川芎嗪對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎肺功能損傷IL-17與Foxp3的影響①

羅文哲，金玄俊，梁立春，劉 洋，王建杰，王 石，張雪松，劉程偉，王新安，倪強(qiáng)強(qiáng)

(1.佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2.赤峰市計(jì)劃生育服務(wù)中心，內(nèi)蒙古自治區(qū) 024000)

川芎嗪對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎肺功能損傷IL-17與Foxp3的影響①

羅文哲1，金玄俊1，梁立春1，劉 洋1，王建杰1，王 石1，張雪松1，劉程偉1，王新安1，倪強(qiáng)強(qiáng)2

(1.佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2.赤峰市計(jì)劃生育服務(wù)中心，內(nèi)蒙古自治區(qū) 024000)

目的：探討川芎嗪對大鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)肺功能損傷IL-17與Foxp3表達(dá)。方法：40只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、川芎嗪低劑量組、川芎嗪高劑量組和雷公藤陽性藥物對照組。應(yīng)用免疫組化方法觀察大鼠肺組織IL-17與Foxp3的表達(dá)。結(jié)果：和正常組相比，模型組IL-17表達(dá)增強(qiáng)，F(xiàn)oxp3表達(dá)降低(P<0.05)；經(jīng)過川芎嗪和雷公藤藥物處理后，IL-17表達(dá)降低而Foxp3表達(dá)有所回升(P<0.05)。結(jié)論：川芎嗪能改善RA大鼠肺部炎癥，機(jī)制與調(diào)控IL-17與Foxp3表達(dá)有關(guān)。

川芎嗪；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；肺損傷

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RheumatoidArthritic，RA) 是目前一種發(fā)病原因不明確的緩慢性、以炎癥改變的滑膜炎為主要的系統(tǒng)性自身免疫疾病。其主要特征為手、足較小關(guān)節(jié)的多關(guān)節(jié)、侵襲性、對稱性關(guān)節(jié)炎癥改變，通常伴隨關(guān)節(jié)以外的器官受累及[1]。肺臟具有豐富的血管和結(jié)締組織，因而常見肺功能改變，表現(xiàn)為通氣功能障礙，小氣道阻塞等，與臨床癥狀、體征及實(shí)驗(yàn)室檢查具有很高的相關(guān)性[2]。川芎嗪是免疫調(diào)節(jié)劑，近年來發(fā)現(xiàn)川芎嗪對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及肺功能損傷具有很好的治療作用[3～6]。但其作用機(jī)制尚不詳盡，沒有關(guān)于IL-17和Foxp3影響的研究。本研究進(jìn)一步探討川芎嗪對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠肺損傷的機(jī)制。

1 材料

1.1 動(dòng)物準(zhǔn)備

雌性清潔級(SD)大鼠40只，體重為(200±20)g，由大連醫(yī)科大學(xué)購買，按常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲食、飲水。

1.2 藥品與試驗(yàn)用試劑

川芎嗪由山東省濰坊市制藥廠有限公司生產(chǎn)。雷公藤多苷(TGT)是由湖北省黃石飛云制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)。弗氏完全佐劑(FCA)是由美國Sigma公司購買。免疫組化試劑盒購自于北京市中山金橋生物技術(shù)有限公司。

2 方法

2.1 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)動(dòng)物模型制作及其分組

清潔級(SD)大鼠40只，于動(dòng)物右后肢足跖部的皮內(nèi)注射Freund's完全佐劑，劑量為0.1mL，致炎，制成佐劑性關(guān)節(jié)炎模型，致炎48d。分為5組，分別為模型對照組、川芎嗪大劑量治療組、低劑量治療組、(雷公藤多苷)陽性對照組。另取8只大鼠作為正常對照組。藥物處理于致炎41d開始給藥，注射生理鹽水0.8mL于模型對照組大鼠，鹽酸川芎嗪注射液143.0mg/kg注射于川芎嗪高劑量組大鼠、川芎嗪小劑量組大鼠注射71.5mg/kg川芎嗪注射液、雷公藤60.0mg/kg注射于陽性對照組大鼠。每日1次，于腹腔注射，持續(xù)給藥7d，正常進(jìn)食、進(jìn)水。于最后一次給藥24h后，對氣管和雙肺進(jìn)行完整分離，取出右肺中葉固定，石蠟包埋，切片，留待檢測。

2.2 免疫組化方法檢查肺組織IL-17與Foxp3的表達(dá)

取肺組織，應(yīng)用免疫組化SP法，按試劑盒的說明書進(jìn)行操作，圖像下采集，隨機(jī)選擇5個(gè)視野，應(yīng)用萊卡Qwin軟件進(jìn)行計(jì)算免疫組化染色的OD值。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 川芎嗪對大鼠肺組織中IL-17與Foxp3表達(dá)的影響

肺組織IL-17與Foxp3蛋白表達(dá)(見圖1、2及表1)。在圖中可見，模型對照組圖中的炎癥細(xì)胞表達(dá)明顯增高，經(jīng)過雷公藤和川芎嗪治療后的組織中炎性細(xì)胞明顯減少。和正常組相比較，模型組IL-17表達(dá)增強(qiáng)，F(xiàn)oxp3表達(dá)降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；經(jīng)過川芎嗪和雷公藤藥物處理后，IL-17表達(dá)降低而Foxp3表達(dá)有所回升，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖1 肺組織IL-17蛋白表達(dá)(10×40)(A.正常組；B.模型組；C.TGT組；D.川芎嗪高劑量組)

圖2 肺組織Foxp3蛋白表達(dá)(10×40)(A.正常組；B.模型組；C.TGT組；D.川芎嗪高劑量組)

表1 RA大鼠肺組織IL-17、Foxp3蛋白表達(dá)水平

注： 和模型對照組比較*P<0.05。

4 討論

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎除關(guān)節(jié)受損外，通常累及內(nèi)臟器官，常見的是肺與胸膜的受損。資料顯示由RA導(dǎo)致的肺功能損傷其發(fā)病率已達(dá)到了50%～80%。課題組之前以川芎嗪治療大鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎肺損傷，證明了川芎嗪的治療效果[6]。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步地探討川芎嗪對RA大鼠肺組織IL-17和Foxp3蛋白的影響。IL-17為CD4+T細(xì)胞的新亞型，表達(dá)多種炎性細(xì)胞因子， 如IL-6、IL-17a和TNF-α等。IL-17是T細(xì)胞產(chǎn)生的一種前炎癥細(xì)胞因子，是誘導(dǎo)早期炎癥反應(yīng)的啟動(dòng)因素， 與自身免疫的調(diào)節(jié)密切相關(guān)。IL-17能夠誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)機(jī)體的多種免疫應(yīng)

答反應(yīng)，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病等自身免疫性疾病表達(dá)增加[7]。本研究結(jié)果顯示，模型組IL-17表達(dá)增強(qiáng)，經(jīng)過川芎嗪和雷公藤藥物處理后，IL-17表達(dá)降低。證明川芎嗪能抑制T細(xì)胞分泌IL-17，進(jìn)而抑制炎癥性因子IL-6等的產(chǎn)生，發(fā)揮緩解RA肺損傷作用。Foxp3是CD4+CD25+Treg細(xì)胞上特異性表達(dá)的一種核轉(zhuǎn)錄因子。CD4+CD25+Treg細(xì)胞是與IL-17相反功能的CD4+T細(xì)胞亞群。在多種自身免疫性疾病中，Treg的數(shù)量明顯減少，F(xiàn)oxp3表達(dá)降低[8]。先前的研究證明，川芎嗪緩解RA所致肺部炎癥機(jī)制是調(diào)控TGF-β1/Smads信號，TGF-β1和Smad3水平表達(dá)增加，Smad7表達(dá)減弱[6]。本實(shí)驗(yàn)證明，經(jīng)過川芎嗪治療后，F(xiàn)oxp3表達(dá)增強(qiáng)。我們認(rèn)為合理的解釋是川芎嗪激活了TGF-β1，減弱了Smads的活化作用，進(jìn)而活化下游Foxp3的轉(zhuǎn)錄。可見，IL-17和Foxp3相互拮抗調(diào)節(jié)RA的進(jìn)展，也同樣作為有效藥物的評價(jià)指標(biāo)。

[1]劉健,范海霞,楊梅云,等.佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠肺功能、肺部HRCT及細(xì)胞因子的變化[J].中國臨床保健雜志,2006，9(6):586-588

[2]王建杰,張濤,羅文哲,等.川芎嗪對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-12mRNA表達(dá)的影響[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2005，28(2):18-19

[3]林濤,呂昊哲,馬玉霞,等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清單核細(xì)胞趨化蛋白-1水平及與間質(zhì)性肺疾病的關(guān)系[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2010，26(1):59-63

[4]王建杰,羅文哲,齊建祥,等.川芎嗪對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型大鼠關(guān)節(jié)滑液RANK/RANKL/OPG表達(dá)的影響[J].中國老年學(xué)雜志,2011，31(5):833-835

[5]王建杰,閆冬梅,羅文哲,等.川芎嗪對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠外周血RANK/RANKL/OPG途徑的干預(yù)作用研究[J].國際免疫學(xué)雜志,2010，33(1):68-72

[6]羅文哲,喬曉峰,葉之慧,等. 川芎嗪對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎肺功能損傷大鼠TGF-β1/Smads的作用[J].中國老年學(xué)雜志,2017，37(1):42-44

[7]JarvisLB,MatyszakMK,DugglebyRC,etal.Autoreactivehumanperiph-eralbloodCD8+Tcellswitharegulatoryphenotypeandfunction[J] .EurJImmunol, 2005，35(10):2896-2908

[8]PiletteC,Nouri-AriaKT,JacobsonMR,etal.Grasspollenimmunotherapyinducesanallergen-specificIgA2antibodyresponseassociatedwithmucosalTGF-betaexpression[J] .JImmunol,2007，178:4658-4666

1.黑龍江省教育廳面上項(xiàng)目，編號：12531074；2.黑龍江省佳木斯大學(xué)校級面上項(xiàng)目，編號：S2011-004。

羅文哲(1976～)男，黑龍江佳木斯人，碩士，副教授，碩士，研究生導(dǎo)師。

王建杰(1968～)女，黑龍江東寧人，博士，教授，博士研究生導(dǎo)師。E-mail：jmsdxjianjie@163.com。

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