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    并發(fā)麻痹性腸梗阻的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎的研究

    2017-07-07 15:17:32魏亞芬殷萍劉永丹盧沖李晶鑫劉麗吳珊珊肖淑媛
    關(guān)鍵詞:實(shí)驗(yàn)性巴利神經(jīng)炎

    魏亞芬 殷萍 劉永丹 盧沖 李晶鑫 劉麗 吳珊珊 肖淑媛

    并發(fā)麻痹性腸梗阻的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎的研究

    魏亞芬 殷萍 劉永丹 盧沖 李晶鑫 劉麗 吳珊珊 肖淑媛

    目的 對并發(fā)麻痹性腸梗阻的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎(EAN)進(jìn)行探究。方法 60只健康清潔級(jí)的雄性Lewis大鼠,隨機(jī)分成三組,第一組為200 μg P2(57-81)多肽特異性肽段實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎組,第二組為400 μg P2(57-81)多肽特異性肽段實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎組,第三組為對照組,各20只。分析每組大鼠的臨床癱瘓?jiān)u分,評(píng)價(jià)炎性細(xì)胞浸潤和脫髓鞘的情況。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎模型組的大鼠全部發(fā)病,對照組大鼠沒有發(fā)病。第二組大鼠最大臨床癱瘓?jiān)u分(7.25±0.36)分高于第一組(7.02±0.43)分,發(fā)病時(shí)間(5.05±0.61)d早于第一組(6.51±0.50)d,癱瘓持續(xù)時(shí)間(37.12±1.01)d長于第一組(23.81±1.76)d,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);第一組和第二組的高峰期開始時(shí)間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。兩組第18天、第35天、第45天3個(gè)不同時(shí)間坐骨神經(jīng)HE染色炎性細(xì)胞比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);第一組第18天、第35天、第45天坐骨神經(jīng)HE染色炎性細(xì)胞均低于第二組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 在致敏第45天,400 μg P2(57-81)多肽組仍有炎性反應(yīng),一些重度格林巴利綜合征在慢性癱瘓下不恢復(fù)階段可能會(huì)存在自身免疫反應(yīng)。

    麻痹性腸梗阻;實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎;格林巴利綜合征

    格林巴利綜合征又稱為急性感染性多發(fā)性神經(jīng)炎,與格林巴利綜合征有相似臨床表現(xiàn)和免疫學(xué)特點(diǎn)的是實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎,它是由于T細(xì)胞介導(dǎo),出現(xiàn)的一種周圍神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘性自身免疫疾病,利用實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎對于人類研究格林巴利綜合征有重要的意義,是研究格林巴利綜合征的理想動(dòng)物模型[1-4]。為探究并發(fā)麻痹性腸梗阻的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎,特選取Lewis大鼠建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎模型,現(xiàn)報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇60只健康清潔級(jí)的雄性Lewis大鼠,4~6周齡,體重150~160 g,將其隨機(jī)分成三組,第一組為200 μg P2(57-81)多肽特異性肽段實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎組,第二組為400 μg P2(57-81)多肽特異性肽段實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎組,第三組為對照組,各20只。選取的主要試劑P2(57-81)多肽特異性肽段序列為f、k、n、t、e、i、s、f、k、l、g、q、e、f、e、e、t、t、a、d、n、r、k、t、k,其他試劑有結(jié)核菌素,抗大鼠二抗PV-6002,大鼠抗兔一抗CD4、CD8、CD68免疫試劑,Incomplete Freund佐劑等。

    1.2 方法 建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎模型,對模型組的Lewis大鼠注射P2(57-81)多肽特異性肽段,從大鼠尾根部皮下注射致敏原,分別以200 μg或者400 μg P2(57-81)多肽,混合2 mg的結(jié)核菌素,100 μl的生理鹽水以及100 μl的不完全福氏佐劑,對照組以同樣的方式注射。從大鼠致敏的當(dāng)天開始每天對大鼠臨床癱瘓?jiān)u分進(jìn)行記錄,一直觀察到致敏45 d。在大鼠致敏的第18天、第35天、第45天分別處死大鼠,對雙側(cè)坐骨神經(jīng)進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色,并記錄浸潤炎性反應(yīng)細(xì)胞的平均數(shù)。采用二步法對坐骨神經(jīng)CD4、CD8、 CD68免疫組織化學(xué)染色。

    1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 比較三組的發(fā)病時(shí)間、癱瘓持續(xù)時(shí)間、高峰期開始時(shí)間及臨床癱瘓?jiān)u分。臨床癱瘓?jiān)u分標(biāo)準(zhǔn)[5]:無異常為0分;大鼠尾巴尖上翹,尾部的張力減少為1分;尾部癱瘓,翻正反射部分缺失為2分;翻正反射完全缺失為3分;姿態(tài)和步調(diào)異常為4分;后肢有輕微癱瘓為5分;后肢中度癱瘓為6分;后肢嚴(yán)重癱瘓為7分;四肢癱瘓為8分;瀕臨死亡為9分;死亡為10分。對三組大鼠致敏的第18天、第35天、第45天坐骨神經(jīng)HE染色炎性細(xì)胞進(jìn)行比較。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn);多組比較采用方差分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 第一組和第二組大鼠臨床癱瘓?jiān)u分、發(fā)病時(shí)間、癱瘓持續(xù)時(shí)間及高峰期開始時(shí)間比較 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎模型組的大鼠全部發(fā)病,對照組大鼠沒有發(fā)病。第二組大鼠最大臨床癱瘓?jiān)u分(7.25±0.36)分高于第一組(7.02±0.43)分,發(fā)病時(shí)間(5.05±0.61)d早于第一組(6.51±0.50)d,癱瘓持續(xù)時(shí)間(37.12±1.01)d長于第一組(23.81±1.76)d,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);第一組和第二組的高峰期開始時(shí)間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

    2.2 第一組和第二組坐骨神經(jīng)HE染色炎性細(xì)胞比較 兩組第18天、第35天、第45天3個(gè)不同時(shí)間坐骨神經(jīng)HE染色炎性細(xì)胞比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);第一組第18天、第35天、第45天坐骨神經(jīng)HE染色炎性細(xì)胞均低于第二組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

    表1 第一組和第二組大鼠臨床癱瘓?jiān)u分、發(fā)病時(shí)間、癱瘓持續(xù)時(shí)間及高峰期開始時(shí)間比較(±s)

    表1 第一組和第二組大鼠臨床癱瘓?jiān)u分、發(fā)病時(shí)間、癱瘓持續(xù)時(shí)間及高峰期開始時(shí)間比較(±s)

    注:與第二組比較,aP<0.05,bP>0.05

    組別 只數(shù) 最大臨床癱瘓?jiān)u分(分) 發(fā)病時(shí)間(d) 癱瘓持續(xù)時(shí)間(d) 高峰期開始時(shí)間(d)第一組 20 7.02±0.43a 6.51±0.50a 23.81±1.76a 15.22±2.07b第二組 20 7.25±0.36 5.05±0.61 37.12±1.01 15.38±1.71

    表2 第一組和第二組坐骨神經(jīng)HE染色炎性細(xì)胞比較(±s)

    表2 第一組和第二組坐骨神經(jīng)HE染色炎性細(xì)胞比較(±s)

    注:與第二組比較,aP<0.05;組內(nèi)不同時(shí)間比較,P<0.05

    組別 只數(shù) 第18天 第35天 第45天 F P第一組 20 419.5±72.4a 90.6±41.3a 0a 418.24 0.000第二組 20 495.6±55.1 221.4±35.2 90.6±14.3 385.92 0.000

    3 討論

    實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎動(dòng)物模型可以利用抗原特異性的自身免疫性T細(xì)胞,注入大鼠尾靜脈在大鼠體內(nèi)誘導(dǎo)而成,也可以從周圍神經(jīng)組織、髓鞘蛋白成分或者其他合成的多肽免疫誘導(dǎo)而成[6-9]。有研究已經(jīng)證實(shí),實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎癱瘓的程度和導(dǎo)致神經(jīng)炎抗原接種的劑量、種類有關(guān)系,P2(57-81)多肽比P0(180-199)多肽的致敏性要高[10]。P2具有膜蛋白的理化特性,P2蛋白誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎中,Lewis大鼠的免疫反應(yīng)最強(qiáng)[11]。在格林巴利綜合征中,如果出現(xiàn)腹腔神經(jīng)叢副交感神經(jīng)受損,可能出現(xiàn)麻痹性腸梗阻,副交感神經(jīng)功能損壞,使胃腸平滑肌蠕動(dòng)受到抑制,出現(xiàn)脊神經(jīng)脫髓鞘,首先累及植物神經(jīng)節(jié),導(dǎo)致出現(xiàn)特發(fā)性全植物神經(jīng)功能不全,在臨床上出現(xiàn)腸梗阻[12-15]。早期通過大劑量注射人免疫球蛋白可以緩解患者的癥狀,減少顱神經(jīng)損害,促進(jìn)四肢肌力的恢復(fù)[16]。

    總之,實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎的發(fā)病機(jī)制是針對神經(jīng)髓鞘或者神經(jīng)軸索的組織成分的一種自身免疫反應(yīng),巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞參與了這一過程,同時(shí)趨化因子、細(xì)胞因子、基質(zhì)金屬蛋白酶也是參與因素。

    [1]陳琦琦.L-161982對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎大鼠趨化因子表達(dá)的影響.山東大學(xué),2014.

    [2]賁瑩,張鳳華,梁文杰,等.丙戊酸抑制大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎機(jī)制研究.解放軍醫(yī)藥雜志,2013,25(2):16-20.

    [3]李波.免疫吸附療法在重癥格林-巴利綜合征治療中的應(yīng)用.中外醫(yī)療,2015,34(30):3-4.

    [4]楊夏萍.前列腺素E2EP4受體拮抗劑對大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎的影響.蘇州大學(xué),2015.

    [5]馮青.L161982對大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎中巨噬細(xì)胞亞型變化的影響.山東大學(xué),2015.

    [6]陳宏宇,申東方,宋榮蓉.178例吉蘭巴雷綜合征患者的電生理表現(xiàn).中外醫(yī)療,2015,34(25):42-43,46.

    [7]梁麗新.p38MAPK對EAN中MMPs表達(dá)影響的研究.哈爾濱醫(yī)科大學(xué),2014.

    [8]吳崢嶸.Apelin-13對大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎的防治作用及其機(jī)制.中南大學(xué),2014.

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    [13]李慧,吳云.趨化因子及黏附因子在重癥實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎模型中作用的研究.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2016,50(5):407-410.

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    [16]賁瑩,張鳳華,梁文杰,等.從Th1、Th17細(xì)胞除極探討丙戊酸干預(yù)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎的機(jī)制.腦與神經(jīng)疾病雜志,2014,22(1):33-36.

    10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.06.097

    2017-02-09]

    哈爾濱應(yīng)用技術(shù)研究與開發(fā)項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):2014RFXGJ082)

    150036 黑龍江省醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)一科

    殷萍

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