黃尾鲴自然受精與人工授精孵化效果比較研究

郭旭升，倫峰，趙良杰，彭新亮，呂瑛

（1信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院，河南省漁業(yè)生物工程技術(shù)研究中心，河南信陽(yáng)464000；2羅山縣水產(chǎn)局，河南羅山464200）

黃尾鲴自然受精與人工授精孵化效果比較研究

郭旭升1，倫峰1，趙良杰1，彭新亮1，呂瑛2

（1信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院，河南省漁業(yè)生物工程技術(shù)研究中心，河南信陽(yáng)464000；2羅山縣水產(chǎn)局，河南羅山464200）

對(duì)黃尾鲴進(jìn)行人工催產(chǎn)，比較自然受精和人工授精的孵化效果。結(jié)果顯示，人工授精的受精率和出苗率分別為92.00±4.60%和88.30%，優(yōu)于自然受精的81.50±7.00%和84.30%，但人工授精的親魚(yú)成活率僅為57.50%，明顯低于自然受精的90.00%。

黃尾鲴；自然受精；人工授精

黃尾鲴（Xenocypris davidiBleeker）[1]俗稱黃尾、黃片、黃姑子、黃瓜魚(yú)等[2]，是一種中小型淡水魚(yú)類，主要分布于長(zhǎng)江、珠江、閩江及閩東南各溪流，具有食性雜、生長(zhǎng)快、適應(yīng)能力強(qiáng)、易捕撈等特點(diǎn)。黃尾鲴主要以腐殖質(zhì)、有機(jī)碎屑及附生藻類為食，在不增加飼料的情況下，在大水面進(jìn)行黃尾鲴移植、增殖，并加強(qiáng)資源保護(hù)，讓其形成自然種群，不僅能增加單位面積魚(yú)產(chǎn)量，而且對(duì)凈化水質(zhì)、減緩水體富營(yíng)養(yǎng)化進(jìn)程、促進(jìn)主養(yǎng)魚(yú)增產(chǎn)和提高經(jīng)濟(jì)效益有重要作用。該魚(yú)易養(yǎng)殖，飼料來(lái)源廣，養(yǎng)殖成本低，具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和增養(yǎng)殖前景，已成為當(dāng)前水產(chǎn)養(yǎng)殖品種結(jié)構(gòu)調(diào)整中首選的優(yōu)良品種之一。但該魚(yú)性情急躁，應(yīng)激反應(yīng)劇烈，人工繁殖難度較大。為了進(jìn)一步優(yōu)化黃尾鲴人工繁殖技術(shù)，探索不同人工繁殖方式的效果，于2016年5-6月開(kāi)展了自然受精和人工授精對(duì)黃尾鲴孵化效果的對(duì)比試驗(yàn)，以期為黃尾鲴的大規(guī)模人工繁殖提供參考。

1 材料與方法

1.1 親魚(yú)

親魚(yú)為羅山縣小龍山魚(yú)類良種繁育場(chǎng)培育的黃尾鲴，年齡為3齡，平均體質(zhì)量為500 g。

1.2 催產(chǎn)劑

催產(chǎn)劑為魚(yú)用促黃體素釋放激素A2（LRH-A2）和馬來(lái)酸地歐酮（DOM），均購(gòu)自寧波第二激素廠。

1.3 產(chǎn)卵池和孵化設(shè)施

產(chǎn)卵池采用小龍山魚(yú)類良種繁育場(chǎng)的家魚(yú)人工繁殖圓形產(chǎn)卵池，孵化設(shè)施為新建的玻璃鋼孵化缸，為保證孵化效果，孵化缸底部鋪設(shè)環(huán)形管用于充氣，并通過(guò)管道與充氣泵相通。

1.4 親魚(yú)選擇

雄魚(yú)頭部、鰓蓋、胸鰭等處“追星”較多，體表?yè)崦植?，輕壓腹部能擠出乳白色精液；雌魚(yú)則腹部膨大，卵巢輪廓明顯，壓感松軟，在催產(chǎn)之前，用挖卵器取卵檢查，卵粒大小均勻、飽滿、容易分開(kāi)，可以進(jìn)行人工催產(chǎn)。

1.5 雌雄配比及催產(chǎn)

自然受精和人工授精試驗(yàn)同步進(jìn)行，每個(gè)試驗(yàn)親魚(yú)分別為20組；自然受精的雌雄配比為1:1.5；人工授精的雌雄配比為1:1。兩種方法的催產(chǎn)劑用量為10 ug LRH-A2/kg和6 mg DOM/kg，雄魚(yú)減半，于胸鰭基部一次性注射，注射后放入產(chǎn)卵池，微流水刺激，促進(jìn)親魚(yú)性腺成熟。

1.6 自然受精

親魚(yú)注射催產(chǎn)劑后，按雌雄1:1.5的比例放入產(chǎn)卵池中，適時(shí)沖水，讓其自然產(chǎn)卵受精，產(chǎn)卵池水溫為23.5℃，效應(yīng)時(shí)間8 h左右[3]。發(fā)情后的親魚(yú)不停的沿產(chǎn)卵池四周追逐，雄魚(yú)時(shí)而用頭部撞擊雌魚(yú)的腹部，發(fā)情達(dá)到最高潮時(shí)雌雄魚(yú)游泳速度加快，尾部擺動(dòng)頻率增加，并行片刻，交尾發(fā)出“啪”的響聲并翻起浪花，雌雄魚(yú)完成一次產(chǎn)卵交配活動(dòng)。產(chǎn)卵后雌、雄親魚(yú)隨即下沉，不久又重復(fù)產(chǎn)卵活動(dòng)，整個(gè)過(guò)程持續(xù)3-4 h。發(fā)現(xiàn)親魚(yú)大批量發(fā)情產(chǎn)卵后，及時(shí)向產(chǎn)卵池中潑灑10%黃泥漿水[4]，用量為1 kg/m3，使其自行脫粘。產(chǎn)卵結(jié)束15 min后分批取出受精卵，然后漂洗，用于人工孵化。

1.7 人工授精

親魚(yú)注射催產(chǎn)劑后，按雌雄1:1的比例放入產(chǎn)卵池中，適時(shí)沖水觀察，待雌雄親魚(yú)發(fā)情追逐激烈時(shí)，及時(shí)將親魚(yú)撈出進(jìn)行人工授精。為延緩親魚(yú)產(chǎn)卵，發(fā)現(xiàn)親魚(yú)發(fā)情，可在產(chǎn)卵池中下一道拉網(wǎng)將發(fā)情的親魚(yú)短暫隔離。

采取改良的半干法授精。用干毛巾抹去雌親魚(yú)腹部及泄殖孔四周的水分，輕壓腹部將魚(yú)卵擠入干燥器皿中；同時(shí)取雄魚(yú)，用干毛巾擦干腹部及生殖孔四周水分，擠精液滴入盛魚(yú)卵器皿中，加入0.7%生理鹽水適量，輕輕攪拌20-30 s，然后用手或羽毛輕輕攪拌1-2 min；加入適量清水，再輕輕攪拌1-2 min，靜置1 min左右，倒去污水；隨機(jī)將卵子倒入事先配好的10%黃泥漿水中脫粘，用手輕輕攪動(dòng)4-5 min，將泥漿水連同受精卵一起用網(wǎng)片過(guò)濾，洗去多余泥漿，篩出魚(yú)卵，如此重復(fù)用清水洗卵2-3次，即可移入孵化缸中孵化。

1.8 人工孵化

為防水霉病，先用2-4 g/m3水霉凈浸浴8-10 min，然后按80-100萬(wàn)粒/m3放受精卵[5]。由于黃尾鲴受精卵較小，人工脫粘后卵表面附有泥沙，同時(shí)卵子吸水膨脹不明顯，卵比重較大，孵化時(shí)要求水流速度較大，可通過(guò)孵化缸底部鋪設(shè)環(huán)形管充氣，以看到受精卵粒隨水流上下翻動(dòng)為宜。

1.9 產(chǎn)后親魚(yú)的處理

自然產(chǎn)卵后的親魚(yú)，及時(shí)用網(wǎng)具捕起，并用濃度為20 g/m3的KMnO4浸浴10 min[6]，期間用氣泵供氣，確保氧氣充足，然后放入親魚(yú)暫養(yǎng)池中。人工授精后的親魚(yú)，特別是雌魚(yú)受傷嚴(yán)重，需進(jìn)行挑選，不能存活或傷勢(shì)較重的親魚(yú)挑出，受傷較輕的親魚(yú)用上述方法處理后下池。

2 結(jié)果

2.1 受精率

試驗(yàn)在水溫23.00±1.00℃條件下，分別完成20組自然受精和人工授精，受精卵孵化3 h后到達(dá)原腸胚期，每20組隨機(jī)抽取5組，每組抽樣200粒[7]，在4×10倍顯微鏡下觀察，自然受精組的受精率達(dá)81.50±7.00%；人工授精組的受精率達(dá)92.00±4.60%（表1）。

表1 自然受精和人工授精效果比較Table 1 Effect comparison of natural fertilization and artificial insemination

2.2 出苗率

在水溫23.00±1.00℃條件下，兩種方式得到的受精卵分別放在孵化缸中，孵化水質(zhì)及其它條件相同，受精卵經(jīng)過(guò)30-36 h后開(kāi)始破膜出苗，36-47 h完全破膜，仔魚(yú)孵出后經(jīng)過(guò)88-92 h出現(xiàn)腰點(diǎn)（鰾充氣），開(kāi)始平游，并主動(dòng)開(kāi)口攝食時(shí)，魚(yú)苗即可下池培育，此時(shí)統(tǒng)計(jì)自然受精的出苗率為84.30%；人工授精的出苗率為88.30%，此次試驗(yàn)共出苗240萬(wàn)尾。

2.3 產(chǎn)后親魚(yú)成活率

黃尾鲴產(chǎn)后2 h親魚(yú)死亡和暫養(yǎng)2周內(nèi)的死亡情況（表2），自然受精的親魚(yú)成活率達(dá)90.00%；人工授精的親魚(yú)成活率為57.50%。

表2 自然受精和人工授精后親魚(yú)成活情況Table 2 The survival condition of parent fishes of natural fertilization and artificial insemination

3 討論

由表1可見(jiàn)，黃尾鲴自然受精的受精率明顯低于人工授精，可能有以下幾方面的原因：（1）人工授精方法精子和卵子在器皿內(nèi)結(jié)合的機(jī)會(huì)多；而自然產(chǎn)卵受精往往由于親魚(yú)發(fā)情激烈，卵子和精子射出較遠(yuǎn)，分布范圍大，影響受精率。（2）人工授精確保精子和卵子在極短時(shí)間內(nèi)充分接觸，從而提高受精率。但是人工授精必須把握好效應(yīng)時(shí)間，如果超過(guò)效應(yīng)時(shí)間再擠卵，則受精率會(huì)明顯降低。（3）人工授精是把精子和卵子同時(shí)擠入器皿中，人工均勻攪動(dòng)使精卵結(jié)合的機(jī)率大大增加；而自然產(chǎn)卵受精在精卵排出體外時(shí)，只是親魚(yú)用尾巴攪動(dòng)，另外，自然產(chǎn)卵受精不能保證精卵同時(shí)排出，卵子剛產(chǎn)出體外時(shí)有下沉趨勢(shì)，而精子排出體外遇水即散，從而影響受精率。（4）雌雄搭配比例不盡合理，自然受精情況下，為提高受精率，雌雄搭配比例最好提高到1:2。

鐘岳采用DOM和LRH-A催產(chǎn)進(jìn)行人工授精，并施以不同注射劑量，獲得的受精率在62.00%-84.00%，采用PG和LRH-A進(jìn)行催產(chǎn)，同時(shí)采用人工授精，其受精率為72.00%-82.00%[8]。而本試驗(yàn)人工授精的受精率達(dá)到92.00±4.60%，效果明顯增強(qiáng)。

由表2可知，無(wú)論是自然受精還是人工授精，黃尾鲴產(chǎn)后親魚(yú)傷亡較為嚴(yán)重，特別是雌魚(yú)產(chǎn)后死亡率高，最高達(dá)65.00%，這和黃尾鯝性情急躁，應(yīng)激反應(yīng)劇烈有關(guān)，因此在實(shí)際生產(chǎn)操作過(guò)程中，從日常管理、拉網(wǎng)捕魚(yú)、運(yùn)輸、催產(chǎn)等各個(gè)環(huán)節(jié)都需謹(jǐn)慎操作，以免造成親魚(yú)大量死亡。

從試驗(yàn)結(jié)果分析黃尾鲴人工授精效果優(yōu)于自然受精，但親魚(yú)的死亡率高。在黃尾鲴養(yǎng)殖生產(chǎn)中，如果后備親魚(yú)不足，建議培育好親魚(yú)，采取自然受精方式；如果后備親魚(yú)充足，可采用人工授精方式，提高受精率和出苗率。

[1]農(nóng)業(yè)大詞典編輯委員會(huì)編,農(nóng)業(yè)大詞典[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,1998:549.

[2]付輝云,章海鑫,趙春來(lái),等.軍山湖黃尾密鲴的形態(tài)生物學(xué)研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,43(7):247-249.

[3]黃邦星.黃尾鲴人工繁殖及苗種培育技術(shù)[J].福建農(nóng)業(yè),2013,3:27.

[4]李生武.鲴魚(yú)的生物學(xué)特性及養(yǎng)殖技術(shù)[J].水產(chǎn)科技情報(bào),2002,29(3):116-118.

[5]卞偉,陽(yáng)愛(ài)生,伍遠(yuǎn)安,等.黃尾密鲴人工繁殖技術(shù)[J].水利漁業(yè),1987,4:20-23.

[6]潘金培.魚(yú)病診斷與防治手冊(cè)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1988:163.

[7]中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn):青魚(yú)、草魚(yú)、鰱、鳙魚(yú)卵受精率計(jì)算方法,GB/T15806-1995.

[8]鐘岳.高效魚(yú)類催產(chǎn)合劑Ⅱ號(hào)催產(chǎn)黃尾密鲴試驗(yàn)報(bào)告[J].江西水產(chǎn)科技,1998(3):16-18.

Study on natural fertilization and artificial insemination hatching of Xenocypris davidiBleeker

Guo Xusheng1,Lun Feng1,Zhao Liangjie1,Peng Xinliang1,Lu Ying2
（1 Colloge of Fisheries,Xinyang Agriculture and Forestry University,Fishery Biological Engineering Technology Research Center of Henan Province, Xinyang 464000,Henan,China;2 Fisheries Bureau of Luoshan County,Luoshan 464200,Henan,China）

Hatching effects ofXenocypris davidiwith natural fertilization and artificial insemination after artificial induced spawning were compared in this study.The results showed that the fertilization rate and emergence rate of artificial insemination were 92.00±4.60%and 88.30%,higher than that of natural fertilization(fertilization rate 81.50±7.00%，emergence rate 84.30%).However,the survival rate of parent fishes of artificial insemination was57.50%,obviously lower than that of natural fertilization(90.00%).

Xenocypris davidi;natural fertilization;artificial insemination

河南省科技攻關(guān)項(xiàng)目（162102110053）

郭旭升（1968-），男，教授，研究方向：水產(chǎn)種質(zhì)資源育種與保護(hù)，E-mail：gxs1968@163.com

彭新亮，E-mail：pengxinliang01@126.com