血清學(xué)篩查聯(lián)合胎兒非整倍體產(chǎn)前無(wú)創(chuàng)基因檢測(cè)的臨床價(jià)值探討

譚振華，王玥瑩，廖子慧，李海珠

（廣東省肇慶市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東肇慶526020）

血清學(xué)篩查聯(lián)合胎兒非整倍體產(chǎn)前無(wú)創(chuàng)基因檢測(cè)的臨床價(jià)值探討

譚振華，王玥瑩，廖子慧，李海珠

（廣東省肇慶市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東肇慶526020）

目的：探討血清學(xué)篩查聯(lián)合胎兒非整倍體產(chǎn)前無(wú)創(chuàng)基因檢測(cè)（NIPT）在胎兒染色體非整倍體異常中的應(yīng)用價(jià)值。方法：選取2015年6月至2016年6月在廣東省肇慶市第一人民醫(yī)院門診產(chǎn)科就診，并運(yùn)用NIPT技術(shù)進(jìn)行胎兒染色體疾病檢測(cè)的2 000例孕婦為研究對(duì)象，回顧性分析血清學(xué)篩查及NIPT的臨床資料。結(jié)果：血清學(xué)篩查染色體異常檢出率為14.35%（287/2 000），NIPT檢出率為8.90%（178/2 000），聯(lián)合篩查檢出率為5.60%（112/2 000）。血清學(xué)篩查聯(lián)合NIPT檢測(cè)診斷染色體異常的靈敏度、特異度以及約登指數(shù)均顯著高于單純血清學(xué)篩查或者NIPT檢測(cè)（P＜0.05）。適齡組染色體異常檢出率為2.14%（28/1 307），高齡組檢出率為9.24%（64/693），2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：高齡是導(dǎo)致胎兒染色體疾病的重要因素，與高齡孕婦孕周早期采用血清學(xué)篩查聯(lián)合NIPT法可提高產(chǎn)前診斷效率，具有推廣價(jià)值。

血清學(xué)篩查；產(chǎn)前無(wú)創(chuàng)基因檢測(cè)；胎兒染色體疾??；非整倍體

研究表明，超聲應(yīng)用于胎兒染色體疾病篩查，準(zhǔn)確性和靈敏度較差，而血清學(xué)篩查假高風(fēng)險(xiǎn)率較高［1-2］?；诖?，筆者擬通過(guò)運(yùn)用產(chǎn)前無(wú)創(chuàng)基因檢測(cè)（non-invasive prenatal testing，NIPT）技術(shù)檢測(cè)孕婦血漿中游離胎兒DNA（cffDNA），聯(lián)合早期血清學(xué)篩查，明確其在胎兒染色體疾病篩查臨床的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2015年6月至2016年6月在我院門診產(chǎn)科就診，并運(yùn)用NIPT技術(shù)進(jìn)行胎兒染色體疾病檢測(cè)的2 000例孕婦為研究對(duì)象。孕婦均簽署知情同意書(shū)。孕婦入院后，詳細(xì)記錄孕婦的臨床資料，包含ID號(hào)碼、姓名、出生日期、末次月經(jīng)、孕產(chǎn)次、采樣日期、采樣孕周、采樣當(dāng)日體重、妊娠方式、既往不良孕產(chǎn)史、聯(lián)系電話。所有孕婦均為單胎妊娠，孕周12～24周，平均（19.7±2.4）周。將上述研究對(duì)象予以分組，以年齡＜35歲為適齡組（n=1 307），平均年齡（26.8±3.37）歲，平均孕周（19.8±2.3）周，以年齡≥35歲為高齡組（n=693），平均年齡（38.2±1.05）歲，平均孕周（19.7±2.5）周。2組孕婦一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 血清學(xué)篩查方法［3］抽取孕婦空腹血2～3 ml，采用1235001-129704型時(shí)間分辨熒光免疫儀（Wallac公司）及其配套試劑盒，測(cè)定甲胎蛋白、游離雌三醇及絨毛膜促性腺激素水平，應(yīng)用Multiaale軟件計(jì)算孕婦21三體、18三體和13三體高風(fēng)險(xiǎn)率、臨界風(fēng)險(xiǎn)率。21三體以≥1:270為高風(fēng)險(xiǎn)，以＜1:500但大于高風(fēng)險(xiǎn)臨界值為臨界風(fēng)險(xiǎn)。18三體以≥1:350為高風(fēng)險(xiǎn)，以＜1:1 000但大于高風(fēng)險(xiǎn)臨界值為臨界風(fēng)險(xiǎn)。13三體以≥1：100為高風(fēng)險(xiǎn)，以＜1:1 000但大于高風(fēng)險(xiǎn)臨界值為臨界風(fēng)險(xiǎn)［4］。高風(fēng)險(xiǎn)診斷為陽(yáng)性。

1.2.2 NIPT技術(shù)檢測(cè)方法［5-6］在孕婦經(jīng)血清學(xué)篩查后，帶領(lǐng)其前往門診處以專用的CF采血管采集外周靜脈血5m l，置于-4℃予以保存待測(cè)。制備血漿，提取并分離樣品DNA，PCR技術(shù)擴(kuò)增cffDNA，檢驗(yàn)樣本DNA。所有樣本DNA經(jīng)由Illumina Hiseq 2000高通量測(cè)序平臺(tái)（北京貝瑞和康生物技術(shù)有限公司）測(cè)序，應(yīng)用配套軟件BGPD V2.0.1進(jìn)行生物信息分析，并判讀結(jié)果。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)高危孕婦建議其進(jìn)行羊水穿刺檢查，有羊水穿刺染色體檢查的以羊水中胎兒核型分析作為診斷染色體異常的“金標(biāo)準(zhǔn)”，無(wú)羊水穿刺染色體檢查的以分娩結(jié)局（新生兒科醫(yī)生的檢查結(jié)果）作為染色體異常診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”。羊水穿刺檢查操作：術(shù)前孕婦排空膀胱，取仰臥位，常規(guī)消毒和鋪巾；選用DC-8型彩色超聲診斷儀（Mindray公司）及配套胎兒保護(hù)裝置，測(cè)定胎兒雙頂徑、股骨長(zhǎng)徑、羊水深度、胎盤(pán)位置、厚度等，確定穿刺部位及深度。最初2～5m l羊水用5m l注射器抽取丟棄，后用50ml注射器抽取20m l羊水送檢。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采取SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)上述2組患者各項(xiàng)記錄數(shù)據(jù)進(jìn)行分類和匯總處理，檢驗(yàn)方法采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清學(xué)篩查、NIPT檢測(cè)及其聯(lián)合診斷結(jié)果血清學(xué)篩查染色體異常檢出率為14.35%（287/ 2 000），NIPT檢出率為8.90%（178/2 000），聯(lián)合篩查檢出率為5.60%（112/2 000），見(jiàn)表1。

表1 三種疾病的篩查情況

2.2 血清學(xué)篩查、NIPT檢測(cè)及其聯(lián)合診斷效能分析血清學(xué)篩查聯(lián)合NIPT診斷染色體異常的靈敏度、特異度以及約登指數(shù)均顯著高于單純血清學(xué)篩查或者NIPT檢測(cè)（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 三種方法的診斷效能比較

2.3 染色體異常情況適齡組染色體異常檢出率為2.14%（28/1 307），高齡組檢出率為9.24%（64/ 693），2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 2組胎兒染色體異常情況分析

3 討論

胎兒染色體疾病為產(chǎn)科臨床常見(jiàn)的一種新生兒出生缺陷疾病，目前尚無(wú)有效治療方法，主要借助產(chǎn)前篩查和診斷方法降低胎兒染色體疾病患兒出生率［7］?，F(xiàn)階段醫(yī)學(xué)臨床產(chǎn)前篩查手段多樣，超聲、血清學(xué)、MRI等技術(shù)得到普遍應(yīng)用。其中超聲引導(dǎo)下的羊水穿刺技術(shù)是胎兒染色體疾病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是其作為一種有創(chuàng)技術(shù)，操作難度較大、風(fēng)險(xiǎn)較高，而單行超聲檢測(cè)，亦或是血清學(xué)篩查，都難以取得滿意效果［8-9］。NIPT因具有無(wú)創(chuàng)、較高敏感性及特異性等優(yōu)點(diǎn)，能有效減少對(duì)孕婦及胎兒造成創(chuàng)傷的風(fēng)險(xiǎn)，被逐漸應(yīng)用于胎兒染色體異常篩查，但是其容易受母體本身染色體異常、母體孕前期接受異體輸血等多種因素影響，造成假陽(yáng)性結(jié)果。

本研究通過(guò)聯(lián)合血清學(xué)篩查方法及NIPT技術(shù)，將其應(yīng)用于產(chǎn)科臨床診斷，以明確胎兒染色體疾病檢出率。研究結(jié)果顯示：血清學(xué)篩查聯(lián)合NIPT檢測(cè)診斷染色體異常的靈敏度、特異度以及約登指數(shù)均顯著高于單純血清學(xué)篩查或者NIPT檢測(cè)（P＜0.05），提示血清學(xué)篩查聯(lián)合NIPT檢測(cè)對(duì)于胎兒染色體疾病診斷具有較高靈敏度及特異性。此外，本研究中適齡組染色體異常檢出率為2.14%（28/1307），高齡組檢出率為9.24%（64/ 693），2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與何怡等［10］研究結(jié)論一致。提示說(shuō)明孕婦高齡是胎兒染色體疾病的危險(xiǎn)因素。

綜上所述，高齡是胎兒染色體疾病的危險(xiǎn)因素，而在胎兒染色體疾病臨床診斷中，采用血清學(xué)篩查聯(lián)合NIPT法可提高產(chǎn)前診斷效率，值得進(jìn)一步推廣。

［1］邱潔，楊曉華，方虹，等.血清學(xué)篩查聯(lián)合胎兒非整倍體產(chǎn)前無(wú)創(chuàng)基因檢測(cè)臨床應(yīng)用價(jià)值的研究［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)工程，2013，21（4）：3-5.

［2］侯朝暉，劉華平，陳冰，等.無(wú)創(chuàng)DNA檢測(cè)在唐氏綜合征產(chǎn)前篩查中的作用［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，13（8）：1508-1510.

［3］鄭芳秀，周琴，陳英蘋(píng)，等.高通量基因測(cè)序在胎兒性染色體非整倍體產(chǎn)前檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值［J］.南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2015，35（12）：1796-1798.

［4］侯桂玉，郭躍文，蔣麗江，等.超聲NT、血清學(xué)篩查與無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)聯(lián)合篩查高危孕婦胎兒染色體非整倍體580例分析［J］.深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志，2016，26（10）：21-23.

［5］石曉麗，周麗娟.無(wú)創(chuàng)基因檢測(cè)技術(shù)在產(chǎn)前篩查胎兒染色體非整倍體中的應(yīng)用［J］.中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2015，23（12）：11-12.

［6］眭建忠，陳蔚瑜.無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)在胎兒非整倍體篩查中的應(yīng)用［J］.中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2016，24（2）：22-24.

［7］周燕，冀小平.探討無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)胎兒染色體非整倍體技術(shù)的應(yīng)用［J］.疾病監(jiān)測(cè)與控制，2015，9（4）：247-250.

［8］王詩(shī)雅，王慧芳.聯(lián)合早孕期超聲檢查與無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)篩查染色體非整倍體［J］.中國(guó)產(chǎn)前診斷雜志（電子版），2015，7（2）：21-26.

［9］梅瑾，王小華，王昊，等.無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測(cè)在胎兒染色體非整倍體篩查中的應(yīng)用［J］.中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2014，15（3）：238-240.

［10］何怡，余勛，趙穎，等.胎兒非整倍體產(chǎn)前無(wú)創(chuàng)基因檢測(cè)的臨床應(yīng)用［J］.廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，32（3）：310-312.

（吳迪編輯）

ClinicalValue of SerologicalScreening Combined w ith Non-invasive Prenatal Testing for FetalAneup loidy

TAN Zhenhua，WANGYueying，LIAOZihui，LIHaizhu
（DepartmentofClinical Laboratory，The FirstPeople's Hospitalof Zhaoqing City ofGuangdong Province，Zhaoqing 526020，China）

Objective：To explore the clinical value of serological screening combined with non-invasive prenatal testing（NIPT）for fetal aneuploidy.Methods thods：A total of 2 000 cases of pregnantwomen whowere detected with NIPT technology for fetal chromosomal diseases in our hospital from Jun 2015 to Jun 2016 were selected as subjects，and the clinical data of serological screening and NIPTwere retrospectively analyzed.Results sults：The detection rate of chromosome abnormalitywith serological screening was 14.35%（287/2 000），the detection rate with NIPT was 8.90%（178/2 000），and the combined detection rate was 5.60%（112/2 000）.The results showed that the sensitivity，specificity and Youden index of serological screening combined with NIPT in diagnosis of chromosomal abnormalitywere significantly higher than those of serological screening or NIPT（P＜0.05）.The detection rate of chromosome abnormality in the rightagematernalgroup was 2.14%（28/1 307），and the detection rate in the elderlymaternal group was 9.24%（64/693），and the difference between the two groupswas statistically significant（P＜0.05）.Conclusions sions：Age is an important factor leading to fetal chromosomal diseases.The serological screening combined with NIPT can improve the efficiency of prenataldiagnosis forelderly pregnantwomen in early stage，and ithas certain promotion value.

serologicalscreening；NIPT；fetalchromosomaldiseases；aneuploidy

R714.53

A

1008-2344（2017）03-0215-03

10.16753/j.cnki.1008-2344.2017.03.009

2016-11-08