高脂飲食誘發(fā)的肥胖型高血壓大鼠增加脂肪肝以及血管重構(gòu)

劉馳++李鵬++楊蕓++李暢++許菲++孫偉++孔祥清

【摘要】過度肥胖是心血管疾病主要的影響因素之一。目前的研究主要是確定高脂肪飲食誘發(fā)的肥胖型高血壓對(duì)肝疾病、血管重構(gòu)以及血清中的脂肪因子表達(dá)的作用。四周雄性Sprague-Dawley （SD）喂養(yǎng)高脂飲食（HFD，45%脂肪）或?qū)φ诊嬍常?2%脂肪）12周。與對(duì)照的飲食大鼠相比，HFD飲食大鼠的體重、收縮壓、血清甘油三酯水平以及腎周圍脂肪細(xì)胞都明顯升高。HFD大鼠的胸主動(dòng)脈，心臟小動(dòng)脈以及腸系膜動(dòng)脈纖維化現(xiàn)顯著地增加。同時(shí)HFD大鼠的胸主動(dòng)脈的壁血管中膜厚度（M）以及胸主動(dòng)脈的中膜厚度/管腔直徑（M/L）出現(xiàn)顯著的增大。與對(duì)照飲食大鼠相比， HFD大鼠血清中的Endocan，leptin以及RANTES 水平顯著增加。Endocan，leptin以及RANTES在HFD誘發(fā)的肥胖性高血壓起著重要的作用。

【關(guān)鍵詞】肥胖；高血壓；脂肪因子；肝??；血管重構(gòu)

【中圖分類號(hào)】R-332 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2016.36..02

代謝綜合征由糖尿病，高血壓，血脂異常構(gòu)成，代謝綜合征與中心性肥胖發(fā)展有關(guān)。腹部的內(nèi)臟對(duì)血壓有顯著性影響[1]。肥胖會(huì)增加患高血壓和心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。在兒童中，肥胖會(huì)引起嚴(yán)重的并發(fā)癥，而且肥胖會(huì)增加心血管危險(xiǎn)因素的患病率，這些心血管危險(xiǎn)因素如：高血壓、高甘油三酯血癥、低高密度脂蛋白膽固醇，葡萄糖的新陳代謝。富含高脂肪的食物會(huì)引發(fā)交感激活以及高血壓，而且會(huì)誘發(fā)肥胖相關(guān)的代謝紊亂。高脂肪飲食被廣泛地用于誘導(dǎo)肥胖以及高血壓疾病模型。眾所周知，非乙醇性脂肪肝（NAFLD）是慢性肝病最為普通的形式，該病與肥胖以及胰島素抵抗密切相關(guān)[2]。在2型糖尿病，肥胖和肝臟疾病之間存在密切的相互作用。研究表明，比起普通喂食的老鼠組，在喂食高脂肪的大鼠組中，大鼠肝臟中出現(xiàn)了更顯著地脂肪細(xì)胞的滲透。而且高脂飲食提升了大鼠肝的重量以及肝臟三酰甘油含量。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

本實(shí)驗(yàn)采用雄性Sprague-Dawley （SD）大鼠，4周齡，由南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)操作均嚴(yán)格遵守美國國家衛(wèi)生機(jī)構(gòu)發(fā)布的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)和使用指南》（NIH，Publication No.85-23，1996修訂版）。實(shí)驗(yàn)大鼠在溫度22℃、濕度30～40%的環(huán)境中飼養(yǎng)，自由飲水和攝食。大鼠隨機(jī)分成2組：對(duì)照飲食組（12%脂肪）和HFD組（45%脂肪），喂養(yǎng)12周

1.2 體重以及血壓測(cè)試

對(duì)大鼠體重進(jìn)行每周記錄，在第12周，采用無創(chuàng)尾動(dòng)脈測(cè)壓系統(tǒng)系統(tǒng)（NIBP，ADInstruments， Australia）檢測(cè)清醒大鼠的尾動(dòng)脈收縮壓。為了減小緊張導(dǎo)致的SBP波動(dòng)，我們通過每天對(duì)大鼠進(jìn)行SBP測(cè)試，至少要堅(jiān)持10天。在測(cè)試之前，我們要把大鼠在28℃溫?zé)岽笫?0～20 min，這主要是為了監(jiān)測(cè)尾動(dòng)脈脈動(dòng)，這是為了獲得穩(wěn)定的脈動(dòng)。檢測(cè)8～10次，獲得SBP平均值。

1.3 油紅，蘇木精-伊紅和馬松染色

獲得肝臟，、腎周脂肪組織、心臟、胸主動(dòng)脈和腸系膜動(dòng)脈，然后固定、切片。使用油紅染色肝臟，蘇木精-伊紅染色腎周脂肪，馬松染色標(biāo)記心、胸主動(dòng)脈和腸系膜

動(dòng)脈。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以“x±s”表示，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 體重，血壓，以及生化參數(shù)

喂食12周HFD的大鼠的體重明顯高于對(duì)照飲食大鼠（見圖1A），比起控制飲食的老鼠；HFD大鼠的SBP也比較高（見圖1B）。在HFD大鼠中（見圖1C），血清TG含量明顯升高。但是HFD大鼠血清TCH，HDLC，LDLC含量與對(duì)照飲食大鼠無明顯區(qū)別（見圖1D，E，以及F）。

2.2 HFD對(duì)肝以及腎周脂肪組織影響

在HFD大鼠中，肝脂肪含量顯著地提高（見圖2B以及C）。于對(duì)照飲食大鼠來說，在HFD大鼠中腎周脂肪組織的直徑與面積顯著性增加（見圖2C，D以及E）。

2.3 蛋白質(zhì)芯片

測(cè)定三十個(gè)脂肪因子，HFD老鼠血清中 Endocan，leptin以及RANTES含量增加。但是對(duì)照飲食以及HFD大鼠之間，在其他的27個(gè)脂肪因子中，沒有明顯的不同，這其中包括血管生成素樣蛋白3，趨化因子配體2（CCL2），集落刺激因子（CSF-1），delta類1同族體（DLK-1），二肽基肽酶4（DPP4），纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子21（FGF-21），肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF），抗細(xì)胞間粘附分子-1（ICAM-1），胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1），類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1（IGFBP-1），IGFBP-2，IGFBP-3，IGFBP-5，IGFBP-6，白介素-1β（IL-1b），IL-6，IL-10，IL-11，白血病抑制因子（LIF），脂質(zhì)運(yùn)載蛋白-2，晚期糖化終產(chǎn)物受體（RAGE），抵抗素，絲氨酸肽酶抑制劑，進(jìn)化枝E，成員1（serpin E1），組織基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物-1，腫瘤壞死因子-alpha（TNF-a），血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）。

3 討 論

在目前研究中，我們發(fā)現(xiàn)如下：與對(duì)照飲食大鼠相比，HFD大鼠的體重、血清TG含量以及SBP都顯著性。在HFD大鼠中，肝中的脂肪含量也顯著地提高。同時(shí)腎周脂肪細(xì)胞的直徑以及面積增加，而且胸主動(dòng)脈，心臟小動(dòng)脈以及腸系膜動(dòng)脈纖維化顯著地增加。

肥胖問題是一個(gè)逐漸增加的負(fù)擔(dān)，由于在能量消耗與熱量攝入之間存在著不平衡，這是導(dǎo)致肥胖的基礎(chǔ)，這從而導(dǎo)致脂肪在白色脂肪組織儲(chǔ)存處的積累。肥胖以體重增加為特征，這從而導(dǎo)致過量脂肪的儲(chǔ)存，肥胖是發(fā)病和死亡較高的主要原因，它能夠引起許多疾病，這包括代謝綜合癥、糖尿病、心血管疾病、脂肪肝疾病以及癌癥。

眾所周知，肥胖會(huì)增加患高血壓以及心腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。HFD通常被廣泛地用于誘導(dǎo)肥胖與高血壓。Dobrian等發(fā)現(xiàn)HFD導(dǎo)致大約一半的SD大鼠出現(xiàn)肥胖。盡管如此，Nagae等人發(fā)現(xiàn)，比起喂食低脂肪食物的大鼠，所有喂食HFD的大鼠體重增加更多，而且在喂食低脂肪的以及HFD的大鼠之間，在血清的膽固醇、甘油三酯和游離脂肪酸并沒有出現(xiàn)明顯的不同。在喂食HFD初期，這種差異可能歸因于年齡的差異。在目前的研究中，平均體重為90g的大鼠被用于喂食HFD，3周之后，比起控制飲食的大鼠，HFD的大鼠體重較高。而且比起對(duì)照飲食的大鼠，HFD大鼠中SBP也比較高。在HFD大鼠中，血清TG水平也增加了。但是，在對(duì)照飲食以及HFD大鼠中，血清TCH.HDLC，LDLC水平并沒有明顯的差異。

在世界范圍之內(nèi)，病態(tài)性肥胖是慢性肝疾病最普遍的誘因之一。在HFD后代中，肝三酰甘油增加了。用高脂肪食物喂食4周之后，SD大鼠會(huì)出現(xiàn)單純性脂肪肝，而且在低12周，它會(huì)演變成脂肪性肝炎。在目前的研究中，其中比起普通進(jìn)食的大鼠來說，油紅染色顯示HFD飲食有大量脂肪浸潤(rùn)。在HFD大鼠中，腎周脂肪細(xì)胞的直徑以及面積增加了。所得結(jié)果表明喂食HFD的大鼠被用于建立NAFLD模型。

中樞Endocan-nabinoid系統(tǒng)激活促進(jìn)了食物的攝取。用HFD喂食的C5BL/6J小鼠血清中Leptin的水平明顯增加。RANTES以及其受體在肥胖的皮下脂肪組織中顯著地增加。在此研究中，檢測(cè)30種脂肪因子，與對(duì)照飲食的大鼠相比，肥胖大鼠血清中Endocan，leptin以及RANTES增加。所得結(jié)果表明在HFD誘發(fā)的肥胖型高血壓中，Endocan，leptin以及RANTES起著重要的作用。

總之，與對(duì)照飲食大鼠相比，HFD大鼠的體重、SBP以及血清TG含量都顯著性升高。在HFD的大鼠中，肝中的脂肪細(xì)胞的浸潤(rùn)顯著地增加。比起對(duì)照飲食的大鼠，肥胖大鼠腎周脂肪細(xì)胞的直徑以及面積增加。在HFD大鼠中，胸主動(dòng)脈，心臟小動(dòng)脈和腸系膜動(dòng)脈纖維化顯著地增加。在HFD大鼠中，血清中Endocan，leptin以及RANTES增加。而且這三個(gè)脂肪因子在HFD誘發(fā)的肥胖型高血壓中起著關(guān)鍵的作用。

參考文獻(xiàn)

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[2] Takeuchi M，Takino J，Sakasai-Sakai A，Takata T，Ueda T，Tsutsumi M，Hyogo H，Yamagishi S：Involvement of the TAGE-RAGE system in non-alcoholic steatohepatitis：Novel treatment strategies，World J Hepatol 2014， 6：880-893

本文編輯：李 豆