活禽批發(fā)市場(chǎng)內(nèi)家禽停留時(shí)間與H9亞型禽流感病毒檢出的關(guān)系

葛 杰，葛菲菲，劉 健，楊德全，李 鑫，鞠厚斌，周錦萍

（上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201103）

·研究論文·

活禽批發(fā)市場(chǎng)內(nèi)家禽停留時(shí)間與H9亞型禽流感病毒檢出的關(guān)系

葛 杰，葛菲菲，劉 健，楊德全，李 鑫，鞠厚斌，周錦萍

（上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201103）

為了解上海市活禽批發(fā)市場(chǎng)中家禽停留時(shí)間與H9亞型禽流感病毒檢出之間的關(guān)系，連續(xù)4 d每隔24 h在2個(gè)批發(fā)市場(chǎng)各4個(gè)固定攤位共采集960份活禽咽喉/泄殖腔拭子樣品。采用H9亞型熒光RT-PCR方法對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的推移，H9亞型禽流感病毒在同一個(gè)攤位和不同攤位間傳播擴(kuò)散，并且隨著家禽在批發(fā)市場(chǎng)內(nèi)停留時(shí)間的延續(xù)，H9亞型禽流感病毒的陽(yáng)性檢出率明顯上升，72 h時(shí)最高達(dá)到24.58%，提示我們應(yīng)加強(qiáng)活禽批發(fā)市場(chǎng)禽流感的監(jiān)測(cè)和監(jiān)管。

H9亞型禽流感病毒；活禽批發(fā)市場(chǎng)；家禽停留時(shí)間

H9N2亞型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）雖然是低致病性禽流感病毒，但由于其分布廣泛并能引起家禽的免疫抑制，一旦與其他病原混合感染或造成繼發(fā)感染，可引起禽類的高發(fā)病率和高死亡率[1]。同時(shí)H9N2 AIV除感染禽類外，還可以突破種間屏障感染人類[2,3]。研究顯示，H9N2 AIV為1997年首次感染人的香港H5N1禽流感病毒和本次的H7N9流感病毒等提供了內(nèi)部基因[4]，提示H9N2在禽流感遺傳、演化過程中起了十分重要的作用?；钋菔袌?chǎng)一直被認(rèn)為在禽流感病毒的存留、繁殖以及傳播過程中扮演著十分重要的角色[5,6]。為了解上海市活禽市場(chǎng)中H9N2 AIV的繁殖情況，連續(xù)4 d每隔24 h在本市兩大活禽批發(fā)市場(chǎng)采集樣品進(jìn)行熒光RTPCR檢測(cè)，并對(duì)H9亞型AIV隨著家禽停留時(shí)間的延長(zhǎng)而發(fā)生的變化進(jìn)行了系統(tǒng)分析。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 MagPure Viral RNA Kit for MagMax Express核酸提取試劑盒由美吉公司提供；H9亞型禽流感熒光RT- PCR試劑盒由深圳匹基生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 采集樣品分布情況 在上海市兩家活禽批發(fā)市場(chǎng)各4個(gè)固定攤位每隔24 h采集活禽樣品，連續(xù)4 d，期間這些活禽一直停留在其固定的攤位內(nèi)沒有出售，其中A批發(fā)市場(chǎng)攤位號(hào)為23、19、6、11，B批發(fā)市場(chǎng)攤位號(hào)為16、22、72、27。每個(gè)攤位每天采集30份咽喉/泄殖腔拭子樣品，總計(jì)960份，其中鴿240份，雞720份。

1.3 檢測(cè)方法 對(duì)棉拭樣品用H9亞型禽流感熒光RTPCR試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 熒光RT-PCR檢測(cè)結(jié)果 2個(gè)活禽批發(fā)市場(chǎng)各攤位樣品H9 AIV檢測(cè)結(jié)果詳見表1。共檢測(cè)出H9亞型禽流感病毒核酸陽(yáng)性131份，平均陽(yáng)性率13.65%，其中A批發(fā)市場(chǎng)30份，陽(yáng)性率6.25%，B批發(fā)市場(chǎng)101份，陽(yáng)性率21.04%。

表1 活禽批發(fā)市場(chǎng)內(nèi)不同攤位家禽不同停留時(shí)間H9亞型禽流感病毒檢出結(jié)果Table 1 Virus detection results from different stalls over the residence time in live poultry wholesale markets

續(xù)表1

2個(gè)活禽批發(fā)市場(chǎng)不同時(shí)間H9 AIV 檢測(cè)結(jié)果見表2。24 h時(shí)H9亞型禽流感的檢出率就達(dá)到了10%，72 h和96 h的H9亞型禽流感的檢出率明顯高于24 h，最高時(shí)達(dá)24.48%。批發(fā)市場(chǎng)內(nèi)家禽停留時(shí)間與H9 AIV檢出率的關(guān)系見圖1。

表2 批發(fā)市場(chǎng)內(nèi)家禽不同停留時(shí)間時(shí)H9 AIV檢出情況Table 2 H9 AIV detection results at different residence time in live poultry wholesale markets

圖1 批發(fā)市場(chǎng)內(nèi)家禽停留時(shí)間與H9 AIV檢出率的關(guān)系Fig.1 The relationship between the residence time and the number of H9 AIV positive samples in live poultry wholesale markets

3 討論

8個(gè)攤位中有6個(gè)攤位在24、48 h均無病毒檢出，但72、96 h時(shí)有病毒檢出，有1個(gè)攤位24 h檢測(cè)到3份樣品有病毒感染，96 h則30份樣品全部呈陽(yáng)性。結(jié)果表明，隨著家禽在批發(fā)市場(chǎng)停留時(shí)間的推移，禽流感病毒不僅在同一個(gè)攤位中傳播迅速，也在不同攤位間交叉?zhèn)鞑?，?4 h平均陽(yáng)性率10%到72 h最高時(shí)達(dá)到24.58%。同時(shí)我們也發(fā)現(xiàn)，A批發(fā)市場(chǎng)攤位19和攤位6都是在72 h時(shí)檢測(cè)到H9亞型禽流感陽(yáng)性樣本，但隨后在96 h卻檢測(cè)不到了。推測(cè)有幾種原因，比如采樣的規(guī)范性或者雞群隨著時(shí)間的推移逐漸適應(yīng)環(huán)境等，導(dǎo)致排毒降低，直到消失。

一般禽鳥類帶病毒率極低[7,8]，但本次檢測(cè)結(jié)果顯示活禽交易市場(chǎng)H9亞型禽流感污染率高，不同批次禽鳥持續(xù)疊加會(huì)增加禽流感污染的風(fēng)險(xiǎn)。批發(fā)市場(chǎng)內(nèi)較封閉的環(huán)境和較多的灰塵和氣溶膠、不同來源和不同地區(qū)禽群在批發(fā)市場(chǎng)內(nèi)的匯集、家禽之間擁擠的空間和家禽的應(yīng)激反應(yīng)等，增加了病毒在這些家禽中的水平傳播和增殖擴(kuò)散，提示H9N2亞型AIV在我國(guó)傳統(tǒng)的活禽市場(chǎng)體系中，存在一個(gè)顯著的擴(kuò)散和增殖的過程，這可能是該病毒在我國(guó)持續(xù)高強(qiáng)度流行的一個(gè)重要原因。另一方面高陽(yáng)性率的H9亞型禽流感病毒的存在，為H5N1禽流感病毒的變異和H7N9新流感病毒的形成提供豐富的內(nèi)部基因[9,10]，從而更突顯出活禽批發(fā)市場(chǎng)在禽流感防控和公共衛(wèi)生中的作用。

因此，加強(qiáng)活禽市場(chǎng)的衛(wèi)生管理，實(shí)行活禽不過夜、定期休市消毒等措施，可阻斷或減少病毒在活禽市場(chǎng)的循環(huán)傳播和增殖。條件成熟時(shí)可以采取取締活禽市場(chǎng)，或用電子活禽市場(chǎng)（如家禽飼養(yǎng)者和零售者直接通過互聯(lián)網(wǎng)進(jìn)行客戶到客戶的交易，從而避開傳統(tǒng)的活禽批發(fā)市場(chǎng)這個(gè)中介環(huán)節(jié)）取代傳統(tǒng)的活禽市場(chǎng)，從而防控該病毒的擴(kuò)散蔓延和變異重組。

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CORRELATION BETWEEN RESIDENCE TIME AND INFECTION OF H9 SUBTYPE AVIAN INFLUENZA VIRUS AT LIVE POULTRY WHOLESALE MARKETS

GE Jie, GE Fei-fei, LIU Jian, YANG De-quan, LI Xin, JU Hou-bin, ZHOU Jin-ping

(Shanghai Animal Disease Control Center, Shanghai 201103, China)

In order to investigate correlation between residence time and detection of H9 subtype Avian Infl uenza virus at live poultry wholesale markets, oropharyngeal and cloaca samples were taken every day for 4 days from four fi xed stalls of two markets in Shanghai. A total of 960 samples were collected and tested using H9 subtype real-time RT-PCR kit. The results showed that H9 subtype Avian Infl uenza virus spread rapidly within and between booths and stalls over the residence time. The H9 positive rate was 10% within one-day residence and increased to 24.58% on the third day. These results indicated strict surveillance and supervision of avian infl uenza was very necessary at live poultry wholesale markets.

H9 subtype Avian Infl uenza virus; live poultry wholesale market; residence time

S852165

A

1674-6422（2017）01-0032-04

2016-02-17

滬農(nóng)科攻字（ 2015 ）第 1-11 號(hào)

葛杰，女，主要從事動(dòng)物疫病防控工作

周錦萍，E-mail:shzjpvet @163.com