婦月康膠囊薄層色譜鑒別方法研究

鄧銀愛 楊澤銳 王慧玲 彭麗華 成金樂*

婦月康膠囊薄層色譜鑒別方法研究

鄧銀愛1，2，3楊澤銳1，2，3王慧玲2，3彭麗華2，3成金樂2，3*

（1廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源科學(xué)與工程研究中心，嶺南中藥資源教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州510006；2國家中醫(yī)藥管理局中藥破壁飲片技術(shù)與應(yīng)用重點(diǎn)研究室，中山528437；3中山市中智藥業(yè)集團(tuán)有限公司，中山528437）

目的改進(jìn)婦月康膠囊的薄層鑒別方法。方法使用石油醚代替原檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中提取及展開劑所使用的有毒試劑苯，對(duì)婦月康膠囊中的阿魏酸進(jìn)行薄層色譜鑒別。結(jié)果所有婦月康膠囊樣品均能檢測(cè)出阿魏酸對(duì)照品特征性斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰，易于檢測(cè)。結(jié)論改進(jìn)后的方法操作簡(jiǎn)便、安全、專屬性強(qiáng)，可用于新的婦月康膠囊薄層鑒別標(biāo)準(zhǔn)的制定。

婦月康膠囊；阿魏酸；薄層鑒別；惡露不停

婦月康膠囊由當(dāng)歸、川芎、益母草、紅花、桃仁、徐長卿等8味中藥組成，具有活血、祛瘀、止痛等功效，用于產(chǎn)后惡露不停，少腹疼痛，也可用于上節(jié)育環(huán)后引起的陰道流血、月經(jīng)過多，具有較好的臨床療效[1-3]。阿魏酸為婦月康膠囊中君藥當(dāng)歸、川芎、益母草的主要有效成份之一[4-6]，現(xiàn)行婦月康膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中阿魏酸的薄層鑒別中供試品制備以及展開劑中均使用了劇毒化學(xué)物質(zhì)苯或氯仿[7]，對(duì)檢測(cè)人員的人身及環(huán)境危害很大，急需改進(jìn)。為準(zhǔn)確、有效地控制婦月康膠囊質(zhì)量的同時(shí)減少對(duì)檢測(cè)人員的傷害及環(huán)境的污染，本試驗(yàn)進(jìn)行了婦月康膠囊中阿魏酸鑒別無苯供試品制備方法和展開劑系統(tǒng)的研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

薄層成像系統(tǒng)（CAMAG）；電子天平（METTLER TOLEDO）；KQ-700DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；雙槽展開缸（上海信宜儀器廠有限公司）。

阿魏酸對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)110773-201313，純度大于98%）；硅膠G鋁箔片基板200 mm×200 mm（浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠）；硅膠GF254鋁箔片基板200mm×200 mm（Merck KGaA，Darmstadt，Germany）；硅膠G玻璃板100mm× 100 mm（青島海洋化工廠分廠）；所用試劑均為分析純。

婦月康膠囊（批號(hào):20140201、20140501、20140601、20160201、20160202、20160203、20160204、20160205、20160206、20160207，婦月康膠囊陰性樣品20160111（缺川芎、當(dāng)歸、益母草），均由中山市恒生藥業(yè)有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 原標(biāo)準(zhǔn)方法

2.1.1 供試品溶液的制備稱取婦月康膠囊內(nèi)容物3 g，研細(xì)，加50 ml乙醇，超聲1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 ml，加熱使溶解，放冷，乙醚萃取3次，每次20 ml，合并乙醚液，加2%Na2CO3溶液震蕩提取3次，每次20 ml，得Na2CO3溶液，加乙酸乙酯洗3次，每次15 ml，得堿液，加HCL酸化至pH2-3，再用苯洗滌3次，每次15 ml，棄去苯液，繼續(xù)用乙醚提取三次，每次20 ml，合并醚液，揮干，殘?jiān)蛹状? ml溶解。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備阿魏酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.3 薄層層析照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取供試品溶液15 μl和對(duì)照品溶液5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯∶三氯甲烷∶甲醇∶冰醋酸（3∶2∶0.6∶0.1），為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外光（365nm）下檢視（見圖1），由圖可知，供試品色譜在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，雖顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，但是Rf值偏高（約0.86）。

圖1 原標(biāo)準(zhǔn)薄層色譜圖

2.2 改進(jìn)后方法

2.2.1 供試品溶液的制備稱取婦月康膠囊內(nèi)容物3 g，研細(xì)，加50 ml乙醇，超聲1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 ml，加熱使溶解，放冷，乙醚萃取3次，每次20 ml，合并乙醚液，加2%Na2CO3溶液震蕩提取3次，每次20 ml，得Na2CO3溶液，加乙酸乙酯洗3次，每次15 ml，得堿液，加HCL酸化至pH2-3，再用石油醚洗滌3次，每次15 ml，棄去石油醚液，繼續(xù)用乙醚提取3次，每次20 ml，合并醚液，揮干，殘?jiān)蛹状? ml溶解。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 薄層層析照薄層色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取供試品溶液15 μl和對(duì)照品溶液5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60~90℃）：二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸（8∶3∶3∶0.4），為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外光（365 nm）下檢視（見圖2），由圖可知，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且Rf值適中（約0.48），斑點(diǎn)較清晰。

2.2.4 方法學(xué)考察

2.2.4.1 專屬性考察由圖3可知，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；缺川芎、當(dāng)歸、益母草陰性對(duì)照品供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，不顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，因此該方法專屬性好，陰性無干擾。見圖3。

圖3 專屬性考察

2.2.4.2 耐用性考察（1）不同薄層板考察。選取臺(tái)州硅膠G預(yù)制鋁箔板、默克硅膠GF254預(yù)制鋁箔板、青島硅膠G預(yù)制玻璃板分別按擬定的試驗(yàn)方法試驗(yàn)，結(jié)果表明，上述不同硅膠板均能達(dá)到鑒別的要求，而由于玻璃板展開時(shí)間較長，默克板價(jià)格較昂貴，綜合考慮選擇臺(tái)州硅膠G預(yù)制鋁箔板進(jìn)行后續(xù)考察。見圖4。

圖4 不同薄層板考察

（2）不同濕度考察。取點(diǎn)樣后的薄層板，分別置于32%和72%的濕度中展開，結(jié)果表明此方法在不同濕度下均有較好的展開效果。見圖5。

圖5 不同濕度考察

（3）不同溫度考察。取點(diǎn)樣后的薄層板，分別置于冰箱（2~8℃）和室溫（10~30℃）的溫度中展開，結(jié)果顯示在不同溫度下均有較好的展開效果，說明本方法對(duì)一定溫度的變動(dòng)具有耐用性。見圖6。

圖6 不同溫度考察

（4）不同點(diǎn)樣量。分別取供試品溶液5 μl、10 μl、15 μl，對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液按原標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定內(nèi)容取5 μl進(jìn)行點(diǎn)樣，進(jìn)行考察。結(jié)果顯示供試品在與對(duì)照品色譜相同位置上均有相同顏色的斑點(diǎn)，說明本方法對(duì)點(diǎn)樣量的小變動(dòng)具有耐用性。見圖7。

圖7 不同點(diǎn)樣量考察

（5）不同點(diǎn)樣方式。取供試品溶液分別按圓點(diǎn)狀、條帶狀兩種點(diǎn)樣方式進(jìn)行點(diǎn)樣，結(jié)果顯示，兩種點(diǎn)樣方法均有較好的展開效果，表明此方法使用不同點(diǎn)樣方式均有較好的展開效果，但帶狀點(diǎn)樣效果更佳。見圖8。

圖8 不同點(diǎn)樣方式考察

2.2.4.3 重復(fù)性考察取10個(gè)不同批次婦月康膠囊，按照

2.2.1 項(xiàng)下供試品制備方法同時(shí)制備10份供試品，在室溫下按2.2.3項(xiàng)下色譜條件展開，結(jié)果顯示供試品色譜中，均顯阿魏酸對(duì)照品的特征斑點(diǎn)，且陰性無干擾。表明此方法重現(xiàn)性好，見圖9。

圖9 重復(fù)性考察

3 討論

3.1 供試品溶液制備方法考察原標(biāo)準(zhǔn)供試品溶液的制備方法較為復(fù)雜，本研究比較8個(gè)簡(jiǎn)化方法的處理效果，發(fā)現(xiàn)簡(jiǎn)化的供試品溶液處理會(huì)使阿魏酸成分鑒別存在干擾，分離度不好。因此，選擇了只替換萃取溶劑而操作相同的制備方法作為最終供試品溶液的制備方法。

3.2 展開劑展開效果考察考察了11種展開劑展開效果的差異。展開劑分別為：正庚烷-乙酸乙酯-冰醋酸（6∶3∶1）、正庚烷-乙酸乙酯-冰醋酸（2∶1∶0.5）、正庚烷-異丙醇-甲酸（1∶1∶0.1）、環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸（1∶1∶0.1）、環(huán)己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（2∶1∶1∶0.1）正庚烷-乙酸乙酯-甲酸（2∶1∶0.5）；石油醚（60～90℃）:二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸（8∶3∶3∶0.4）等展開劑條件，結(jié)果顯示正庚烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶4∶0.4）、環(huán)己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（2∶1∶1∶0.1）、石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲酸（6∶4∶0.4）、石油醚（60～90℃）∶二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸（8∶3∶3∶0.4）。結(jié)果表明：均能獲得較好的展開效果，各指標(biāo)成分的斑點(diǎn)分離清晰，而以石油醚（60～90℃）∶二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸（8∶3∶3∶0.4）分離效果最佳。

4 小結(jié)

原標(biāo)準(zhǔn)中，展開劑系統(tǒng)含有苯和氯仿，供試品制備方法含有苯，對(duì)檢測(cè)人員的危害大。改進(jìn)的方法采用了毒性較低的石油醚（60~90℃）∶二氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸展開系統(tǒng)替代標(biāo)準(zhǔn)中劇毒展開系統(tǒng)苯∶三氯甲烷∶甲醇∶冰醋酸，用石油醚洗滌代替供試品制備方法中的苯洗滌。本研究建立的新方法在保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠的同時(shí)可減少對(duì)檢測(cè)人員的傷害及環(huán)境的污染。建議對(duì)婦月康膠囊中阿魏酸的薄層色譜鑒別按本研究所建立的方法進(jìn)行修訂。

Study on TLC Identification for Fuyuekang Capsule

DENG Yinai1,2,3,YANG Zerui1,2,3,WANG Huiling2,3,PENG Lihua2,3,CHENG Jinle2,3*
(1.Research Center of Chinese Medicinal Resource Science and Engineering,Guangzhou University of Chinese Medicine,Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Resources of Ministry of Education of South of the Five Ridges,Guangzhou 510006,China; 2.Key Laboratory of Cell-Broken Decoction Pieces Technology and Application of State Administration of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Province,Zhongshan 528437,China; 3.Zhongzhi Pharmaceutical Limited Company,Zhongshan,Guangdong Province,Zhongshan 528437,China)

Objective To improve identification method of Fuyuekang capsule by thin layer chromatography(TLC).Methods Petroleum ether was taken to replace benzene used in the original test standard extraction and development agent.Results The distinct Ferulic acid characteristic spots were easily to be detected in all Fuyuekang capsule samples by using the new method.Conclusion This improved method was simple and safe,has strong specificity,and it could be used as the new identification method of Fuyuekang capsule.

Fuyuekang capsule;Ferulic acid;thin layer chromatography;prolonged lochiorrhea

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.12.063

1672-2779（2017）-12-0139-04

*通訊作者：gdcjl9@126.com