婦舒丸質(zhì)量控制研究

張艷+李忠瓊+張恩榮+劉艷+張興元

摘要：目的研究婦舒丸質(zhì)量控制方法。方法采用HPLC法測(cè)定婦舒丸中芍藥苷含量；對(duì)微生物限度檢查方法進(jìn)行適用性研究。結(jié)果芍藥苷在0.057117～3.42702μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R2=0.9999；平均回收率98.24%，RSD 1.57%（n=6）。婦舒丸對(duì)5種試驗(yàn)菌無(wú)抑菌作用，回收率均在50%～200%之間。結(jié)論芍藥苷含量測(cè)定方法準(zhǔn)確可靠，可用于婦舒丸質(zhì)量控制。婦舒丸可采用常規(guī)法（1ml/皿）進(jìn)行微生物限度檢查。

關(guān)鍵詞：婦舒丸；芍藥苷含量；微生物限度檢查

中圖分類號(hào)：R285文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B文章編號(hào)：1007-2349（2017）06-0077-03

【Abstract】Objective： To study the quality control method of Fushu Pill. Methods： HPLC was used to dtermine content of paeoniflorin in Fuzhu Pill. The applicability of microbial limit test method was studied. Results： The linear range of paeoniflorin was good in the range of 0.057117 to 3.42702μg， R2=0.9999 and its average recovery rate was 98.24% and RSD was 1.57% （n=6）. Fushu Pill had no bacteriostatic effect on the five kinds of test bacteria and the recovery rate was between 50% and 200%. Conclusion： The determination method of paeoniflorin is accurate and reliable， which can be used for the quality control o Fushu. The conventional method （1ml/皿） can be used for the microbial limit check of Fushu Pill.

【Key words】Fushu pil， paeoniflorin content， microbial limit check

婦舒丸收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十二冊(cè)，由黨參、當(dāng)歸、肉桂、白芍、川芎、牡丹皮等23味藥組成。具有補(bǔ)氣養(yǎng)血，調(diào)經(jīng)止帶的功效；用于氣血凝滯，子宮寒冷，月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)等癥?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有顯微鑒別和當(dāng)歸、肉桂薄層色譜鑒別，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)目[1]，為提高婦舒丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，更有效地控制其質(zhì)量，筆者對(duì)其進(jìn)行了有關(guān)質(zhì)量控制方法研究，增加了芍藥苷含量測(cè)定，對(duì)微生物限度檢查方法進(jìn)行了適用性研究。

1含量測(cè)定

1.1儀器與試藥Agilent-1100液相色譜儀，F(xiàn)UNGILAB超聲儀，Sartorius BS224S天平，DENVER TB-215D天平，芍藥苷對(duì)照品（110736-201539，中國(guó)食品藥品檢定研究院），水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)）。

1.2方法與結(jié)果

1.2.1溶液制備

1.2.1.1對(duì)照品溶液制備取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成芍藥苷對(duì)照品貯備液（0.4897 mg/mL），精密取1 mL貯備液，加甲醇稀釋至10 mL，即得芍藥苷對(duì)照品溶液（0.04897 mg/mL）。

1.2.1.2供試品溶液制備取婦舒丸適量研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（250W，33KHz）45 min，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，蒸干，殘?jiān)?0 mL水分次洗入分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次30 mL，合并正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.2.1.3陰性供試品溶液制備按處方取除去白芍、牡丹皮的其余藥味，按婦舒丸制備工藝及上述供試品溶液制備方法制成陰性供試品溶液。

1.2.2色譜條件色譜柱：Waters SunFire C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（25：75），流速1.0 mL·min-1；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于3000。

1.2.3專屬性試驗(yàn)取“1.2.1”項(xiàng)下的3種溶液，按“1.2.2”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)。結(jié)果陰性供試品無(wú)干擾，表明方法專屬性良好（見圖1）。

1.2.4線性關(guān)系考察取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇配制成7個(gè)濃度對(duì)照品溶液（0.0057117、0.0114234、0.0228468、0.057117、0.114234、0.228468、0.342702 mg/mL），按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量10 μL。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=1366.7X-0.015，R2=0.9999，芍藥苷進(jìn)樣量在0.057117～3.42702 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

1.2.5精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗(yàn)分別精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液（0.04897 mg/mL）10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，芍藥苷峰面積RSD為0.21%。

取同一批號(hào)的婦舒丸樣品（批號(hào)620942）按1.2.1.2項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算芍藥苷含量，結(jié)果平均含量為1.1633 mg/g，RSD為1.27%。

取同一供試品溶液，分別間隔0、4、8、12、18、24 h按上述色譜條件測(cè)定芍藥苷峰面積，RSD為1.72%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.2.6加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的婦舒丸（芍藥苷含量1.1633 mg/g）樣品0.5 g，共取6份，分別加入芍藥苷對(duì)照品溶液（0.4897 mg/mL）1.2 mL，按1.2.1.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備加樣供試品溶液。按上述色譜條件測(cè)定并計(jì)算，結(jié)果平均回收率為98.24%、RSD 為1.57%。

1.2.7樣品測(cè)定按上述方法測(cè)定，10批婦舒丸樣品芍藥苷含量在0.59～1.16 mg/g之間，平均含量為0.74 mg/g。

2微生物限度檢查方法學(xué)適用性試驗(yàn)

2.1儀器與試藥HVE-50型立式高壓滅菌鍋、FD-240型電熱鼓風(fēng)干燥箱、LRH-250型生化培養(yǎng)箱、HTY-761型勻漿儀。胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（批號(hào)：150801）、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：150806）、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào)：150801）均為北京路橋技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)。銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104]、金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]均從中國(guó)菌種保藏中心獲得。

2.2方法與結(jié)果

2.2.1溶液配制

2.2.1.1試驗(yàn)用菌液制備接種銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24 h，用0.9%無(wú)菌氯化鈉以10倍稀釋法制成50～100 cfu/mL的菌懸液，備用；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18～24 h，用0.9%無(wú)菌氯化鈉以10倍稀釋法制成50～100 cfu/mL的菌懸液，備用；接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5～7d，用0.9%無(wú)菌氯化鈉將孢子洗脫，同時(shí)用0.9%無(wú)菌氯化鈉以10倍稀釋法制成50～100c fu/mL的孢子懸液，備用。

2.2.1.2供試液制備取婦舒丸10 g，加入100 mL PH7.0無(wú)菌氯化鈉蛋白胨緩沖液，置勻漿儀上1 min，混合均勻，制成1∶10的供試液。

2.2.2試驗(yàn)方法①試驗(yàn)組：常規(guī)法：取供試液9.9 mL，分別加入制備好的5種試驗(yàn)菌菌懸液0.1 mL，混勻，取1 mL注皿，加入相應(yīng)培養(yǎng)基，培養(yǎng)后觀察結(jié)果并計(jì)數(shù)，結(jié)果見表1。②菌液組：取制備好的5種試驗(yàn)菌菌懸液各0.1 mL，分別加入9.9 mL稀釋液中，混勻，取1 mL注皿，加入相應(yīng)培養(yǎng)基，培養(yǎng)后觀察結(jié)果并計(jì)數(shù)。③供試品對(duì)照組：采用常規(guī)法（1 mL/皿）操作。

2.2.3結(jié)果同一批次婦舒丸的3次平行試驗(yàn)結(jié)果顯示，采用常規(guī)法（1 mL/皿）對(duì)需氧菌計(jì)數(shù)，霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)進(jìn)行研究，各試驗(yàn)菌的回收率均在50%～200%之間（見表2），表明該樣品對(duì)5種試驗(yàn)菌均無(wú)抑制作用，該方法符合《中國(guó)藥典》2015年版要求，在日常檢驗(yàn)中可用常規(guī)法（1 mL/皿）對(duì)需氧菌計(jì)數(shù)，霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)。

3討論

婦舒丸中的主藥白芍具養(yǎng)血調(diào)經(jīng)功能，《中國(guó)藥典》白芍項(xiàng)下以芍藥苷為指標(biāo)測(cè)定其含量[2]，文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)婦舒丸進(jìn)行了黃芩苷及丹皮酚的含量測(cè)定[3～4]，為從原料到制劑統(tǒng)一控制質(zhì)量，故以芍藥苷為指標(biāo)對(duì)婦舒丸進(jìn)行含量測(cè)定。含量測(cè)定中供試品超聲提取后直接進(jìn)樣樣品難于分離，不能達(dá)到含量測(cè)定要求，采用超聲提取后萃取處理可使供試品得到良好分離。考察不同超聲時(shí)間及不同萃取次數(shù)，結(jié)果表明本文規(guī)定方法可行?？疾觳煌鲃?dòng)相配比、不同色譜柱、不同儀器，含量結(jié)果無(wú)明顯差異，表明含量測(cè)定方法適應(yīng)性、實(shí)用性較好。

微生物限度控制是藥品質(zhì)量控制的基本要求。根據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版的規(guī)定，供試品的微生物計(jì)數(shù)方法應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的微生物計(jì)數(shù)[5]。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，婦舒丸在《中國(guó)藥典》2010年版執(zhí)行期間，可采用常規(guī)法（1 mL/皿）進(jìn)行微生物限度檢查[6]，而該項(xiàng)目《中國(guó)藥典》2010年版和2015年版的檢驗(yàn)方法差別甚大，故對(duì)婦舒丸的微生物檢查方法適用性進(jìn)行研究，結(jié)果表明婦舒丸在日常檢驗(yàn)中可用常規(guī)法（1 mL/皿）對(duì)需氧菌計(jì)數(shù)，霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)。

3.3藥品質(zhì)量控制方法研究及標(biāo)準(zhǔn)提高是一項(xiàng)長(zhǎng)期持續(xù)的工作，筆者將繼續(xù)研究婦舒丸各個(gè)方面的質(zhì)控方法，以全面控制該藥品質(zhì)量。

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