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    云芝糖肽水提醇沉提取工藝

    2017-07-05 10:59:58梁曉婷廣東嶺南職業(yè)技術(shù)學(xué)院
    食品安全導(dǎo)刊 2017年15期
    關(guān)鍵詞:糖肽勻漿均質(zhì)

    □ 梁曉婷 廣東嶺南職業(yè)技術(shù)學(xué)院

    云芝糖肽水提醇沉提取工藝

    □ 梁曉婷 廣東嶺南職業(yè)技術(shù)學(xué)院

    避免了有毒溶劑使用,本文建立了水提醇沉法提取純化云芝糖肽的技術(shù)方法,以期為云芝糖肽無公害生產(chǎn)提供參考。

    云芝糖肽;水提醇沉;提取工藝

    云芝糖肽系從云芝或培養(yǎng)的菌絲中提取純化的結(jié)合蛋白多糖,是良好的生物效應(yīng)調(diào)節(jié)劑,對遷延性肝炎、慢性肝炎有良好的療效,能抑制癌細胞的增生,屬于國家II類新藥。目前,云芝糖肽大多是采用水提醇沉的方式提取,但使用到氯仿和正丁醇等有毒有機溶劑。為了解決這個缺點和不足,本研究采用熱水浸提,無水乙醇沉淀,并優(yōu)化該提取工藝。

    1 試驗部分

    1.1 儀器與試劑

    潔凈工作臺、分析天平、電熱恒溫培養(yǎng)箱、分光光度計和高速冷凍離心機。經(jīng)優(yōu)選LN-CV0707云芝菌株液體發(fā)酵菌絲體[1]。牛血清白蛋白、福林-酚試劑、無水乙醇均為分析純。

    1.2 云芝糖肽水提醇沉提取

    準(zhǔn)確稱取1 g(精度至0.1 mg)凍干的菌絲體粉末,加入蒸餾水50 mL,按一定溫度、時間、料水比,置恒溫水浴鍋中提取2次,然后9 000 r/ min離心20 min,上清液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮定容至2 mL,加入6 mL無水乙醇,混勻后4 ℃過夜醇沉后9 000 r/min離心10 min,得到的沉淀真空干燥,即得云芝糖肽。云芝糖肽提取率(%)=云芝糖肽質(zhì)量/菌粉質(zhì)量×100%。

    1.3 云芝糖肽中肽含量的測定

    取0.25 mg/mL牛血清白蛋白溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8 mL和1.0 mL分別置于具塞試管中,加水定容至1.0 mL,加5.0 mL福林-酚試劑甲溶液。搖勻后放置5 min,加0.5 mL福林-試劑乙溶液,混勻后放置20 min,在500 nm波長處測定其吸收度,并建立回歸方程。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 不同破碎方式對云芝糖肽提取率的影響

    考察了高壓均質(zhì)和勻漿機勻漿兩種破碎方式對菌絲體內(nèi)云芝糖肽提取率的影響。試驗結(jié)果表明:高壓均質(zhì)法破碎提取的云芝糖肽提取率(62.3 mg/g)較高,比勻漿機勻漿提取率高(48.7 mg/g)。從提取率大小考慮,應(yīng)選擇高壓均質(zhì)法,但由于在小試階段的發(fā)酵液較少,勻漿機勻漿法成本低。因此,選擇勻漿機勻漿作為小試階段云芝糖肽水提醇沉提取方式。

    2.2 提取溫度對云芝糖肽提取率的影響

    考察了50、60、70、80、90 ℃和100 ℃等不同提取溫度對云芝糖肽提取率的影響(圖1)。從圖1中可知,隨著提取溫度的升高,云芝糖肽提取率逐漸升高;當(dāng)溫度為40℃時,云芝糖肽提取率僅約為80 ℃的一半;當(dāng)溫度升至80 ℃以上時,云芝糖肽提取率下降,而且趨于平緩。考慮溫度過高可引起變性等可能性,采用提取溫度80 ℃為宜。

    圖1 提取溫度對云芝糖肽提取率的影響圖

    2.3 提取時間對云芝糖肽提取率的影響

    考察了不同提取時間對云芝糖肽提取效果的影響。試驗結(jié)果表明:提取時間對云芝糖肽提取效果具有顯著的影響,當(dāng)提取時間在1~2 h,云芝糖肽提取率隨著提取時間的增加而增大,當(dāng)提取時間為2 h時,提取率最大,約為48.3 mg/g;當(dāng)繼續(xù)增大時,云芝糖肽提取率卻呈逐漸下降趨勢;當(dāng)提取時間為5 h時,提取率呈逐漸穩(wěn)定趨勢。為了獲得較高的提取率,并且提高提取效率,本研究選擇提取時間為2 h。

    2.4 料水比對云芝糖肽提取率的影響

    考察了提取云芝糖肽的過程中,不同料水比對云芝糖肽提取效果的影響。試驗結(jié)果表明:當(dāng)料水比從1︰3遞增至1︰6時,云芝糖肽提取率隨著料水比的增加而增大;當(dāng)料水比為1︰6時,提取率最高,為48.6 mg/g;當(dāng)料水比繼續(xù)增大時,云芝糖肽提取率卻呈逐漸下降趨勢。為了獲得較高的提取率,并且降低濃縮工藝,本研究選擇料水比為1︰6。

    2.5 提取次數(shù)對云芝糖肽提取率的影響

    考察了提取次數(shù)對云芝糖肽提取率的影響。試驗結(jié)果表明:當(dāng)提取次數(shù)為1次時,提取率約占總量的86.0%;當(dāng)提取次數(shù)為2次時,提取率約占總量的96.7%;當(dāng)提取次數(shù)為3次時,提取率約占總量的98.6%。繼續(xù)增加提取次數(shù)時,會消耗能源和成本,并增加后續(xù)工藝難度,故選擇提取次數(shù)為2次。

    3 結(jié)論

    本文建立了水提醇沉提取純化云芝糖肽的方法,研究發(fā)現(xiàn):高壓均質(zhì)法破碎云芝菌絲體比勻漿法處理效果好;水提醇沉提取工藝最佳條件為:料水比1︰6,提取溫度80 ℃,提取時間2 h,提取次數(shù)2次。

    [1]李巖,周藝,楊鳳瓊,等.一種云芝糖肽的提取及分級提純工藝:CN 104262503A[P].2015-01-07.

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