芍藥八味湯干預(yù)慢性萎縮性胃炎大鼠胃腸動(dòng)力的作用機(jī)制研究*

河北中醫(yī)學(xué)院(石家莊 050200)

方 芳 王 浩Δ 方 倩 齊香梅ΔΔ 王杰鵬 劉惠聰ΔΔΔ 方朝義

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芍藥八味湯干預(yù)慢性萎縮性胃炎大鼠胃腸動(dòng)力的作用機(jī)制研究*

河北中醫(yī)學(xué)院(石家莊 050200)

方 芳 王 浩Δ方 倩 齊香梅ΔΔ王杰鵬 劉惠聰ΔΔΔ方朝義

目的：研究芍藥八味湯對(duì)慢性萎縮性胃炎(CAG)大鼠血清中胃動(dòng)素(MTL)和胃泌素(GAS)含量的變化，測(cè)定胃排空率及腸推進(jìn)率，探討該方對(duì)胃腸動(dòng)力的影響作用。方法：采用復(fù)合造模法復(fù)制清潔級(jí)Wistar大鼠CAG模型，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為模型組、維霉素組、芍藥八味湯高、低劑量組，并設(shè)不加任何處理的空白對(duì)照組。各用藥組灌胃給藥、各對(duì)照組灌服等容量生理鹽水30 d。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測(cè)血清MTL和GAS含量，觀察胃排空率及腸推進(jìn)率。結(jié)果：與空白對(duì)照組比較，模型組血清MTL、GAS含量明顯降低(P均<0.01)；與模型組比較，各用藥組血清MTL、GAS含量顯著增高(P均<0.01)；高、低劑量組對(duì)MTL含量的影響差異具有顯著性(P<0.01)。模型組胃排空率、腸推進(jìn)率顯著低于空白對(duì)照組(P均<0.01)；用藥組胃排空率、腸推進(jìn)率顯著高于模型組(P均<0.01)。結(jié)論：MTL和GAS含量的降低影響了CAG病理過(guò)程，芍藥八味湯通過(guò)提高CAG大鼠血清MTL和GAS含量，促進(jìn)胃腸動(dòng)力，以恢復(fù)肌體消化機(jī)能。

芍藥八味湯；慢性萎縮性胃炎；胃脘痛；腹痛；胃動(dòng)素；胃腸動(dòng)力；胃排空率；腸推進(jìn)率

慢性萎縮性胃炎(CAG)是一種消化系統(tǒng)多發(fā)病，其病理特點(diǎn)主要表現(xiàn)為胃固有腺體萎縮。慢性胃炎患者中，有癥狀者主要表現(xiàn)為消化不良。[1]近年來(lái)，中醫(yī)在對(duì)CAG的辨證診斷及治法方藥等方面取得一定成績(jī)。芍藥八味湯為臨床效方，用于治療以胃脘痛等為主癥的疾病，取得了滿意的療效，[2]但療效機(jī)制尚未完全明確?；诖?，采用復(fù)合造模法復(fù)制CAG大鼠模型，觀察該組方對(duì)大鼠血清胃動(dòng)素(MTL)、胃泌素(GAS)等指標(biāo)的干預(yù)特征，以及胃排空率及腸推進(jìn)率情況，以期從胃腸動(dòng)力學(xué)角度揭示芍藥八味湯對(duì)CAG的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 選用清潔級(jí)Wistar大鼠100只，♀♂各半，體質(zhì)量180～220 g，河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物合格證號(hào)：1003122。

1.2 藥物 芍藥八味湯(組成：白芍30 g，木香9 g，砂仁6 g，陳皮10 g，枳殼15 g，厚樸、郁金各12 g，炙甘草6 g)購(gòu)于石家莊樂(lè)仁堂藥店，符合國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)。將以上中藥加8倍于總劑量的涼水浸泡30 min，武火煮開(kāi)后改用文火煎30 min，過(guò)濾，藥渣再加入6倍于總劑量的涼水，武火煮開(kāi)，改文火煎30 min，過(guò)濾后加入前次藥液混勻；置于60℃恒溫水浴箱分別濃縮至2 g/mL、1 g/mL的高、低濃度混懸液，4℃冷藏備用。維霉素片,河南復(fù)升藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)：20091221，購(gòu)于石家莊樂(lè)仁堂藥店。使用時(shí)，將維霉素片加0.2%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，配制96 mg/mL濃度的混懸液，裝入消毒瓶中密封，4℃冷藏備用。

1.3 試劑 ⑴造模試劑:①氨水(分析純，含NH325.0%～28.0%)，沈陽(yáng)新興試劑廠，產(chǎn)品批號(hào)：20080714；②脫氧膽酸鈉，Sigma公司，上海銳聰科技發(fā)展有限公司經(jīng)銷(xiāo)，產(chǎn)品批號(hào)：090511。均購(gòu)于石家莊市勃盛化學(xué)試劑有限公司，4℃冷藏保存。制備：分別用蒸餾水配制濃度為0.1%氨水溶液以及20 mmol/L(pH值7.0～7.8)的脫氧膽酸鈉溶液。⑵測(cè)定試劑: ①M(fèi)TL試劑盒，購(gòu)于北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司；②GAS試劑盒，購(gòu)于北京北方生物所。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 CAG大鼠模型的建立：Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w，自造模第1 d起，用0.1%氨水溶液和20 mmol/L的脫氧膽酸鈉溶液，隔日交替足量自由飲用。同時(shí)采用饑飽失常法：2 d足食，1 d 禁食。循環(huán)實(shí)施，連續(xù)90 d。[3]

1.4.1 分組: 隨機(jī)抽取20只空白對(duì)照組大鼠，其他大鼠復(fù)制CAG模型，確認(rèn)模型復(fù)制成功后，采用隨機(jī)數(shù)字表法將CAG模型大鼠分為模型組、維霉素組、芍藥八味湯高劑量組(簡(jiǎn)稱(chēng)“高劑量組”)及芍藥八味湯低劑量組(簡(jiǎn)稱(chēng)“低劑量組”)，每組20只，♀♂各半。

1.4.2 給藥方法: 模型復(fù)制成功后第2 d起灌胃，每日1次，連續(xù)30 d?？瞻讓?duì)照組、模型組：生理鹽水，10 mL/kg·d-1。維霉素組(陽(yáng)性對(duì)照用藥)：96 mg/mL混懸液，0.96 g/kg·d-1(相當(dāng)于臨床成人藥量14倍)。低劑量組：1 g/mL中藥混懸液，10 g/kg·d-1(相當(dāng)于臨床成人藥量7倍)。高劑量組：2 g/mL中藥混懸液，20 g/kg·d-1(相當(dāng)于臨床成人藥量14倍)。灌胃前及灌胃后l h均禁食禁水。

1.5 標(biāo)本采集 末次給藥前禁食18 h，自由飲水。末次給藥后2 h，灌胃5%活性炭末。乙醚麻醉后腹主動(dòng)脈取血，每只采血3 mL。離心提取血清，-20℃凍存。頸椎脫臼法處死大鼠，剖腹，分離腸系膜，剪取上端至幽門(mén)，下端至回盲部的腸管，不加牽引平鋪于木板上，測(cè)其全長(zhǎng)并記錄碳末在小腸中移行的距離，求得推進(jìn)率；另從距賁門(mén)和幽門(mén)各15 mm處離斷并取出全胃，沿胃大彎側(cè)剖開(kāi)，分離胃內(nèi)容物并用濾紙吸干稱(chēng)其重量，計(jì)算胃殘留率。

1.6 指標(biāo)檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行各步驟操作。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清MTL含量變化 與空白對(duì)照組比較，模型組血清MTL含量顯著降低，差異具有非常顯著性(P<0.01)。與模型組比較，3用藥組血清MTL含量均顯著升高，差異具有非常顯著性(P<0.01)。與維霉素組比較，高、低劑量組MTL含量均顯著升高(P<0.01)。高、低劑量組對(duì)MTL含量的作用比較差異亦存在顯著性(P<0.01)。詳見(jiàn)表1。

2.2 各組大鼠血清GAS含量變化 與空白對(duì)照組比較，模型組血清GAS含量顯著降低，差異具有非常顯著性(P<0.01)。與模型組比較，三用藥組血清中GAS含量均明顯升高，差異具有非常顯著性(P均<0.01)。各用藥組比較，高、低劑量組大鼠血清中GAS含量明顯低于維霉素組，差異具有非常顯著性(P均<0.01)。詳見(jiàn)表1。

分組MTL(pg/mL)GAS(pg/mL)空白對(duì)照組291 00±21 95 81 88±19 17 模型組182 89±23 70?32 61±13 02?維霉素組212 11±28 57#64 72±19 07#高劑量組271 68±21 50#△51 67±13 15#△低劑量組235 16±24 56#△▲47 45±12 88#△

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.01；與模型組比較，#P<0.01；與維霉素組，△P<0.01；與高劑量組比較，▲P<0.01

2.3 各組大鼠胃排空率變化 與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠胃排空率明顯降低，差異具有非常顯著性(P<0.01)；與模型組比較，各用藥組大鼠胃排空率顯著升高，差異具有非常顯著性(P均<0.01)。詳見(jiàn)表2。

2.4 各組大鼠腸推進(jìn)率變化 與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠腸推進(jìn)率明顯降低，差異具有非常顯著性(P<0.01)；與模型組比較，各用藥組大鼠腸推進(jìn)率明顯升高，差異具有非常顯著性(P均<0.01)。詳見(jiàn)表 2。

分組胃排空率 腸推進(jìn)率 空白對(duì)照組94 79±16 6765 18±19 84模型組64 48±18 09?23 72±9 32?維霉素組79 84±16 05#41 03±20 64#高劑量組82 43±21 72#47 47±17 78#低劑量組75 24±15 79#39 42±17 58#

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.01；與模型組比較，#P<0.01

3 討論

CAG為臨床常見(jiàn)消化系統(tǒng)疾病。一般認(rèn)為，其發(fā)病是由于多種因素反復(fù)刺激胃黏膜表面，造成黏膜變薄、血管顯露，胃固有腺體萎縮，胃動(dòng)力減弱或喪失，進(jìn)而形成CAG。[4]

CAG屬中醫(yī)學(xué)“痞滿”“胃脘痛”“腹痛”等病癥范疇。其發(fā)病多由外邪侵襲、情志內(nèi)傷、飲食勞倦等導(dǎo)致，病位主要在胃，與肝、脾密切相關(guān)。[5]《醫(yī)學(xué)正傳》云：“木氣被郁，發(fā)則太過(guò)，故民病有土敗木賊之候?！薄杜R證指南醫(yī)案》云：“納食主胃，運(yùn)化主脾，……太陰濕土，得陽(yáng)始運(yùn)；陽(yáng)明陽(yáng)土，得陰自安?！蔽笧槎鄽舛嘌l(xiāng)，若胃氣壅滯，則氣滯血瘀；脾主統(tǒng)血，若脾氣不足，而因虛致瘀；脾虛氣滯，可致五谷腐熟、水液運(yùn)化輸布失調(diào)，痰濕內(nèi)生。

胃腸激素的分泌失調(diào)是引發(fā)胃腸道疾病[6]的主要原因之一。生理狀態(tài)下，MTL通過(guò)刺激胃蛋白酶分泌，促進(jìn)胃腸道蠕動(dòng)及小腸分節(jié)運(yùn)動(dòng)；[7]GAS通過(guò)調(diào)節(jié)胃酸分泌及胃竇收縮，促進(jìn)胃、小腸的分泌活動(dòng)，[8]且對(duì)胃黏膜細(xì)胞有一定的營(yíng)養(yǎng)作用，促進(jìn)細(xì)胞增殖，增強(qiáng)食道下端括約肌張力，調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)。[9]因此，病理狀態(tài)下MTL、GAS與胃腸動(dòng)力障礙的發(fā)生密切相關(guān)。[10]

芍藥八味湯具有疏肝解郁、行氣止痛的功效，是治療胃炎、胃十二指腸潰瘍等消化系統(tǒng)疾病的效方。方中白芍柔肝止痛為君藥；廣木香、砂仁、枳殼、陳皮、厚樸化濕行氣止痛，共為臣藥；郁金活血止痛、行氣解郁，甘草緩急止痛、調(diào)和以上諸藥，二者共為佐使藥?，F(xiàn)代藥理證實(shí)，白芍所含白芍總苷有抗炎、止痛等功效，[11]并且有緩解平滑肌痙攣，保護(hù)胃黏膜的作用。[12]研究證實(shí)，木香在抗心血管疾病、抗炎、抗?jié)兊确矫姹憩F(xiàn)出良好的藥理活性，可顯著增強(qiáng)大鼠胃腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)，使離體大鼠回腸收縮幅度明顯增大。[13]砂仁的主要效應(yīng)部位為揮發(fā)油，有抗炎、止痛、促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)的功效，[14]陳皮對(duì)胃腸道平滑肌有溫和的刺激作用，[15]能興奮胃腸運(yùn)動(dòng)，對(duì)小鼠胃排空及腸推進(jìn)均有促進(jìn)作用，[16]枳殼可能通過(guò)促進(jìn)GAS、MTL的分泌來(lái)調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)，研究表明枳殼水煎液對(duì)正常大鼠小腸推進(jìn)有明顯促進(jìn)作用，[17]厚樸對(duì)小鼠胃腸功能有較強(qiáng)的促進(jìn)作用，[18]郁金提取物抗炎作用較好，而鎮(zhèn)痛作用主要針對(duì)化學(xué)刺激引起的疼痛，這可能與其活血化瘀的功效有關(guān)。[19]

MTL和GAS含量的降低影響了CAG病理過(guò)程，同時(shí)，CAG狀態(tài)下，肌體存在明顯的胃腸動(dòng)力減緩的機(jī)能改變。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，芍藥八味湯能明顯提高M(jìn)TL和GAS的含量，促進(jìn)胃腸動(dòng)力，從而對(duì)胃動(dòng)力障礙性疾病產(chǎn)生一定的防治作用。

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(2017-05-03 收稿)

Study of Mechanism of Peony Eight Ingredients Decoction in Intervening Gastrointestinal Motility of Rats with Chronic Atrophic Gastritis

Hebei University of Chinese Medicine (Shijiazhuang 050200)

FANGFangWANGHaoFANGQianQIXiang-meiWANGJie-pengLIUHui-congFANGChao-yi

Objective: to study the effect of Peony Eight Ingredients Decoction on motilin (MTL) and gastrin (GAS) levels in chronic atrophic gastritis (CAG) rats, to detect gastric emptying rate and intestinal propulsive rate, and to explore the decoction's action on gastrointestinal motility. Methods: CAG models were prepared by compound molding process with clean Wistar rats, which were randomly divided into model group, vitacoenayme group, high dose of decoction group, low dose group, and blank control group. The medication groups were given intragastric administration and the control groups the same volume saline for 30 days. MTL and GAS level were determined with ELISA, gastric emptying and intestinal propulsive rate observed. Results: compared with blank control group, MTL and GAS level of model group were significantly decreased (P<0.01); compared with model group, MTL and GAS level of all medication group were all significantly increased (P<0.01); there was significant difference in effects on MTL between high dose and low dose group (P<0.01). Gastric emptying rate and intestinal propulsive rate were significantly lower than that of blank control group (P<0.01) while medication group significantly higher than model group (P<0.01). Conclusion: The decrease of MTL and GAS affects CAG pathological process, while Peony Eight Ingredients Decoction can increase MTL and GAS levels in CAG rats and promote gastrointestinal motility so as to restore the digestive function.

Eight Ingredients Decoction; CAG; epigastric pain; abdominal pain; MTL; gastrointestinal motility; gastric emptying rate; intestinal propulsive rate

*河北省中醫(yī)藥類(lèi)科研計(jì)劃課題項(xiàng)目：No.2011035

劉惠聰，女，主任中醫(yī)師；方朝義，男，醫(yī)學(xué)博士，博士研究生導(dǎo)師。E-mail:hbfcy@163.com。

R285.5

A

1007-5615(2017)03-0005-04

△河北省中醫(yī)院(石家莊 050011)

△△河北大學(xué)中醫(yī)學(xué)院(保定 071002)

△△△石家莊市中醫(yī)院(石家莊 050051)