HIV抗體單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者的確認(rèn)及回歸策略*

霍寶鋒 張?zhí)戾?劉智敏 林奕斌 溫芳丹

HIV抗體單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者的確認(rèn)及回歸策略*

霍寶鋒①張?zhí)戾觫賱⒅敲簪倭洲缺螈贉胤嫉あ?/p>

目的：探究人類免疫缺陷病毒（HIV）抗體單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者的確認(rèn)及回歸策略。方法：選擇2014年1月-2016年6月本站獻(xiàn)血經(jīng)兩種試劑檢測(cè)的80 876人次獻(xiàn)血者，篩選HIV抗體檢測(cè)單試劑反應(yīng)性為146例，屏蔽3～6個(gè)月后，對(duì)其進(jìn)行召回，分別留取血液樣本后，對(duì)其進(jìn)行復(fù)查。結(jié)果：召回的146例單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者經(jīng)HIV抗體酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑檢測(cè)顯示，仍表現(xiàn)為單試劑陽性9例，雙試劑陽性1例。對(duì)雙試劑陽性進(jìn)行檢測(cè)，顯示其為核酸和確證試驗(yàn)均為陽性。結(jié)論：對(duì)單側(cè)反應(yīng)性的獻(xiàn)血者采用ELISA、NAT檢測(cè)進(jìn)行隨訪，獻(xiàn)血者的權(quán)益能得到有效保障，減少獻(xiàn)血者流失，緩解用血緊張局面。對(duì)無償獻(xiàn)血前獻(xiàn)血者具體情況征詢，并實(shí)施血液篩查，對(duì)低危固定的無償獻(xiàn)血者建立長期檔案，加強(qiáng)檢測(cè)管理，有效降低血液報(bào)廢率，保證血液安全。核酸檢測(cè)有助于提高無償獻(xiàn)血者的血液質(zhì)量，降低經(jīng)血傳播HIV等病毒的風(fēng)險(xiǎn)，保障臨床安全用血；同時(shí)，臨床應(yīng)加強(qiáng)兩種檢測(cè)方式的聯(lián)合應(yīng)用，最大限度的避免病毒感染漏檢現(xiàn)象。

HIV抗體； 單側(cè)反應(yīng)性； 獻(xiàn)血者； 確認(rèn)； 回歸

HIV的傳播途徑有血液、性接觸、母嬰傳播等，為保障用血安全，我國將HIV檢測(cè)作為常規(guī)血液篩查項(xiàng)目之一[1-2]。目前，臨床對(duì)HIV檢測(cè)主要為ELISA及核酸兩種。ELISA具有特異性好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、成本低、易于自動(dòng)化等優(yōu)勢(shì)，在檢測(cè)無償獻(xiàn)血標(biāo)本傳染標(biāo)志物中被普遍應(yīng)用[3-4]。因?yàn)椴煌瑥S家的ELISA試劑敏感性和特異性有所差異，所以出現(xiàn)了單試劑反應(yīng)性。因而，檢測(cè)結(jié)果顯示為假陽性的情況時(shí)有發(fā)生，不僅對(duì)獻(xiàn)血者的權(quán)益和熱情造成傷害，給其造成困惑和恐慌，還會(huì)導(dǎo)致血源浪費(fèi)[5]。本研究選擇在本站獻(xiàn)血且經(jīng)檢測(cè)顯示為單試劑陽性的146例獻(xiàn)血者為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行≥6個(gè)月的屏蔽后實(shí)施追蹤檢測(cè)，分析此類獻(xiàn)血者歸隊(duì)可行性?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年1月-2016年6月在本站獻(xiàn)血經(jīng)兩種試劑檢測(cè)的80 876人次，其中單試劑反應(yīng)性為146例，抗-HIV單試劑呈反應(yīng)性的有146例。分別進(jìn)行酶聯(lián)免疫法試驗(yàn)（ELISA）和病毒核酸檢測(cè)（NAT）檢測(cè)進(jìn)行確認(rèn)。

1.2 儀器和試劑 儀器：全自動(dòng)加樣酶免一體機(jī)、離心機(jī)、全自動(dòng)生化分析儀、熒光定量PCR儀、匯集與核酸提取儀、核酸檢測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)。乙肝表面抗原（HBsAg）試劑由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供（批號(hào)：201305231、201504031等）、丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV）試劑由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供（批號(hào)：201305021、201509021等）、艾滋病抗體（抗-HIV）試劑由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供（批號(hào)：201306021、201508021等）、梅毒螺旋體抗體（抗-TP）試劑由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供（批號(hào)：201308051、201507026等）（酶聯(lián)免疫法）；HBsAg試劑由珠海麗珠試劑股份有限公司提供（批號(hào)：2013025819、2015063823等）、抗-HCV試劑由珠海麗珠試劑股份有限公司提供（批號(hào)：2013025814、2015063813等）、艾滋病抗體（抗-HIV）試劑由珠海麗珠試劑股份有限公司提供（批號(hào)：201306025、201508039等）、梅毒診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）試劑由珠海麗珠試劑股份有限公司提供（批號(hào)：201306011、201508031等）；中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司的核酸血篩試劑（批號(hào)：20130621、201508016等）；檢驗(yàn)所使用試劑均為中國藥品生物制品檢定所批檢合格，所有試劑均在有效期內(nèi)進(jìn)行使用，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 方法 屏蔽3個(gè)月后對(duì)146例單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者進(jìn)行追蹤檢測(cè)，其中有129例經(jīng)信息和電話成功召回，召回率為88.36%。對(duì)召回的獻(xiàn)血者實(shí)施靜脈取血，分別留取血清學(xué)檢測(cè)樣本和核酸檢測(cè)樣本各5 mL，分離血漿和血清，將其保存在2～8 ℃和-18 ℃以下的冰箱中備用。ELISA檢測(cè)：實(shí)施HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP 4項(xiàng)檢測(cè)，分別進(jìn)行雙試劑檢測(cè)，當(dāng)雙試劑存在反應(yīng)性可將其判斷為陽性，單試劑存在反應(yīng)性需進(jìn)行雙孔復(fù)查（采用相同試劑），結(jié)果顯示單孔或雙孔存在反應(yīng)性可將其判斷為陽性，反之則為陰性。HIV核酸檢測(cè)：核酸檢測(cè)時(shí)以8樣本混樣模式進(jìn)行，如8樣本混樣檢測(cè)顯示為陽性，拆分混樣的各樣本，對(duì)其進(jìn)行單份標(biāo)本檢測(cè)，如檢測(cè)結(jié)果為陰性，則判斷核酸檢測(cè)陰性，反之則為陽性。對(duì)目標(biāo)獻(xiàn)血者屏蔽6個(gè)月后留取標(biāo)本，進(jìn)行ELISA和NAT檢測(cè)，決定是否歸隊(duì)。

2 結(jié)果

召回的129例單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者經(jīng)抗HIV抗體ELISA試劑檢測(cè)顯示，抗-HCV、HBsAg、抗-TP均顯示為陰性，抗-HCV仍然表現(xiàn)為單試劑陽性的有9例，雙試劑陽性有1例。對(duì)雙試劑陽性進(jìn)行檢測(cè)，顯示其為核酸陽性，且確證試驗(yàn)陽性。見表1。

表1 追蹤所召回的129例獻(xiàn)血者的檢測(cè)結(jié)果 例

3 討論

輸血是一種通過靜脈經(jīng)血液輸注給患者的治療方法，目前已廣泛應(yīng)用于臨床，且具有無可替代的地位。但受血液安全性影響，輸血治療存在著較大風(fēng)險(xiǎn)，血液質(zhì)量對(duì)治療效果亦具有顯著影響。無償獻(xiàn)血是輸血治療的主要血液來源，降低經(jīng)血傳播風(fēng)險(xiǎn)，尤其是HIV感染，是醫(yī)療部門關(guān)注的重要話題，同時(shí)也是采血站持續(xù)改進(jìn)工作質(zhì)量的首要目標(biāo)[4，6]。我國目前獻(xiàn)血的相關(guān)法律法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)中均沒有涉及血液篩查呈反應(yīng)性時(shí)如何進(jìn)一步給予確認(rèn)的法律規(guī)定以及標(biāo)準(zhǔn)。只是臨床對(duì)獻(xiàn)血者屏蔽和獻(xiàn)血者淘汰有原則性的規(guī)定，對(duì)于呈反應(yīng)性的獻(xiàn)血者均未涉及對(duì)血液篩查假陽性獻(xiàn)血者再次獻(xiàn)血資格的保留和重新回歸獻(xiàn)血隊(duì)伍的規(guī)定。近年來，為了更好地降低獻(xiàn)血者與輸血者兩者之間經(jīng)輸血傳播的病毒性疾病的風(fēng)險(xiǎn)，有效保證血液質(zhì)量，我國采供血機(jī)構(gòu)都在致力于如何提高血液安全的檢測(cè)方法和檢測(cè)手段。隨著血液檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，HIV、HCV感染“窗口期”明顯縮短，而窗口期是指病原感染開始至可采用檢測(cè)方法檢測(cè)出病原時(shí)間。因此，血站工作人員一直將確保血液安全、減小血液傳播疾病風(fēng)險(xiǎn)，尤其是HIV感染作為工作質(zhì)量持續(xù)改進(jìn)的目標(biāo)。對(duì)獻(xiàn)血者所獻(xiàn)的血液進(jìn)行篩查主要目的在于確保血液安全。ELISA檢測(cè)是目前國內(nèi)常用于輸血傳染病標(biāo)志物的檢測(cè)方式之一，具有高特異性和高靈敏性，且成本較低。隨著ELISA檢測(cè)靈敏性的提高，難免會(huì)出現(xiàn)假反應(yīng)性等情況[7-8]。篩查輸血傳染病標(biāo)志物，當(dāng)確證實(shí)驗(yàn)確認(rèn)標(biāo)本陽性的為真陽性，如確證實(shí)驗(yàn)確認(rèn)標(biāo)本陰性則其為假反應(yīng)性。當(dāng)血液檢測(cè)顯示為假反應(yīng)性，會(huì)對(duì)獻(xiàn)血者造成不同程度的心理負(fù)擔(dān)，出現(xiàn)恐慌等不良情緒，還會(huì)造成血液資源浪費(fèi)，甚至?xí)帘潍I(xiàn)血者，使其永久無法獻(xiàn)血[9-10]。孟毓等[11]通過比較分析4種不同的HIV試劑，結(jié)果顯示，單試劑假反應(yīng)性比例為89.53%～96.19%，其中97.6%（33/34）為HIV單試劑假反應(yīng)性。ELISA檢測(cè)結(jié)果受多種因素的影響，包括試劑批間穩(wěn)定性、試劑靈敏性、人為操作、實(shí)驗(yàn)方法學(xué)、標(biāo)本狀態(tài)等。此外，ELISA檢測(cè)過程中也會(huì)受到其他抗體的影響，如自身免疫、風(fēng)濕因子、細(xì)菌或病毒感染等[12-13]。因此，血站有必要對(duì)此類獻(xiàn)血者進(jìn)行召回，實(shí)施再次檢測(cè)。歐盟、澳大利亞、美國等地區(qū)均發(fā)布并建立了針對(duì)獻(xiàn)血者經(jīng)抗-HIV、抗-HCV、HBsAg等檢測(cè)結(jié)果為假反應(yīng)性的歸隊(duì)指南[14-15]。我國也在2013年對(duì)獻(xiàn)血呈假反應(yīng)性者提供了歸隊(duì)檢測(cè)的指導(dǎo)。

本研究結(jié)果顯示，召回的129例單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者經(jīng)抗HIV抗體ELISA試劑檢測(cè)顯示，仍表現(xiàn)為單試劑陽性的有9例，雙試劑陽性有1例。對(duì)雙試劑陽性進(jìn)行檢測(cè)，顯示其為核酸和確證實(shí)驗(yàn)均為陽性。9例單試劑陽性經(jīng)進(jìn)一步檢查，其核酸和確證實(shí)驗(yàn)均顯示為陽性。陜柏峰[15]研究中，在對(duì)單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者實(shí)施召回檢測(cè)，結(jié)果顯示，HIV確證實(shí)驗(yàn)陽性出現(xiàn)1例，這與本研究結(jié)果一致，可見對(duì)單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者實(shí)施歸隊(duì)檢測(cè)的重要性。臨床調(diào)查顯示，艾滋病流行態(tài)勢(shì)已逐漸向一般人群擴(kuò)散，其中廣西、云南、四川、河南、廣東、新疆等6省區(qū)艾滋病感染累計(jì)人數(shù)在全國總數(shù)中約占77.10%[16]。其中艾滋病感染率較高的為廣東省[17]。在獻(xiàn)血者中艾滋病病毒感染率以每年0.002%的比例逐漸上升。由此可見，對(duì)無償獻(xiàn)血者加強(qiáng)相關(guān)知識(shí)宣傳，告知HIV的傳播途徑，促進(jìn)其在獻(xiàn)血前咨詢，對(duì)存在高危行為的獻(xiàn)血者予以甄別排除具有極其重要的意義。

目前對(duì)獻(xiàn)血者檢測(cè)單試劑和雙孔復(fù)查均呈反應(yīng)性，就會(huì)將此獻(xiàn)血者的各血液制品全部報(bào)廢，包括該獻(xiàn)血者血液制品尚未發(fā)出的，如普通冰凍血漿或新鮮冰凍血漿等，并永久屏蔽該獻(xiàn)血者，以確保用血者的安全[18-19]。該做法不僅會(huì)對(duì)獻(xiàn)血者獻(xiàn)血熱情造成極大打擊，還會(huì)給其家庭帶來精神困擾，甚至將原本就緊張的血源浪費(fèi)。因而，實(shí)施既能使假反應(yīng)性獻(xiàn)血者權(quán)益得以保護(hù)，又能確保用血者安全的歸隊(duì)程序尤為重要。本研究建議對(duì)呈單試劑反應(yīng)性的獻(xiàn)血者實(shí)施更加人性化的措施，包括以下幾點(diǎn)：（1）報(bào)廢單試劑反應(yīng)性的獻(xiàn)血者的血液制品，對(duì)其進(jìn)行暫時(shí)屏蔽。（2）專業(yè)人員通過電話將檢測(cè)結(jié)果告知單試劑反應(yīng)性的獻(xiàn)血者，對(duì)其進(jìn)行衷心的感謝，并耐心向單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者進(jìn)行解釋，對(duì)其進(jìn)行心理安撫，避免其出現(xiàn)心理負(fù)擔(dān)，告知其在可在3個(gè)月之后進(jìn)行歸隊(duì)再次抽血檢測(cè)。（3）屏蔽期滿后，安排專人進(jìn)行電話或短信通知，告知單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者可到血站進(jìn)行抽血檢測(cè)，采集兩管靜脈血，通過核酸和確證檢測(cè)者，可將其屏蔽解除，使其歸隊(duì)。并及時(shí)通過電話與其進(jìn)行溝通，解除假反應(yīng)性對(duì)其造成的心理負(fù)擔(dān)，安撫其情緒。并歡迎獻(xiàn)血者進(jìn)行再次獻(xiàn)血；如經(jīng)檢測(cè)獻(xiàn)血者仍顯示為單試劑陽性，對(duì)其繼續(xù)進(jìn)行屏蔽觀察，6個(gè)月之后并將其安排為二次歸隊(duì)流程中，進(jìn)行再次檢測(cè)；如獻(xiàn)血者檢測(cè)結(jié)果為核酸陽性或雙試劑陽性，則對(duì)其進(jìn)行永久屏蔽。（4）安排同一工作人員全程對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行解釋和溝通工作，避免使獻(xiàn)血者產(chǎn)生不被尊重心理。雖然會(huì)將科室的工作量增加，但仍需盡力對(duì)獻(xiàn)血者實(shí)施關(guān)愛。此外，選擇合理的檢測(cè)試劑與檢測(cè)方法，將因假反應(yīng)性所導(dǎo)致的血源與血液浪費(fèi)最大限度的降低。

綜上所述，對(duì)抗-HIV抗體單側(cè)反應(yīng)性的獻(xiàn)血者進(jìn)行隨訪檢測(cè)，既能有效的保障獻(xiàn)血者的權(quán)益，又能減少獻(xiàn)血者流失，緩解臨床用血緊張的局面。對(duì)無償獻(xiàn)血前獻(xiàn)血者具體情況征詢，并實(shí)施血液篩查，對(duì)低危固定的無償獻(xiàn)血者建立長期檔案，加強(qiáng)檢測(cè)管理，有效降低血液報(bào)廢率，保證血液安全。核酸檢測(cè)有助于提高無償獻(xiàn)血者的血液質(zhì)量，降低經(jīng)血傳播HIV等病毒的風(fēng)險(xiǎn)，保障臨床安全用血；同時(shí)，臨床應(yīng)加強(qiáng)兩種檢測(cè)方式的聯(lián)合應(yīng)用，最大限度的避免病毒感染漏檢現(xiàn)象。

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Confirmation and Regression Strategy of HIV Antibody Positive to Single Reagent/

HUO Bao-feng，ZHANG Tian-bi，LIU Zhi-min，et al.//
Medical Innovation of China，2017，14（18）：141-144

Objective：To explore the human immunodeficiency virus （HIV） antibody to confirm single reagent reaction of blood donors and regression methods.Method：80 876 people who had

monitoring for donating blood by two reagents in our hospital from January 2014 to June 2016 were selected，out of which 146 cases positive to single reagent were screened out and isolated for 3 to 6 months，then they were recalled for blood specimen analysis，and reviewed.Result：Out of the 146 donors positive to single reagent，there were still 9 cases positive to single reagent and 1 case positive to double reagents as shown by enzyme linked immunosorbent assay for HIV antibody.Double reagents detection was applied，and the results showed that it was positive to both nucleicacid and confirmatory test.Conclusion：For donors positive to single reagent，ELISA detection for anti-HIV antibody can help to better safeguard the rights and interests of blood donors，reduce the loss of blood donors，thus ensure the safety of clinical blood transfusion.For voluntary blood donor，specific consultation and blood screening given before the donation，establishment of long-term records for low-risk regular blood donors，improvement of the technical level of the staff，and rigorous detection management can help to effectively reduce the blood scrap rate and ensure the safety of blood transfusion.Nucleic acid detection helps to improve the quality of blood donated voluntarily，reduce the risk of transfusion transmitted virus such as HIV，ensure clinical safety of blood utilization；at the same time，the two kinds of detection methods should be combined together to minimize undetected virus infection.

HIV antibody； Unilateral reactivity； Donor； Confirmation； Regression

Shaoguan Center Blood Station，Shaoguan 512026，China

10.3969/j.issn.1674-4985.2017.18.040

2017-03-07） （本文編輯：張爽）

韶關(guān)市衛(wèi)生計(jì)生科研項(xiàng)目（Y17130）

①廣東省韶關(guān)市中心血站 廣東 韶關(guān) 512026

霍寶鋒