• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    ESI-Q-TOF-MS/MS用于碳青霉烯類抗生素及其中間體質(zhì)譜裂解機理研究

    2017-07-05 09:47:05孫子晴肖欽欽梁現(xiàn)蕊
    發(fā)酵科技通訊 2017年2期
    關鍵詞:分子離子烯類中間體

    蘇 鳳,孫子晴,肖欽欽,梁現(xiàn)蕊

    (1.浙江工業(yè)大學 綠色制藥協(xié)同創(chuàng)新中心,浙江 杭州 310014;2.浙江工業(yè)大學 藥學院,浙江 杭州 310014)

    ESI-Q-TOF-MS/MS用于碳青霉烯類抗生素及其中間體質(zhì)譜裂解機理研究

    蘇 鳳1,2,孫子晴1,2,肖欽欽1,2,梁現(xiàn)蕊1,2

    (1.浙江工業(yè)大學 綠色制藥協(xié)同創(chuàng)新中心,浙江 杭州 310014;2.浙江工業(yè)大學 藥學院,浙江 杭州 310014)

    采用電噴霧-四極桿-飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-Q-TOF-MS/MS),在正離子模式下,對美羅培南等碳青霉烯類抗生素及其合成中間體共8種化合物的裂解規(guī)律進行了探討.實驗結(jié)果顯示碳青霉烯類抗生素在該質(zhì)譜條件下易形成[M+H]+離子,其合成中間體則易觀察到[M+Na]+離子.該8種化合物裂解途徑相似,主要為分子內(nèi)脫羧基反應、四元內(nèi)酰胺環(huán)裂解反應及側(cè)鏈結(jié)構(gòu)中C—S鍵的裂解反應.

    碳青霉烯類抗生素;電噴霧-四極桿-飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-Q-TOF-MS/MS);裂解規(guī)律

    1976年,默克公司的科學家在篩選能作用于細胞壁生物合成的抑制劑過程中,從卡特利鏈霉菌(Streptomycescattleya)發(fā)酵液中分離得到一種具有廣譜、強力抗菌活性的碳青霉烯類抗生素硫霉素(thienamycin),在隨后的幾十年里,人們通過對硫霉素的結(jié)構(gòu)改造,陸續(xù)開發(fā)出一系列碳青霉烯類抗生素,它是治療危重感染的常用抗菌藥物之一[1].近年來,運用膠束毛細管電泳色譜法[2]、毛細管區(qū)帶電泳法[3]和高效液相色譜法[4-7]等對碳青霉烯類抗生素厄他培南、美羅培南等及其有關物質(zhì)進行了廣泛的研究.質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS,GC-MS等)技術已成為快速、準確鑒定藥物中雜質(zhì)的較佳方法[8-14],在藥物定性鑒別、雜質(zhì)研究、體內(nèi)代謝物研究和中藥復雜組分分析等領域都發(fā)揮著越來越重要的作用.目前常用的質(zhì)譜技術主要有高分辨率質(zhì)譜(HRMS)和多級質(zhì)譜(MSn).對于HRMS,以飛行時間(TOF)質(zhì)譜為例,因其可以提供精確到小數(shù)點后4~6位的相對分子質(zhì)量,使得儀器分辨率和相對分子質(zhì)量的精確度得到提高,同時也可以獲得相應碎片離子的元素組成及分子式.由于高分辨質(zhì)譜的精確性,使得其在化合物結(jié)構(gòu)鑒定方面有著較廣泛的應用[15-19].MSn可以提供豐富的碎片離子信息以及裂解信息,利用得到的數(shù)據(jù)可以推測出藥物及其雜質(zhì)的裂解模式,進而結(jié)合已有的知識鑒定出未知化合物的結(jié)構(gòu),在雜質(zhì)分析和控制方面具有重要作用.

    目前已有關于碳青霉烯類抗生素美羅培南、厄他培南雜質(zhì)譜裂解機理的報道[20-23],但未見對該類抗生素及其相關合成中間體質(zhì)譜裂解規(guī)律的系統(tǒng)總結(jié).對厄他培南、美羅培南、比阿培南和多尼培南及其4種合成中間體(保護美羅培南、MAP、4AA水解物和4AA氧化物)進行ESI-ITMSn,ESI-QTOF-MS/MS分析和研究,發(fā)現(xiàn)了該類化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律,為碳青霉烯類抗生素及其有關物質(zhì)結(jié)構(gòu)解析和定量分析提供科學依據(jù).

    1 實驗部分

    1.1 主要試劑與儀器

    Micro TOF QⅡ質(zhì)譜儀,德國Bruker公司:配有電噴霧(ESI)離子源,Compass數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),自動進樣器.

    乙腈(HPLC純),德國Merck公司;質(zhì)譜校正液(CF3COONa),阿拉丁試劑有限公司;實驗用水,自制超純水;樣品溶液配制,分別取少量厄他培南、美羅培南、比阿培南、多尼培南、MAP、保護美羅培南、4AA水解物和4AA氧化物用一定比例的水-乙腈-10%甲酸的混合溶液溶解樣品后進樣.碳青霉烯類抗生素結(jié)構(gòu)式為8種碳青霉烯類抗生素及其合成中間體化合物均由浙江海翔制藥有限公司提供,純度99%以上,其結(jié)構(gòu)式如表1所示.

    表1 碳青霉烯類抗生素及其合成中間體的結(jié)構(gòu)Table 1 The structures of carbapenems antibiotics and its synthetic intermediates

    1.2 質(zhì)譜分析條件

    電噴霧(ESI)離子源;ESI源電壓500 V;毛細管電壓4 500 V;霧化氣體液氮;霧化氣壓力0.4 Bar;氮氣溫度180 ℃;氮氣流速4.0 L/min;碰撞氣體氬氣;進樣速度180 μL/h;在正離子模式下先進行一級質(zhì)譜全掃描,m/z為50~1 500,再將得到的待測物的準分子離子[M+H]+或[M+Na]+作為母離子進行二級質(zhì)譜分析,以用于化合物裂解規(guī)律的研究.

    2 結(jié)果與討論

    2.1 8種化合物的一級全掃描質(zhì)譜

    采用電噴霧離子源,在正離子檢測模式下,對8種化合物進行一級質(zhì)譜全掃描分析,檢測結(jié)果列于表2.其中4種碳青霉烯類抗生素易觀察到[M+H]+準分子離子峰,而4種碳青霉烯類抗生素的合成中間體不易形成[M+H]+的準分子離子峰,而易得到[M+Na]+準分子離子峰.

    表2 8種化合物的一級質(zhì)譜數(shù)據(jù)

    Table 2 The MS data of carbapenems antibiotics and its synthetic intermediates

    化合物編號測量值m/z元素組成理論值m/z誤差/10-61476.1485C22H26N3O7S476.14860.32384.1621C17H26N3O5S384.1588-8.73351.1135C15H19N4O4S351.1122-3.94421.1230C15H25N4O6S2421.1210-4.85720.1958C32H35N5NaO11S720.1946-1.76617.1290C29H27N2NaO10P617.12960.87402.1714C19H29NNaO5Si402.1707-1.88416.1878C20H31NNaO5Si416.1864-3.5

    2.2 化合物1~6的MS/MS分析及裂解規(guī)律研究

    對化合物1~6的準分子離子進行MS/MS分析,所得到的主要產(chǎn)物離子的精確質(zhì)量數(shù)如表3所示,該6種化合物因結(jié)構(gòu)中都具有碳青霉烯類抗生素的母環(huán)結(jié)構(gòu),表現(xiàn)出了相似的裂解途徑.

    表3 化合物1~6的[M+H]+離子在ESI-Q-TOF-MS/MS譜圖中的主要產(chǎn)物離子Table 3 Major product [M+H]+ions from ESI-Q-TOF-MS/MS spectrum of compounds 1~6

    注:1) [M+Na]+ion;2) [M+Na—CO2]+ion;3) [M+Na—C4H6O2]+ion;4) [M+Na—R2+H]+ion;5) [R2—H+Na]+ion;6) [HXR2+Na]+ion.

    厄他培南[M+H]+準分子離子(m/z=476)在正離子模式下,所得到的MS/MS掃描圖可看到4種主要碎片離子:m/z為432,390,346和233,同時還可以看到一些相對豐度較低的碎片離子m/z為267,200,181和114.準分子離子m/z=432與準分子離子m/z=476相比減少了44 u,該子離子可能是由母核上的羧基發(fā)生脫羧反應失去一分子CO2所得到.離子m/z=390與準分子離子m/z=476相比減少了86 u,該碎片離子的形成可能是因四元內(nèi)酰胺環(huán)發(fā)生[2,2]逆Diels-Alder反應而產(chǎn)生的,包含酰胺鍵斷裂和C5—C6單鍵的斷裂.離子m/z=346可能是由離子m/z=390再發(fā)生脫羧反應失去一分子CO2得到,該中間體側(cè)鏈R2基團如果發(fā)生酰胺鍵斷裂脫去一分子對氨基苯甲酸后,再脫去一分子CO即生成離子m/z=181.離子m/z=114的形成可分a,b和c三種途徑:途徑a為[M+H]+(m/z=476)準分子離子先脫去一分子CO2,再脫去側(cè)鏈,最后失去86 u形成;途徑b為[M+H]+(m/z=476)準分子離子先失去一分子C4H6O2(相對分子質(zhì)量86 u),再脫去一分子CO2(相對分子質(zhì)量44 u),最后脫去側(cè)鏈形成;途徑c為[M+H]+準分子離子發(fā)生母核與側(cè)鏈之間的斷裂,形成側(cè)鏈互補離子對m/z=233和m/z=244,而離子m/z=244易再脫去一分子CO2形成較穩(wěn)定的m/z=200離子峰.離子m/z=200再失去一分子C4H6O2得到離子m/z=114.對于子離子m/z=267,其并未得到一個確定的分子組成,說明該信號可能是由(Ⅰ),(Ⅱ)元素組成不同的兩種離子混合而成的.美羅培南因側(cè)鏈結(jié)構(gòu)與厄他培南相差較小,其[M+H]+的裂解途徑與厄他培南相似,不同的是其m/z=267離子有確定的元素組成(Ⅰ),化合物1,2 [M+H]+的可能的裂解途徑為

    比阿培南和多尼培南[M+H]+的裂解途徑稍有不同,主要區(qū)別在于比阿培南側(cè)鏈結(jié)構(gòu)中的氮雜雙環(huán)結(jié)構(gòu)易發(fā)生C—N鍵斷裂脫去一個三氮五元雜環(huán),其[M+H]+可能的裂解途徑為

    保護美羅培南[M+Na]+準分子離子(m/z=720)二級質(zhì)譜得到的碎片離子主要有m/z為342,634,203,481,247和136.子離子m/z=634與相對豐度較低的子離子m/z=676的斷裂與厄他培南相似,分別由準分子離子m/z=720失去一分子CO2和C4H6O2得到.離子m/z=634再發(fā)生酯基C—O單鍵斷裂脫去一分子對硝基苯甲醇生成離子m/z=481.[M+Na]+準分子離子再經(jīng)厄他培南途徑c發(fā)生母核與側(cè)鏈之間的斷裂,形成側(cè)鏈互補離子對m/z=342和m/z=401.離子m/z=247是由離子m/z=342先脫去一分子NH(CH3)2后,再脫去一分子CO后所得,在這個過程中同時發(fā)生了Na-H交換.離子m/z=247失去一分子CO2得到離子m/z=203,然后再丟掉氮雜環(huán)后形成離子m/z=136.

    MAP[M+Na]+準分子離子(m/z=720)二級質(zhì)譜得到的碎片離子主要有m/z=531,m/z=356和一些相對豐度較低的碎片離子.離子m/z=378可能是由MAP[M+Na]+準分子離子先失掉C4H6O2生成離子m/z=531,該中間體再發(fā)生酯基C—O單鍵斷裂脫去一分子對硝基苯甲醇所得.離子m/z=573可能是由準分子離子m/z=720脫去一分子CO2而得到,該中間體可再連續(xù)脫去一分子NO2、一分子苯酚和苯正離子后得到離子m/z=356,該離子再丟失一分子CO后生成離子m/z=328.另一方面,離子m/z=573也可先脫去一分子對硝基甲苯形成離子m/z=436,再脫去一分子CO2后形成m/z=408.而m/z=215離子的形成可分三種途徑,都為失去一分子CO2,一分子C4H6O2和碎片離子m/z=273,同時也發(fā)生了Na-H交換反應,只是裂解順序不同而已.MAP[M+Na]+可能的裂解途徑為

    2.3 化合物7,8的[M+Na]+MS/MS分析及裂解規(guī)律研究

    對4AA氧化物[M+Na]+準分子離子(m/z=416)進行二級質(zhì)譜分析,也得到豐富的碎片離子峰.[M+Na]+準分子離子四元內(nèi)酰胺環(huán)上C-4位乙酰氧基可能產(chǎn)生Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ四種斷裂方式.途徑Ⅰ為四元內(nèi)酰胺環(huán)上C-4位發(fā)生脫乙酰氧基反應,若O與鄰位H結(jié)合,則丟掉一分子乙酸形成離子m/z=356,若與Na結(jié)合,則丟掉一分子乙酸鈉形成離子m/z=334,而m/z=334碎片離子由于C-3位基團上雜原子O的強電負性易使分子內(nèi)發(fā)生電子重排反應生成離子m/z=159.途徑Ⅱ為在四元內(nèi)酰胺環(huán)上C-4位乙酰氧基上發(fā)生甲基重排脫去一分子CO,再發(fā)生H重排脫去一分子HCHO后,再脫去1-叔丁基-二甲基-硅醇,四元內(nèi)酰胺環(huán)內(nèi)發(fā)生脫羰基反應,最后生成離子m/z=198.途徑Ⅲ為在四元內(nèi)酰胺環(huán)上C-4位乙酰氧基上發(fā)生酯基C—O鍵斷裂失去一分子CH2=C=O,脫去1-叔丁基-二甲基-硅醇,脫去苯甲基醚等連續(xù)斷裂反應形成離子m/z=134.途徑Ⅳ為C-4位乙酰氧基發(fā)生分子內(nèi)重排后脫去一分子CO2,該中間體四元內(nèi)酰胺環(huán)的支鏈乙基再發(fā)生C—O鍵斷裂后,若O與鄰位H結(jié)合,則丟掉1-叔丁基-二甲基-硅醇后生成離子m/z=240,若與Na結(jié)合,則丟掉1-叔丁基-二甲基-硅醇鈉形成m/z=218.4AA氧化物[M+Na]+可能裂解途徑為

    4AA水解物[M+Na]+的裂解方式與4AA氧化物相似,不同的是4AA水解物可發(fā)生四元內(nèi)酰胺環(huán)C2—N1和C3—C4鍵斷裂而開環(huán)形成碎片離子m/z=202.4AA水解物和4AA氧化物[M+Na]+MS/MS產(chǎn)生的主要碎片離子的分子式、精確質(zhì)量數(shù)和誤差如表4所示.

    表4 化合物7,8的[M+Na]+離子在ESI-Q-TOF-MS/MS譜圖中的主要產(chǎn)物離子Table 4 Major product [M+Na]+ ions from ESI-Q-TOF-MS/MS spectrum of compounds 7, 8

    3 結(jié) 論

    筆者應用電噴霧-四級桿-飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-Q-TOF-MS/MS)技術,研究了幾種典型的碳青霉烯類抗生素及其合成中間體的裂解途徑.發(fā)現(xiàn)該類抗生素在正離子檢測模式下,主要以[M+H]+準分子離子峰形式存在,而其合成中間體主要以[M+Na]+準分子離子峰形式存在.二級質(zhì)譜實驗結(jié)果表明:無論該類化合物以何種準分子離子形式存在,其二級質(zhì)譜裂解方式都具有相似的裂解途徑或模式,主要為分子內(nèi)脫羧基反應(途徑C)、四元內(nèi)酰胺環(huán)裂解反應(途徑A)及側(cè)鏈結(jié)構(gòu)中C—S鍵的裂解(途徑B)反應.

    [1] 胡付品,朱德妹.KPC型碳青霉烯酶研究進展[J].中國感染與化療雜志,2008,11(1):76-80.

    [2] MICHALSKA K, PAJCHEL G, STEFAN T. Different sample stacking strategies for the determination of ertapenem and its impurities by micellar electrokinetic chromatography in pharmaceutical formulation[J]. Journal of chromatography A, 2009, 1216(14): 2934-2942.

    [3] TANIGUCHI S, HAMASE K, KINOSHITA A, et al. Simple and rapid analytical method for carbapenems using capillary zone electrophoresis[J]. Journal of chromatography B, 1999, 727(1/2): 219-225.

    [4] MUSSON D G, BIRK K L, KITCHEN C J, et al. Assay methodology for the quantitation of unbound ertapenem, a new carbapenem antibiotic, in human plasma[J]. Journal of chromatography B, 2003, 783(1): 1-9.

    [5] NRIROGI R V, KANDIKERE V N, SHRIVATAVA W, et al. Quantification of faropenem in human plasma by high-performance liquid chromatography[J]. Arzneimittelforschung, 2005, 55(22): 762-766.

    [6] GAO S W, CHEN X, TAO H, et al. Determination of faropenem in human plasma and urine by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Biomed chromatogr, 2008, 22(1): 5-12.

    [7] LEGRAND T, CHHUN S, REY E, et al. Simultaneous determination of three carbapenem antibiotics in plasma by HPLC with ultraviolet detection[J]. Journal of chromatography B, 2008, 875(2): 551-556.

    [8] XIA M, HANG T J, ZHANG F, et al. The stability of biapenem and structural identification of impurities in aqueous solution[J]. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 2009, 49(4): 937-944.

    [9] SAJONZ P, NATISHAN T K, WU Y, et al. Preparation, isolation, and characterization of dimeric degradation products of the 1β-methylcarbapenem antibiotic, ertapenem[J]. Journal of liquid chromatography & related technologies, 2001, 24(5): 2999-3015.

    [10] SUN C, WU J M, PAN Y J. Characterization of novel hydrolysis products of carbapenems by electrospray ionization mass spectrometry[J]. Rapid commun in mass spectrometry, 2009, 23(19): 3205-3212.

    [11] MENDZE A, CHAGASTELLES P, PALMA E, et al. Thermal and alkaline stability of meropenem: degradation products and cytotoxicity[J]. International journal of pharmaceutics, 2008, 350(1/2): 95-102.

    [12] 李祖光,國明,聶晶,等.直接進樣桿在線衍生GC-MS測定阿司匹林中的水楊酸[J].浙江工業(yè)大學學報,2014,42(1):67-72.

    [13] 曹慧,林珍珍,陳小珍,等.固相萃取-氣相色譜/三重四級桿質(zhì)譜法同時分析蔬菜中的50種農(nóng)藥殘留量[J].浙江工業(yè)大學學報,2012,40(3):279-283.

    [14] 李祖光,孟微微,王芳,等.超聲微波協(xié)同水蒸氣蒸餾-GC/MS分析生姜揮發(fā)油化學成分[J].浙江工業(yè)大學學報,2013,41(6):614-619.

    [15] WU Z J, FANG D M, HAN D, et al. Analysis of sesterterpenoids fromAspergillusterreususing ESI-QTOF and ESI-IT[J]. Phytochemical analysis, 2010, 21(4): 374-383.

    [16] JIN Y, ZHANG X L, SHI H, et al. Characterization of Cglycosyl quinochalcones inCarthamustinctoriusL. by ultraperformance liquid chromatography coupled with quadrupole-time-of-flight mass spectrometry[J]. Rapid commun in mass spectrometry, 2008, 22(3): 1275-1287.

    [17] BIJTTEBIER S K, HONDT E, HERMANS N, et al. Unravelling ionization and fragmentation pathways of carotenoids using orbitrap technology: a first step towards identification of unknowns[J]. Journal of mass spectrometry, 2013, 48(6): 740-754.

    [18] YANG M, LU Z Q, YU K, et al. Studies on the fragmentation pathways of ingenol esters isolated fromEuphorbiaesulausing IT-MSn and Q-TOF-MS/MS methods in electrospray ionization mode[J]. International journal of mass spectrometry, 2012, 323: 55-62.

    [19] BUSE J, EAI B, VERRALL R E, et al. Tandem mass spectrometric analysis of novel diquaternary ammonium gemini surfactants and their bromide adducts in electrospray-positive ion mode ionization[J]. Journal of mass spectrometry, 2011, 46(10): 1060-1070.

    [20] CORNELISEC A, XIAO Y, XIN X, et al. Elucidation of fragmentation mechanisms involving transfer of three hydrogen atoms using a quadrupole time-of-flight mass spectrometer[J]. Journal of mass spectrometry, 2001, 36(5): 575-579.

    [21] ZHAO Z X, QIN X Z, REED R A. Identification by LC/MSn of degradates of a novel carbapenem antibiotic in an aqueous matrix [J]. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 2002, 29(1/2): 173-181.

    [22] 王曉雪,赫軍,崔剛,等.碳青霉烯類抗生素的電噴霧質(zhì)譜裂解規(guī)律分析[J].中國藥房,2014,25(45):4295-4296.

    [23] LI J, ZHANG D S, CHONG XM, et al. Influence of substituent groups at the 3-position on the mass spectral fragmentation pathways of cephalosporins[J]. Rapid commun in mass spectrometry, 2010, 24(14): 2143-2150.

    (責任編輯:朱小惠)

    Fragmentation pathways of carbapenems antibiotics and their intermediates using electrospray ionization quadrupole time-of-flight mass spectrometry

    SU Feng1,2, SUN Ziqing1,2, XIAO Qinqin1,2, LIANG Xianrui1,2

    (1. Collaborative Innovation Center of Green Pharmaceuticals, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310014, China;2. College of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310014, China)

    The fragmentation pathways of carbapenem antibiotics and their intermediates were investigated by electrospray ionization quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry (ESI-Q-TOF-MS/MS) in positive mode. The experimental results showed that carbapenem antibiotics gave the prominent [M+H]+ions, while the intermediates yielded prominent [M+Na]+ions. All the eight compounds shared similar cleavage pathways, which involved the decarboxylation reaction, [2,2]-trans-Diels-Alder cleavage within the quaternary lactam ring, and the carbon-sulphur bond cleavage reaction.

    carbapenems antibiotics; electrospray ionization quadrupole time-of-flight mass spectrometry (ESI-Q-TOF MS/MS); fragmentation pathways

    2017-03-23

    蘇 鳳(1983—),女,浙江臨安人,研究實習員,研究方向為藥物結(jié)構(gòu)鑒定以及雜質(zhì)分離分析,E-mail:sufeng@zjut.edu.cn.

    R248.1

    A

    1674-2214(2017)02-0070-07

    猜你喜歡
    分子離子烯類中間體
    1起ICU耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌感染暴發(fā)的流行病學調(diào)查
    傳染病信息(2022年2期)2022-07-15 08:54:08
    建立A注射液中間體中肉桂酸含量測定方法
    基于HPLC-HESI-HRMS 的水冬瓜根皮化學成分分析
    PF+分子離子激發(fā)態(tài)的理論研究
    激發(fā)態(tài)和瞬態(tài)中間體的光譜探測與調(diào)控
    92種工業(yè)染料在四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜中的離子化規(guī)律
    計算氫分子離子鍵能的一種新方法
    山東化工(2018年16期)2018-09-12 09:43:38
    碳青霉烯類抗生素耐藥機制的研究進展
    新型三氮烯類化合物的合成與表征
    基于β-二亞胺配體的鋁氧硼六元環(huán)化合物和其中間體的合成、表征及其反應性研究
    日韩国内少妇激情av| av天堂在线播放| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产色婷婷99| 中出人妻视频一区二区| 久久久色成人| 久久九九热精品免费| 午夜亚洲福利在线播放| 色综合站精品国产| 免费av毛片视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产成人欧美在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲无线在线观看| 精品一区二区免费观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 欧美三级亚洲精品| 亚洲国产精品合色在线| 简卡轻食公司| 性色av乱码一区二区三区2| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 欧美区成人在线视频| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 亚洲电影在线观看av| 在线播放国产精品三级| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲自偷自拍三级| 久久精品人妻少妇| 国产精品乱码一区二三区的特点| 成人美女网站在线观看视频| 欧美高清性xxxxhd video| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 成人国产综合亚洲| 窝窝影院91人妻| 成人精品一区二区免费| 日韩欧美在线二视频| 午夜精品在线福利| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产精品女同一区二区软件 | 国产精品1区2区在线观看.| 免费在线观看成人毛片| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 日本成人三级电影网站| 国产在线男女| 久久精品国产亚洲av天美| 欧美色视频一区免费| 嫩草影院精品99| 欧美日本亚洲视频在线播放| .国产精品久久| 看片在线看免费视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 午夜精品在线福利| 久久久精品欧美日韩精品| 床上黄色一级片| 九九热线精品视视频播放| 床上黄色一级片| 黄色视频,在线免费观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 天美传媒精品一区二区| 免费电影在线观看免费观看| 国产野战对白在线观看| 午夜两性在线视频| 欧美+日韩+精品| 国产伦在线观看视频一区| 国产探花在线观看一区二区| 国产成人av教育| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产伦精品一区二区三区视频9| 三级国产精品欧美在线观看| 国产熟女xx| 最新在线观看一区二区三区| 国产伦人伦偷精品视频| www.999成人在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 欧美区成人在线视频| 看片在线看免费视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 午夜激情欧美在线| 精品久久久久久久末码| 夜夜爽天天搞| 最近视频中文字幕2019在线8| 变态另类丝袜制服| 床上黄色一级片| 99国产综合亚洲精品| 国产黄色小视频在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 欧美成人a在线观看| 草草在线视频免费看| av在线观看视频网站免费| 午夜福利高清视频| 亚洲中文字幕日韩| 成人国产综合亚洲| 国产毛片a区久久久久| 国产精品亚洲美女久久久| 色综合婷婷激情| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产色爽女视频免费观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 一本精品99久久精品77| 一进一出抽搐动态| 青草久久国产| 成人无遮挡网站| 久久性视频一级片| www.www免费av| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲五月天丁香| 欧美激情在线99| 97热精品久久久久久| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲五月婷婷丁香| av女优亚洲男人天堂| 久9热在线精品视频| 国产成人av教育| 精品日产1卡2卡| 中出人妻视频一区二区| 99久国产av精品| 人妻久久中文字幕网| 日本在线视频免费播放| 国产色婷婷99| 亚洲美女视频黄频| 午夜福利高清视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲电影在线观看av| 国产三级在线视频| 亚洲真实伦在线观看| 深夜a级毛片| 宅男免费午夜| 一个人免费在线观看的高清视频| or卡值多少钱| 亚洲av第一区精品v没综合| 日本a在线网址| 桃红色精品国产亚洲av| 欧美成狂野欧美在线观看| 性色avwww在线观看| 十八禁人妻一区二区| 简卡轻食公司| 国产淫片久久久久久久久 | 日韩欧美精品免费久久 | 欧美不卡视频在线免费观看| 永久网站在线| 麻豆成人av在线观看| 在线观看66精品国产| 少妇高潮的动态图| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲欧美日韩东京热| 看十八女毛片水多多多| 亚洲色图av天堂| 免费av不卡在线播放| 黄色日韩在线| 熟女电影av网| 1000部很黄的大片| 亚洲 国产 在线| 波多野结衣高清无吗| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产一区二区在线观看日韩| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲av.av天堂| 变态另类丝袜制服| 99国产综合亚洲精品| 免费人成视频x8x8入口观看| 久久久久九九精品影院| 国产成人av教育| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产高清三级在线| 免费一级毛片在线播放高清视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久久久免费精品人妻一区二区| 亚洲最大成人中文| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久欧美精品欧美久久欧美| 波多野结衣高清无吗| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 免费人成视频x8x8入口观看| 国产精品久久视频播放| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 亚洲av电影在线进入| 最近视频中文字幕2019在线8| av视频在线观看入口| 国产欧美日韩一区二区精品| 少妇人妻精品综合一区二区 | 女人十人毛片免费观看3o分钟| 亚洲五月婷婷丁香| bbb黄色大片| 欧美中文日本在线观看视频| 精品日产1卡2卡| 高清在线国产一区| 国产探花在线观看一区二区| 国产成+人综合+亚洲专区| 在线a可以看的网站| av天堂在线播放| 国产一区二区在线观看日韩| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 午夜老司机福利剧场| 亚洲人成电影免费在线| 中出人妻视频一区二区| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 赤兔流量卡办理| 国产高清视频在线播放一区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产一区二区在线av高清观看| 性插视频无遮挡在线免费观看| 久9热在线精品视频| 国产成人欧美在线观看| 国产精品人妻久久久久久| 嫩草影视91久久| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 久久久久久久午夜电影| 亚洲黑人精品在线| 国产美女午夜福利| 精品久久久久久成人av| 中文字幕久久专区| 99国产精品一区二区三区| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲内射少妇av| 国产野战对白在线观看| 亚洲av美国av| 久久精品综合一区二区三区| 乱人视频在线观看| 97热精品久久久久久| 午夜激情欧美在线| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲第一电影网av| 高清在线国产一区| 黄色丝袜av网址大全| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 91在线观看av| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 亚洲欧美日韩高清专用| 一进一出抽搐动态| 一级av片app| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 乱码一卡2卡4卡精品| 中文资源天堂在线| av福利片在线观看| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲成人中文字幕在线播放| 精品国产三级普通话版| 香蕉av资源在线| 久久久久久大精品| 日本a在线网址| 亚洲精品久久国产高清桃花| 99精品久久久久人妻精品| 99久国产av精品| 中文字幕久久专区| 99久久九九国产精品国产免费| 美女大奶头视频| 欧美一区二区国产精品久久精品| 一区二区三区免费毛片| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产在视频线在精品| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲无线观看免费| 黄色日韩在线| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 老熟妇仑乱视频hdxx| eeuss影院久久| 国产精品三级大全| 欧美成人一区二区免费高清观看| 午夜免费激情av| 国产成人aa在线观看| 亚洲精品456在线播放app | 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产精品久久久久久久久免 | 亚洲av二区三区四区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 97碰自拍视频| 久久中文看片网| 免费看美女性在线毛片视频| 国产成人影院久久av| 免费看日本二区| 国产精品永久免费网站| 精品久久久久久成人av| 最新在线观看一区二区三区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲人成电影免费在线| 熟女人妻精品中文字幕| 校园春色视频在线观看| 午夜日韩欧美国产| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 成熟少妇高潮喷水视频| 国产成人a区在线观看| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲成人精品中文字幕电影| 午夜福利免费观看在线| 亚洲最大成人手机在线| 99热这里只有是精品在线观看 | 日韩欧美 国产精品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 久久久久久久精品吃奶| 夜夜爽天天搞| 91麻豆av在线| 日韩精品中文字幕看吧| 欧美又色又爽又黄视频| 免费高清视频大片| 亚洲最大成人手机在线| 国产精品久久电影中文字幕| 九色国产91popny在线| 9191精品国产免费久久| 伦理电影大哥的女人| 99国产极品粉嫩在线观看| av欧美777| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 久久久色成人| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产爱豆传媒在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 欧美精品国产亚洲| 毛片一级片免费看久久久久 | 免费电影在线观看免费观看| 一夜夜www| 亚洲人成伊人成综合网2020| 色av中文字幕| 91九色精品人成在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 桃色一区二区三区在线观看| 久久久精品大字幕| 国内精品一区二区在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲av.av天堂| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产视频内射| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 免费av不卡在线播放| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲自偷自拍三级| 一区二区三区四区激情视频 | a在线观看视频网站| 国产精品伦人一区二区| 色综合婷婷激情| 一进一出抽搐gif免费好疼| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲一区高清亚洲精品| 免费一级毛片在线播放高清视频| 在线观看免费视频日本深夜| 日韩中字成人| 夜夜爽天天搞| 色视频www国产| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 99热精品在线国产| 三级国产精品欧美在线观看| 少妇丰满av| 日本免费a在线| 最新在线观看一区二区三区| 午夜视频国产福利| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 最新中文字幕久久久久| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 亚洲第一电影网av| netflix在线观看网站| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久久久久久久大av| 成人无遮挡网站| 极品教师在线视频| 搞女人的毛片| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲内射少妇av| 99riav亚洲国产免费| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 少妇高潮的动态图| 精品人妻视频免费看| 中文字幕熟女人妻在线| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产精品乱码一区二三区的特点| 两个人的视频大全免费| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 嫩草影院入口| 女人被狂操c到高潮| 18+在线观看网站| 不卡一级毛片| 丰满人妻一区二区三区视频av| 搡老妇女老女人老熟妇| 男插女下体视频免费在线播放| 又爽又黄a免费视频| 亚洲欧美日韩东京热| 免费看a级黄色片| 欧美性感艳星| 在线看三级毛片| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 婷婷亚洲欧美| 亚洲美女黄片视频| 国产三级黄色录像| 国产亚洲欧美98| 精品久久久久久久久久免费视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| www日本黄色视频网| 色播亚洲综合网| 久久久国产成人精品二区| 欧美高清成人免费视频www| 永久网站在线| 变态另类丝袜制服| xxxwww97欧美| 成人永久免费在线观看视频| 一级a爱片免费观看的视频| 性色av乱码一区二区三区2| 99久国产av精品| 免费无遮挡裸体视频| 久久久久久久久大av| 麻豆国产av国片精品| 啦啦啦韩国在线观看视频| 大型黄色视频在线免费观看| 嫩草影院精品99| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲最大成人中文| 国产主播在线观看一区二区| 国产成人影院久久av| 精品国内亚洲2022精品成人| 嫩草影视91久久| 欧美日韩乱码在线| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国语自产精品视频在线第100页| 国产精品,欧美在线| 真人一进一出gif抽搐免费| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲成人精品中文字幕电影| 91久久精品国产一区二区成人| 午夜久久久久精精品| 成人av一区二区三区在线看| 90打野战视频偷拍视频| 老司机福利观看| 国产视频一区二区在线看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 美女 人体艺术 gogo| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲无线观看免费| 日韩中字成人| 午夜免费激情av| 波多野结衣巨乳人妻| 国产真实伦视频高清在线观看 | 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲国产色片| 在线观看舔阴道视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产精华一区二区三区| 成人一区二区视频在线观看| 日韩欧美精品v在线| 久久久久久久精品吃奶| 一本精品99久久精品77| 日韩人妻高清精品专区| 深爱激情五月婷婷| 国产成人欧美在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 长腿黑丝高跟| 两人在一起打扑克的视频| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 一进一出抽搐动态| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| АⅤ资源中文在线天堂| 中文字幕av成人在线电影| 久久久成人免费电影| 亚洲成a人片在线一区二区| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产一区二区在线av高清观看| 国产成人欧美在线观看| 亚洲电影在线观看av| 18禁在线播放成人免费| 又爽又黄a免费视频| 波多野结衣高清无吗| 免费搜索国产男女视频| 丁香六月欧美| 精品国产三级普通话版| 一进一出抽搐动态| 黄色配什么色好看| 精品乱码久久久久久99久播| 国产精品伦人一区二区| 不卡一级毛片| 啪啪无遮挡十八禁网站| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 91av网一区二区| 1024手机看黄色片| 日韩精品中文字幕看吧| 国产成人福利小说| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 熟女电影av网| 狠狠狠狠99中文字幕| 免费人成在线观看视频色| 丰满的人妻完整版| 免费在线观看成人毛片| 亚洲电影在线观看av| 老鸭窝网址在线观看| 日日夜夜操网爽| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产单亲对白刺激| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 免费在线观看日本一区| 亚洲片人在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲男人的天堂狠狠| 深夜a级毛片| 成人av在线播放网站| 女同久久另类99精品国产91| 舔av片在线| 直男gayav资源| 国产三级在线视频| 午夜免费激情av| 欧美日本视频| 床上黄色一级片| 久久人妻av系列| 亚洲片人在线观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 午夜两性在线视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲精品日韩av片在线观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 动漫黄色视频在线观看| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 一进一出好大好爽视频| 黄色丝袜av网址大全| 搡老岳熟女国产| 国产成人av教育| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 免费观看的影片在线观看| 一区二区三区激情视频| 最近中文字幕高清免费大全6 | 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 内射极品少妇av片p| 欧美性感艳星| 又黄又爽又刺激的免费视频.| avwww免费| 一级av片app| 久久精品人妻少妇| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲色图av天堂| 最近中文字幕高清免费大全6 | 级片在线观看| 精品一区二区免费观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 午夜福利在线在线| 国产真实乱freesex| 午夜两性在线视频| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品99久久久久久久久| 久久久久久久午夜电影| 亚洲三级黄色毛片| 国产精品一及| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产三级在线视频| 日韩有码中文字幕| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲国产精品成人综合色| 欧美乱色亚洲激情| 黄色视频,在线免费观看| 可以在线观看毛片的网站| 日韩欧美三级三区| 内地一区二区视频在线| 丁香欧美五月| 久久99热6这里只有精品| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 真人一进一出gif抽搐免费| 国产视频一区二区在线看| 成人午夜高清在线视频| 国产午夜精品论理片| 亚洲无线在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产精品久久视频播放| 亚洲国产精品合色在线| 国产黄色小视频在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 哪里可以看免费的av片| av在线老鸭窝| 黄色女人牲交| www.熟女人妻精品国产| 婷婷色综合大香蕉| 欧美中文日本在线观看视频| 午夜影院日韩av| 一级av片app| 精品人妻偷拍中文字幕| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 久久久久久大精品| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 有码 亚洲区| 国产伦精品一区二区三区四那| 男女床上黄色一级片免费看| 国产在线男女| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲av五月六月丁香网| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 中文字幕av成人在线电影| 性欧美人与动物交配| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 国产高清视频在线播放一区| 99热这里只有是精品在线观看 | 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲av美国av| 国产精品电影一区二区三区| 丰满乱子伦码专区| 看黄色毛片网站| av在线天堂中文字幕| 天天一区二区日本电影三级| 国产高清有码在线观看视频| 黄色一级大片看看|