蛋白芯片技術(shù)聯(lián)合結(jié)核菌素試驗(yàn)對痰陰肺結(jié)核病快速診斷的價(jià)值研究

劉漢群

(英德市慢性病防治醫(yī)院結(jié)核科，廣東 英德 513000 )

目前，結(jié)核病是一種感染性疾病，且在全球內(nèi)均具有威脅性。其中所有結(jié)核病患者中痰結(jié)核分枝桿菌涂片陰性肺結(jié)核患者所占比例最高[1]。臨床上快速、準(zhǔn)確診斷結(jié)核病有利于病情的及時(shí)診斷和治療。目前，常用的臨床診斷方式分別為蛋白芯片技術(shù)、PPD試驗(yàn)，本次我院特選取近一年來就診痰菌涂陰性肺結(jié)核患者臨床資料加以探究分析，最終結(jié)果匯報(bào)如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料

經(jīng)數(shù)字表法隨機(jī)選取2014-03—2015-03間到英德市慢性病防治醫(yī)院就診痰菌涂陰性肺結(jié)核患者150例，按照隨機(jī)數(shù)字表的方法分為對照組A、對照組B和觀察組，每組50例。對照組A患者50例包括男27例，女23例，患者患病年齡19～68歲，平均患病年齡(45.9±6.7)歲；對照組B患者50例包括男28例，女22例，患者患病年齡20～68歲，平均患病年齡(45.8±6.9)歲；觀察組50例包括男26例，女24例，患者患病年齡19～67歲，平均患病年齡(44.9±6.5)歲。兩組入選的患者入選前均經(jīng)患者及其家屬同意，并簽訂《知情同意書》，上報(bào)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會獲得批準(zhǔn)，同時(shí)兩組患者在臨床資料方面有可比性，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

1.2 方法

對照組A：所有患者使用結(jié)核蛋白芯片進(jìn)行臨床診斷，采取患者靜脈血，然后進(jìn)行血清分離處理。使用結(jié)核芯片系統(tǒng)以及蛋白芯片閱讀儀( 生產(chǎn)廠家：南京大淵生物技術(shù)工程有限公司)，操作過程嚴(yán)格按照說明書指示進(jìn)行：加入 4滴 A 試劑于芯片盒窗口內(nèi),完全浸濕膜后,室溫放置 1 min ,加入待檢測的血清 100 μl,完全滲入后再滴加6滴 B試劑，滲入后，再滴加10滴 C試劑，滲入后，最后再滴加6滴 D試劑 。待反應(yīng)結(jié)束后 30 min 內(nèi),放置蛋白檢測芯片于芯片閱讀儀，加以檢測分析。并按照儀器廠家的說明設(shè)置參數(shù)后對檢查結(jié)果進(jìn)行自動判別。使用結(jié)核生物蛋白芯片試劑盒(南京大淵生物技術(shù)工程有限責(zé)任公司提供)16kDa、38 kDa以及LAM3種特異性抗原進(jìn)行檢測，仍有一種抗體檢測結(jié)果為陽性，則最終結(jié)果為陽性；如果3種抗體均為陰性，則最終結(jié)果判定為陰性。對照組B：所有患者臨床診斷方式為PPD皮試:采用衛(wèi)生部藥品生物制品鑒定所生產(chǎn)的結(jié)核蛋白芯片診斷聯(lián)合PPD試驗(yàn)，PPD試驗(yàn)即使用比例為1:2500的PPD 稀釋液，在患者左前臂下 1/3掌側(cè)位置處注入 0.1 mL，在注入后72小時(shí)之內(nèi)測量局部硬結(jié)，平均直徑在25mm以上則表示檢查結(jié)果為陽性。觀察組：聯(lián)合如上兩種檢查方式。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察和比較三組檢查的陽性檢出率、靈敏度和特異度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)和百分比(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組陽性患者疾病的陽性檢出率

對照組A、對照組B和觀察組陽性檢出率分別為54.00%、52.00%、80.00%，觀察組的陽性檢出率顯著高于其他兩組的陽性檢出率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1：

表1 兩組陽性患者疾病的陽性檢出率

2.2 特異度和靈敏度的統(tǒng)計(jì)與比較

對照組A靈敏度為64.29%，特異度為87.50%；對照組B靈敏度為61.90%，特異度為75.00%；觀察組靈敏度95.24%，特異度87.50%；觀察組的靈敏度明顯高于對照組A、對照組B(P<0.05)，但觀察組的特異度與對照組A、對照組B相比無明顯差異(P>0.05)。詳見表2。

表2 三組檢測特異度和靈敏度比較

注：對照組A與觀察組靈敏度比較(χ2=10.620，P=0.001)，特異度比較(χ2=0.000，P=1.000)。對照組B與觀察組靈敏度比較(χ2=11.949，P=0.001)，特異度比較(χ2=0.000，P=1.000)。

3 討論

肺結(jié)核患者臨床診斷的最常用的檢查手段為PPD結(jié)核菌素試驗(yàn)，這種檢測方法操作簡單，是嬰幼兒和青少年患者臨床診斷的常用方式[2-3]。 PPD皮試檢查結(jié)果為陰性表明排除了各種免疫抑制的因素外 ,患者機(jī)體沒有受到結(jié)核桿菌的自然感染或者人工感染，且一般情況下能夠作為確診患者未感染結(jié)核病的診斷依據(jù)[4-6]，但是對于早期結(jié)核病患者而言，其敏感性較低。因此目前臨床上一直在尋找更為敏感的檢驗(yàn)方式,特別是對菌陰肺結(jié)核。

蛋白質(zhì)芯片是最近幾年內(nèi)新興的一種結(jié)核診斷方式，和基因芯片的作用相類似。蛋白質(zhì)芯片的作用途徑是通過將蛋白質(zhì)點(diǎn)到固相物質(zhì)上,然后和想要檢測的患病組織或細(xì)胞等進(jìn)行“雜交”,最后通過相關(guān)的自動化設(shè)備分析，得出最終結(jié)果[7-9]。這一技術(shù)極大地提高了結(jié)核抗體檢測的靈敏度、特異性,具有簡捷、速度快、大量和成本較低等檢測優(yōu)勢。聯(lián)合結(jié)核蛋白芯片和PPD皮試檢測可互相補(bǔ)充 ,進(jìn)一步提高臨床診斷的敏感度,為肺結(jié)核診斷提供可靠依據(jù)。

對于肺結(jié)核病患者而言，早期診斷和治療是十分關(guān)鍵的。本次研究發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢驗(yàn)的靈敏度明顯高于結(jié)核蛋白芯片檢驗(yàn)和PPD實(shí)驗(yàn)，但是其特異度與兩項(xiàng)檢驗(yàn)單獨(dú)檢測無明顯差異，本次探究分析結(jié)果和李丹[10]等學(xué)者探究的最終結(jié)果相一致，充分的說明了聯(lián)合試驗(yàn)的方式更有利于痰菌涂陰性肺結(jié)核快速診斷，陽性檢出率和檢查的靈敏度均比較高。聯(lián)合使用兩種診斷方式，雖然增加了檢查用時(shí)和費(fèi)用，但是診斷結(jié)果的參考價(jià)值相對更高，臨床診斷可靠性更高，既滿足快速診斷的要求又能保證診斷結(jié)果的可靠性。

綜上所述，蛋白芯片技術(shù)聯(lián)合PPD試驗(yàn)對痰菌涂陰性肺結(jié)核快速診斷的效果非常顯著，相對于單一蛋白芯片技術(shù)臨床診斷的效果更為顯著，應(yīng)推廣聯(lián)合檢查診斷的其臨床應(yīng)用范圍。

[1] 顏京瑞.檢測結(jié)核抗體對結(jié)核病的臨床診斷價(jià)值[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7(2):113-115.

[2] 吳友根,楊興萍,王軍,等.結(jié)核蛋白芯片檢測診斷結(jié)核病的價(jià)值[J].中華感染與化療雜志,2014,14(3):196-198.

[3] 熊勇超,侯月云,趙建忠,等.γ 干擾素釋放試驗(yàn)在檢測結(jié)核分枝桿菌潛伏感染中的應(yīng)用[J].中國防癆雜志,2012,34(9):613-615.

[4] HENRIETTE Stavri，NADIA Bucurenci，IRINA Ulea,etal.Use of recombinant purified protein derivative (PPD) antigens as specific skin test for tuberculosis[J].Indian J Med Res，2012，136(11):799-807.

[5] 周正華，劉錦宏.血清及胸水結(jié)核抗體聯(lián)合檢測對結(jié)核性胸膜炎的診斷價(jià)值[J].臨床肺科雜志，2012，17(4):674 -675.

[6] 毛曉輝，于豐，王勃，等.痰噬菌體聯(lián)合PPD、血清抗結(jié)核抗體檢測對肺結(jié)核的診斷價(jià)值[J].臨床肺科雜志，2011，16(12):1895-1896.

[7] 段慧萍，郭東菊.結(jié)核蛋白芯片檢測對結(jié)核病診斷的價(jià)值[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010,41(8):716-718.

[8] 朱中元，劉元,王海波，等.TB16.3重組蛋白在結(jié)核感染中的診斷價(jià)值研究[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2013，29(8)：791-796.

[9] 朱中元，楊倩,王海波.結(jié)核分枝桿菌MPT81蛋白的表達(dá)及應(yīng)用研究[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2013,13(1)：5-7.

[10] 李丹，杜德兵，陳玉龍，等.T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)、結(jié)核蛋白芯片、抗酸染色涂片和結(jié)核菌素試驗(yàn)對肺結(jié)核病診斷價(jià)值的比較[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2015,25(11)：38-41.