液相色譜技術(shù)在定量分析中的應(yīng)用

盧肖蘭

隨著我國科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展進(jìn)步，色譜分離柱等低噪音高靈敏的檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)也隨之出現(xiàn)，據(jù)相關(guān)研究表明，液相色譜技術(shù)方法非常穩(wěn)定，能夠快速分離檢測物質(zhì)，并且檢驗結(jié)果十分準(zhǔn)確，在實驗室中非常受到液相色譜工作者的青睞，液相色譜技術(shù)已經(jīng)成為實驗室中應(yīng)用最為廣泛的技術(shù)。比如：液相色譜工作者常常把液相色譜技術(shù)應(yīng)用到定量分析中，包括我們?nèi)粘Ｉ钪兴车氖称窢I養(yǎng)素含量分析、血和藥濃度檢測以及生物活性物質(zhì)分析等等。在本文中，筆者將對液相色譜技術(shù)在定量分析中的應(yīng)用進(jìn)行研究探討。

液相色譜儀的組成

液相色譜儀是一種對混合物質(zhì)進(jìn)行分離的分析鑒定儀器，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，現(xiàn)代液相色譜儀也發(fā)展得更加符合實驗室工作要求。在液相色譜儀的組成當(dāng)中，高壓輸液泵、色譜柱以及檢測器占有非常重要的位置，具體如下所述：

液相色譜儀之高壓輸液泵。由于高壓輸液泵具有耐高壓、輸出流量比較穩(wěn)定以及流量精度極高等特點，其在液相色譜分析中應(yīng)用極為廣泛，它通過柱塞泵電機驅(qū)動凸輪運轉(zhuǎn)，將柱塞桿往液缸內(nèi)部反復(fù)攪動，使泵腔內(nèi)部的液體周期性的以高壓狀態(tài)排出，從而使樣品進(jìn)入色譜柱當(dāng)中，讓樣品從色譜柱填料與流動相分離開來。

液相色譜儀之色譜柱。液相色譜儀色譜分離是根據(jù)樣品的不同成分之間的配比系數(shù)，通過色譜柱實現(xiàn)多次吸附和分析，從而將樣品混合物分離出來。其中，色譜柱一般由色譜柱頭螺絲、色譜柱篩板、色譜柱管、色譜柱填料以及色譜柱堵頭組成，其內(nèi)壁一般由直形不銹鋼管材料制作，這種材料都是經(jīng)過高度拋光處理的材料，可用于有機溶劑以及水溶性緩沖鹽液等。另外，為了更好的實現(xiàn)樣品混合物質(zhì)分離，液相色譜固定相基質(zhì)一般采用無機基質(zhì)和有機基質(zhì)兩種，無機基質(zhì)可以通過樣品物質(zhì)表面引入多個功能基因進(jìn)行不同程度的分離，有機基質(zhì)化學(xué)物質(zhì)相對穩(wěn)定，可以保證樣品混合物質(zhì)分離的準(zhǔn)確性和高精度性。

液相色譜儀之檢測器。

在液相色譜儀中，除了色譜柱和高壓輸液泵是非常重要的分析儀器之外，檢測器同樣也具有非常重要的作用。檢測器主要用于檢測樣品混合物在經(jīng)過色譜柱分離之后其成分濃度的變化，為定量分析提供相應(yīng)的數(shù)據(jù)。其中，檢測器主要分為UVD（紫外線吸收檢測器）、FLD（熒光檢測器）以及電化學(xué)檢測器等等。UVD（紫外線吸收檢測器）是以上三種檢測器中應(yīng)用范圍最為廣泛的檢測器，它利用自身紫外線光可以吸收的特點來檢測樣品混合物質(zhì)濃度，靈敏性非常高，并且不具有破壞性。FLD（熒光檢測器）可以吸收一定長度的波長的光，可以用來做梯度分析，雖然沒有UVD（紫外線吸收檢測器）應(yīng)用的范圍廣，但是作為選擇性的檢測器還是非常不錯的。至于電化學(xué)檢測器，這是一種靈敏度極強的選擇器，它的固體工作電極主要是使用玻璃碳電極材料制作，壽命較其他檢測器極長。

液相色譜技術(shù)在定量分析中的預(yù)處理技術(shù)

由于天然樣品的構(gòu)成非常復(fù)雜，實驗室液相色譜工作人員在進(jìn)行天然樣品成分分析時，都需要進(jìn)行預(yù)處理，將天然樣品的組成成分進(jìn)行提取，再進(jìn)一步純化濃縮，才能得到準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。在下文中，筆者講為大家介紹一些常用的天然樣品預(yù)處理方法，以供大家分析研究。

預(yù)處理技術(shù)之沉淀提取。沉淀提取在預(yù)處理技術(shù)中是一種比較傳統(tǒng)的提取方法，它具有操作簡單以及經(jīng)濟適用的特點。它主要是通過在天然樣品中添加沉淀劑，讓天然樣品中的大分子在不進(jìn)行分析的情況下就可以沉淀出來，然后再通過離心操作，選取上清液分析天然樣品成分。這種方法非常適合生理體液和組織體液樣品的定量分析，不僅節(jié)約了檢測成本，還能使檢驗結(jié)果更加準(zhǔn)確。

預(yù)處理技術(shù)之溶劑萃取。溶劑萃取是指將天然樣品的成分進(jìn)行提取、濃縮。往往在天然樣品中添加的萃取劑越多，提取被測物質(zhì)的次數(shù)也就越多，但是相對應(yīng)的萃取率也就更高。這種方法一般用于血漿藥物的濃度分析。

預(yù)處理技術(shù)支持固相萃取。據(jù)調(diào)查顯示，固相萃取是當(dāng)前預(yù)處理技術(shù)中應(yīng)用最多的方法，它主要用于生物材料的藥物提取以及活性物質(zhì)提取。液相色譜工作者將需要檢測的物質(zhì)放入常壓色譜柱當(dāng)中去除雜質(zhì)，然后再用相應(yīng)的溶劑進(jìn)行洗脫，將被測物質(zhì)純化。在這個過程中，常會用到氧化鋁以及樹脂等固定相。

預(yù)處理技術(shù)之超臨界流體萃取。進(jìn)行超臨界流體萃取操作一般要在固定的溫度以及壓力下進(jìn)行，通過特殊裝置，將固體樣品用超臨界的二氧化碳流體進(jìn)行提取。由于超臨界流體萃取方法擴散速度非?？?，分離操作不僅環(huán)保而且省時，常用于提取一些脂溶性物質(zhì)。

液相色譜技術(shù)在定量分析中的儀器實驗技術(shù)

儀器實驗技術(shù)在液相色譜技術(shù)中占有非常重要的位置，它主要涉及流動相配置、色譜柱使用方法以及檢測器使用技術(shù)三個方面，具體如下所述：

流動相配置。實驗室液相色譜工作者在進(jìn)行流動相配置時，必須使用符合有關(guān)規(guī)定和要求的溶劑和純水。另外，為了保證流動相配置的質(zhì)量，配置所使用的溶劑必須使用達(dá)到液相色譜純度的溶劑，配置所用的純水則必須使用電阻率為18歐姆米。配置完成之后還需要注意通過0.14微米的過濾膜過濾，這樣不僅能有效保證流路管道通暢，還能防止溶劑被污染。除此之外，在進(jìn)行液相色譜系統(tǒng)之前，工作人員需要對流動相進(jìn)行脫氣操作，防止氣體溶解在溶劑中，破壞溶劑的純度。

色譜柱使用方法。色譜柱作為液相色譜儀進(jìn)行分離的重要組成部分，液相色譜工作者要注意保持色譜柱的效果以及延長色譜柱的壽命，如果色譜柱出現(xiàn)以上兩個任一問題，對待測樣品的檢測結(jié)構(gòu)都非常不利。因此，在使用色譜柱時，要在進(jìn)樣閥和色譜柱中間使用相應(yīng)的過濾器，如在線過濾器，還要避免使用對固定相具有強侵蝕性的流動相組合，從而延長色譜柱的使用時間。

檢測器使用技術(shù)。在液相色譜儀中，有三種常用的檢測儀器，不同的檢測器有不同的使用方法，檢測器的好壞直接關(guān)系到液相色譜在定量分析中的應(yīng)用，因此，必須對每一種檢測器都有所了解，并掌握主要的三種檢測儀器。

紫外檢測器在使用時需要注意周圍環(huán)境，一定要在固定的溫度和壓力下進(jìn)行，否則會影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度。熒光檢測器相比紫外檢測器靈敏度要高出很多，在使用時不能使用不穩(wěn)定或具有較強吸收力的溶劑來作為流動相，并且在進(jìn)行熒光檢測時，待檢測的樣品需要配成低于0.000006g/mL濃度的樣品。電化學(xué)檢測器一般用于痕量分析，這種檢測器對電極精密度要求非常高，因此，平時要注意對工作電極的保護，保證電化學(xué)檢測器的靈敏度。另外，在使用電化學(xué)檢測器時，需要注意消除氣泡，減少金屬離子干擾被測樣品。

綜上所述，液相色譜技術(shù)在定量分析中應(yīng)用應(yīng)該注意預(yù)處理技術(shù)和儀器實驗技術(shù)的使用，為了保證樣品定量分析結(jié)果的準(zhǔn)確度，在使用預(yù)處理技術(shù)時需要根據(jù)樣品的屬性選擇科學(xué)合理的預(yù)處理方法，并且按照相關(guān)規(guī)定和要求使用檢測儀器。