L；頂空平衡溫度：80℃；平衡時間：20 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液 精密稱取甲醇對照品78.50 mg、異丙醇對照品126.40mg、乙腈對照品12.22mg、二氯甲烷對照品19.36mg、乙酸乙酯對照品129.32mg、甲苯對照品22.09mg，置于同一50m L量瓶中，加適量N，N-二甲基乙酰胺定容，搖勻，作為混合對照品貯備液。精密量取5m L混合對照品貯備液，置于50m L量瓶中，加N，N-二甲基乙酰胺定容，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取樣品約0.25 g，精密稱定，置于頂空瓶中，精密加N，N-二甲基乙酰胺5m L，密封，振搖，使溶解，即得。

2.2.3 空白對照溶液 精密量取N，N-二甲基乙酰胺5 m L，置于頂空瓶中，密封，即得。

2.3 專屬性及系統(tǒng)適用性試驗

取“2.2”項下混合對照品溶液、供試品溶液和空白對照溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，各待測有機溶劑峰均能達到基線分離，分離度均＞1.5；甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯的保留時間分別為4.47、6.66、7.00、7.35、10.40、18.63m in，理論板數(shù)以各待測有機溶劑峰計均＞5 000。結果表明，其他成分對測定無干擾。

圖1 氣相色譜圖Fig 1 GC Chromatogram s

2.4 線性關系考察

分別精密量取“2.2.1”項下混合對照品貯備液0.4、1.0、2.5、5.0、6.0、20m L，分別置于50m L量瓶中，加N，N-二甲基乙酰胺定容，搖勻，即得系列混合對照品溶液。取上述系列混合對照品溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以各待測有機溶劑質量濃度（x，μg/m L）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，回歸方程與線性范圍見表1。

表1 回歸方程與線性范圍Tab 1 Regression equationsand linear ranges

2.5 定量限（LOQ）與檢測限（LOD）考察

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。當信噪比為10∶1時，得LOQ；當信噪比為3∶1時，得LOD，結果見表2。

2.6 精密度試驗

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結果，甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯峰面積的RSD分別為2.22%、2.18%、0.97%、1.09%、1.19%、1.20%（n＝6），表明儀器精密度良好。

表2 LOQ與LOD測定結果Tab 2 Determ ination resultsof LOQ and LOD

2.7 穩(wěn)定性試驗

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、12 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯峰面積的RSD分別為2.35%、2.05%、1.22%、1.27%、1.62%、1.08%（n＝5），表明混合對照品溶液在室溫下放置12 h內穩(wěn)定性良好。

2.8 重復性試驗

精密稱取樣品（批號：20140301）約0.25 g，共6份，分別置于頂空瓶內，分別精密加入“2.2.1”項下混合對照品溶液5m L，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯峰面積的RSD分別為2.29%、2.05%、1.39%、1.40%、1.30%、1.05%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.9 加樣回收率試驗

取樣品（批號：20140301）適量，共9份，分別置于50 m L量瓶中，分別加入低、中、高質量的各待測有機溶劑對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表3。

2.10 樣品有機溶劑殘留量測定

取3批樣品（批號：20140301、20140302、20140303）各適量，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算有機溶劑殘留量。結果，3批樣品中均未檢出殘留溶劑。

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

本課題組曾采用AgilentHP-5（30m×0.32mm，0.25 μm）、DB-1（30m×0.32mm，1μm）、DB-624（30m×0.53 mm，1.8μm）等毛細管柱對6種待測有機溶劑進行分離。結果，采用HP-5、DB-1毛細管柱時，混合對照品溶液各主成分峰對稱因子較差，且個別待測有機溶劑峰與其他峰重合，不能完全將6種待測有機溶劑分離；采用DB-624毛細管柱可使6種待測有機溶劑達到基線分離。進一步研究了DB-624毛細管柱填料內徑分別為（30m×0.32mm，1.8μm）及（30m×0.53mm，3.0μm）時6種待測有機溶劑的分離情況，發(fā)現(xiàn)當采用DB-624毛細管柱（30m×0.53mm，3.0μm）時，各待測有機溶劑峰相對于前者對稱因子較好，理論板數(shù)較高，且保留時間較適宜，分離度較高。因此，本試驗選擇DB-624毛細管柱（30m×0.53mm，3.0μm）測定樣品中的有機溶劑殘留量。

表3 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 3 Resultsof recovery test（n＝9）

3.2 頂空平衡溫度與平衡時間的選擇

當平衡時間為20m in時，本課題組分別考察了頂空平衡溫度為70、80、90℃時各待測有機溶劑的色譜峰峰面積，結果表明隨著頂空平衡溫度的升高，色譜峰峰面積增加，靈敏度也隨之提高，考慮到溶劑的沸點會對檢測結果產生影響[16-17]，且當平衡溫度為80℃時各待測有機溶劑已有較好的響應，滿足檢測要求，最終選擇80℃作為頂空平衡溫度。當頂空平衡溫度為80℃時，分別對平衡時間10、20和30min進行比較，結果表明當平衡時間達到20m in與30min時各待測有機溶劑峰面積沒有明顯變化，且均高于10m in時，說明20min時已經(jīng)達到氣液平衡。故本試驗選擇頂空平衡時間為20m in。

綜上所述，本方法靈敏、準確，可用于艾司奧美拉唑鎂原料藥中甲醇、異丙醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯6種有機溶劑殘留量的同時測定。

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SimultaneousDeterm ination of 6 Residual O rganic Solvents in Omeprazole M agnesium by Headspace GC

JIANG Yingyan，GENG Zhipeng，LIU Yan，SUO Dong，YANG Haixia（Key Laboratory of Biopharmaceuticals，Shandong Academy of Pharmaceutical Science，Jinan 250101，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the simultaneous determ ination of 6 kinds of residual organic solvents in Omeprazole magnesium，such as methanol，isopropanol，acetonitrile，dichloromethane，ethyl acetate and toluenein.METHODS：Headspace GC was adopted.The determ ination was performed on the column of DB-624 column by temperature programm ing.The inlet temperature was 200℃，and hydrogen flame ionization detector was adopted w ith the temperature of 250℃；nitrogen gas was used as carrier gas w ith flow rate of 2.0 m L/m in；the splitting-radio was 5∶1，and sample size was 1 m L；the headspace temperature was 80℃and the equilibrium time was 20min.RESULTS：The linear range were 12.56-628.00μg/m L formethanol（r＝0.999 7），20.22-1011.20μg/m L for isopropanol（r＝0.999 9），1.96-97.76μg/m L for acetonitrile（r＝0.999 7），3.10-154.88μg/m L for dichloromethane（r＝0.999 8），20.69-1034.56μg/m L for ethyl acetate（r＝0.999 8），and 3.53-176.72μg/m L for toluene（r＝0.999 8）；the limits of quantitation were 1.00，0.91，0.47，0.93，0.41 and 0.35μg/m L respectively；the limits of detection were 0.31，0.30，0.14，0.31，0.12 and 0.11μg/m L respectively；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 3%；the recoveries were 94.53%-101.29%（RSD＝2.15%，n＝9），97.78%-103.42%（RSD＝1.77%，n＝9），96.99%-105.76%（RSD＝2.59%，n＝9），96.83%-102.05%（RSD＝1.86%，n＝9），97.98%-101.13%（RSD＝0.88%，n＝9）and 97.80%-102.40%（RSD＝1.41%，n＝9）.CONCLUSIONS：Themethod is sensitive and accurate，can be used for the simultaneous determ ination of 6 kinds of residual organic solvents in Omeprazolemagnesium，such asmethanol，isopropanol，acetonitrile，dichloromethane，ethyl acetate and toluenein.

Omeprazolemagnesium；Headspace GC；Organic solvent；Residual；Methanol；Isopropanol；Acetonitrile；Dichloromethane；Ethyl acetate；Toluenein

R927.2

A

1001-0408（2017）15-2093-04

2016-08-09

2016-12-12）

（編輯：劉 柳）

“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項（No.2009ZX09301-013）

＊工程師，碩士。研究方向：藥物分析。電話：0531-81213067。E-mai：yyjiang2009@163.com

#通信作者：高級工程師，碩士。研究方向：藥物分析。電話：0531-81213065。E-mail：hxyangxu@163.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.15.22