非小細胞肺癌組織EGFR、TTF-1、CK7表達及其意義

吳琳，張?zhí)K寧

(中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院，沈陽 110004)

非小細胞肺癌組織EGFR、TTF-1、CK7表達及其意義

吳琳，張?zhí)K寧

(中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院，沈陽 110004)

目的 探討表皮生長因子(EGFR)、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1(TTF-1)、細胞角蛋白7(CK7)在非小細胞肺癌(NSCLC)發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 選擇89例NSCLC患者手術切除腫瘤組織標本為觀察組，60例肺良性腫瘤患者的肺組織標本為對照組。采用免疫組化SABC法檢測兩組EGFR、TTF-1、CK7表達。分析觀察組EGFR、TTF-1、CK7表達與NSCLC患者臨床病理參數(shù)的關系。結果 觀察組EGFR、TTF-1、CK7陽性表達率均高于對照組，P均<0.05；觀察組EGFR、TTF-1、CK7表達與腫瘤類型、分化程度、臨床分期及淋巴結轉(zhuǎn)移有關(P均<0.05)。與患者性別、年齡、腫瘤體積無關(P均>0.05)。Spearman秩相關分析顯示，觀察組EGFR表達與TTF-1、CK7表達呈正相關(rs分別為0.339、0.627，P均<0.05)，TTF-1表達與CK7表達呈正相關(rs=0.591，P<0.05)。結論 EGFR、TTF-1、CK7可能參與了NSCLC的發(fā)生、發(fā)展過程，檢測EGFR、TTF-1、CK7表達有助于NSCLC的早期診斷和病情評估。

非小細胞肺癌；表皮生長因子；甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1；細胞角蛋白7

肺癌是臨床常見的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤，具有發(fā)病率和病死率高的特點，非小細胞肺癌(NSCLC)約占原發(fā)性肺癌的85%[1]。隨著環(huán)境污染的加劇和人口老齡化的到來，肺癌發(fā)病率呈明顯上升趨勢。NSCLC是肺癌最常見的病理類型之一。早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早期評估NSCLC患者的病情對制定科學合理的治療方案，改善預后，提高患者生命質(zhì)量有重要價值。隨著分子生物學研究的快速發(fā)展，腫瘤標志物用于輔助診斷惡性腫瘤成為研究熱點。研究表明[2]，表皮生長因子受體(EGFR)異常表達與腫瘤細胞的血管生成、侵襲轉(zhuǎn)移等密切相關。甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1(TTF-1)是肺腺癌的一個特異性較高的血清學標志物，TTF-1表達升高參與了肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程，亦與肺腺癌的病情嚴重程度、預后有關[3]。細胞角蛋白7(CK-7)在乳腺癌、肺腺癌組織中陽性表達率升高，且參與了二者的發(fā)生、發(fā)展過程[4]。但是目前尚未見有關NSCLC組織中EGFR、TTF-1、CK7表達變化及其臨床意義的相關研究。2015年1月～2016年12月，我們觀察了NSCLC患者腫瘤組織中EGFR、TTF-1、CK-7表達變化，現(xiàn)分析結果，探討EGFR、TTF-1、CK-7在NSCLC發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取同期收治的89例NSCLC患者為觀察組，其中男62例，女27例；年齡33～78(58.7±6.5)歲。按照2010年美國癌癥聯(lián)合會(AJCC)第8版[5]和國際抗癌聯(lián)盟(UICC)第7版[6]肺癌診斷、病理分型和臨床分期標準，本組腺癌57例，鱗癌32例；腫瘤直徑<3 cm者27例，≥3 cm者62例；分化程度為中低分化51例，高分化38例；臨床分期Ⅰ～Ⅱ期44例，Ⅲ～Ⅳ期45例；有淋巴結轉(zhuǎn)移33例，無淋巴結轉(zhuǎn)移56例。納入標準：①均經(jīng)纖維支氣管鏡檢查以及病理組織學檢查確診為NSCLC；②術前未接受過放化療；③術后生存3個月以上。排除標準：①妊娠期以及哺乳期婦女；②心臟功能不全者；③肝、腎功能障礙者；④合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤以及可能影響本研究結果的疾病患者。另選取同期收治的60例肺良性腫瘤患者為對照組，其中男39例，女21例；年齡30～81(56.2±7.6)歲。兩組年齡、性別分布具有可比性。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準，患者或家屬均簽署知情同意書。

1.2 腫瘤組織EGFR、TTF-1、CK-7表達檢測 分別取兩組手術切除的腫瘤組組織標本，石蠟包埋并切片。采用免疫組化鏈霉親和素生物素過氧化物酶復合物(SABC)法檢測EGFR、TTF-1、CK-7表達。具體步驟：組織切片行乙醇水化，以濃度為0.1 mol/L PBS浸洗5 min，重復3次；將1份30%的過氧化氫與10份蒸餾水混合后，室溫下將組織切片靜置10 min，滅活內(nèi)源性酶，然后PBS浸洗3次；熱修復組織切片，每間隔10 min重復1次，共2次，冷卻后采用濃度為0.1 mmo/L PBS浸洗3次。將5%的牛血清白蛋白封閉液(A液)滴加在切片上，在室溫下保存20 min；滴加工作濃度為1∶100的一抗(EGFR單克隆抗體、TTF-1單克隆抗體、CK7單克隆抗體)，4 ℃下過夜。以0.1 mmol/L PBS浸洗3次，于切片上滴加工作濃度為1∶100的二抗(生物素化山羊抗小鼠IgG，B液)，37 ℃放置20 min。以0.1 mmol/L PBS浸洗3次，滴加試劑SABC(C液)后在37 ℃環(huán)境下放置20 min。以0.1 mmol/L PBS浸洗5 min，重復4次，最后取1 mL蒸餾水并在其中滴加顯色劑DAB中A、B、C試劑1滴，充分混勻后將切片加入其中并在室溫下進行顯色反應，光鏡下觀察染色結果。主要試劑EGFR單克隆抗體、TTF-1單克隆抗體、CK7單克隆抗體均購自于福州邁新公司，即用型免疫組化SABC法檢測試劑盒購于武漢博士德公司(生產(chǎn)批號：SA1021)。 結果判定： EGFR陽性染色主要存在于細胞質(zhì)或細胞膜中，呈棕黃色或棕褐色顆粒；TTF-1陽性染色主要存在于細胞核中，呈黃色或棕黃色顆粒；CK7陽性染色主要存在于細胞質(zhì)中，呈黃色或棕黃色顆粒。由2位經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師進行雙盲閱片。采用半定量方法判斷兩組標本EGFR、TTF-1、CK-7染色結果。分別對鏡下陽性染色細胞百分比和染色強度給予評分。陽性染色細胞百分比：每張切片上觀察5個高倍視野(×400)，每個視野計數(shù)200個細胞，計算陽性染色細胞百分比(陽性染色細胞/1 000×100%)，陽性染色細胞數(shù)<5%為0分，5%～<25%為1分，25%～<50%為2分，50%～<75%為3分，75%～100%為4分。陽性染色強度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩者計分相乘，0分者為陰性，≥1分為陽性。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗和Fisher確切概率法，相關性分析采用Spearman秩相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組EGFR、TTF-1、CK7陽性表達率比較 觀察組及對照組EGFR陽性表達率分別為59.55%(53/89)、18.33%(11/60)，TTF-1表達陽性率分別為53.93%(48/89)、11.67%(7/60)，CK7陽性表達率分別為57.30%(51/89)、16.67%(10/60)；兩組比較P均<0.05。

2.2 觀察組EGFR、TTF-1、CK7表達的相關性 經(jīng)Spearman秩相關分析，觀察組EGFR表達與TTF-1、CK7表達呈正相關(r分別為0.339、0.627，P均<0.05)，TTF-1表達與CK7表達呈正相關(rs=0.591，P<0.05)。

2.3 NSCLC組織EGFR、TTF-1、CK7表達與NSCLC患者臨床病理參數(shù)的關系 EGFR、TTF-1、CK7陽性表達與腫瘤類型分化程度、臨床分期、淋巴結轉(zhuǎn)移均有關(P均<0.05)，與患者性別、年齡、腫瘤直徑均無關(P均>0.05)。見表1。

表1 NSCLC組織EGFR、TTF-1、CK7表達與患者臨床病理參數(shù)的關系[例(%)]

3 討論

肺癌早期篩查技術的應用以及個體化的治療方案降低了肺癌的死亡率，但其5年生存率仍低于15%，高復發(fā)率是目前臨床攻克肺癌的難點[8,9]。NSCLC發(fā)病隱匿，早期缺乏特異性的臨床癥狀和體征，大部分患者確診時已處于中晚期，或已發(fā)生轉(zhuǎn)移，延誤了手術治療的最佳時機[10]。隨著對肺癌分子生物學的深入研究，腫瘤分子標志物用于輔助診斷惡性腫瘤成為研究熱點。目前常用到的腫瘤標志物包括糖類抗原、胚胎抗原、腫瘤相關的酶、細胞角蛋白以及癌基因等[11]。尋找特異性和敏感性高的腫瘤標志物有助于早期診斷并評估NSCLC患者的病情，從而為制定患者的針對性、個體化治療方案提供指導[12]。

EGFR是ErbB家族成員中的跨膜糖蛋白，是一種酪氨酸激酶型受體。研究發(fā)現(xiàn)，50%～80%的NSCLC患者腫瘤組織中存在不同程度的EGFR高表達[13]；EGFR基因突變率高達49.1%[14]。病理生理學研究發(fā)現(xiàn)，EGFR的過度表達與腫瘤細胞的血管生成、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等密切相關。TTF-1分子量為38 kD，是由14q13染色體上的NKX2-1基因所編碼，用于調(diào)節(jié)組織特異性表面活性載脂蛋白A、B、C、Clara細胞抗原以及T1α表達的蛋白質(zhì)。TTF-1在人類胚肺以及成年肺中可持續(xù)表達，是維持肺正常發(fā)育和功能的重要蛋白質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，TTF-1異常表達與肺部多種疾病密切相關，而在肺腺癌組織中TTF-1呈特異性高表達，可作為鑒別診斷原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肺腺癌的重要標志物[15]。CK7主要表達于大多數(shù)的正常組織腺上皮以及移行上皮細胞中，其在乳腺、卵巢以及肺等腺癌組織中呈陽性表達，是鑒別診斷惡性腫瘤的重要免疫標志物；CK7對肺腺癌診斷的敏感性和特異性較高，分別為98.36%和86.42%[16]。

本研究觀察組EGFR、TTF-1、CK7陽性表達率均高于對照組，提示NSCLC組織中EGFR、TTF-1、CK7呈不同程度的高表達，三者可用于NSCLC的輔助診斷。研究發(fā)現(xiàn)，TTF-1、CK7表達與腫瘤病理類型有關，肺腺癌組織中TTF-1、CK7陽性表達率高于肺鱗癌[11]，本研究得到相似結果。本研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC組織分化程度低、臨床分期晚以及有淋巴結轉(zhuǎn)移者上述標志物的陽性表達率分別高于分化程度高、臨床分期早以及無淋巴結轉(zhuǎn)移者。提示EGFR、TTF-1、CK7可能介導并參與了NSCLC的發(fā)生、發(fā)展過程，檢測EGFR、TTF-1、CK7表達可能有助于NSCLC的早期診斷和病情評估。有報道，TTF-1、CK7陽性表達與患者性別和腫瘤大小有關[11]，本研究結果與之不符，可能與本研究選取的樣本量相對較小有關。本研究相關分析結果顯示，觀察組癌組織EGFR與TTF-1、CK7表達呈正相關，TTF-1與CK7呈正相關，提示三者聯(lián)合檢測有助于NSCLC的早期診斷及病情評估。

綜上所述，NSCLC組織中EGFR、TTF-1、CK7表達上調(diào)。EGFR、TTF-1、CK7可能參與了NSCLC的發(fā)生、發(fā)展過程。EGFR、TTF-1、CK7表達情況可為NSCLC的早期診斷和病情評估提供依據(jù)。

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張?zhí)K寧(E-mail: zhangsn@sj-hospital.org)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.20.015

R730.51

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1002-266X(2017)20-0049-03

2017-01-28)