不同加工玄參藥材中多元功效成分的含量測(cè)定及灰色關(guān)聯(lián)度分析

王勝男，華愉教，鄒立思，羅益遠(yuǎn)，劉訓(xùn)紅，劉娟秀，嚴(yán) 穎，徐 力

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210023；2.揚(yáng)州市藥品檢驗(yàn)所，江蘇 揚(yáng)州 225000)

不同加工玄參藥材中多元功效成分的含量測(cè)定及灰色關(guān)聯(lián)度分析

王勝男1，華愉教1，鄒立思1，羅益遠(yuǎn)1，劉訓(xùn)紅1，劉娟秀1，嚴(yán) 穎1，徐 力2

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210023；2.揚(yáng)州市藥品檢驗(yàn)所，江蘇 揚(yáng)州 225000)

建立了超高效液相色譜-三重四極桿-線性離子阱質(zhì)譜(UPLC-Qtrap-MS/MS)同時(shí)測(cè)定玄參藥材中環(huán)烯醚萜苷類(lèi)、苯丙素苷類(lèi)和有機(jī)酸類(lèi)等12種功效成分的方法，分析了不同加工方法對(duì)玄參藥材中多元功效成分含量的影響，并采用UPLC-Qtrap-MS/MS技術(shù)同時(shí)測(cè)定其中的12種功效成分含量，用灰色關(guān)聯(lián)度分析法對(duì)多元功效成分進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，12種功效成分在一定濃度范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999 0，加標(biāo)回收率為95.82%～99.35%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于2.44%；不同加工方法對(duì)玄參中多元功效成分含量具有一定的影響，灰色關(guān)聯(lián)度分析結(jié)果顯示，陰干法和完整藥材蒸后烘干的樣品綜合質(zhì)量較好。該實(shí)驗(yàn)揭示了加工對(duì)玄參中多元功效成分的影響，可為優(yōu)選玄參適宜產(chǎn)地加工方法提供基礎(chǔ)資料，同時(shí)為玄參藥材內(nèi)在質(zhì)量的綜合評(píng)價(jià)提供方法參考。

玄參；超高效液相色譜-三重四極桿-線性離子阱質(zhì)譜(UPLC-Qtrap-MS/MS)；多元功效成分；加工方法；灰色關(guān)聯(lián)度分析

玄參系玄參科植物玄參ScrophularianingpoensisHemsl.的干燥根，是大宗常用中藥材，具有清熱涼血、滋陰降火、解毒散結(jié)之功效，用于治療熱入營(yíng)血、溫毒發(fā)斑、熱病傷陰、舌絳煩渴、津傷便秘、骨蒸勞嗽、目赤、咽痛、白喉、療疬、癰腫瘡毒等癥[1]?，F(xiàn)代研究表明，玄參含有環(huán)烯醚萜苷類(lèi)、苯丙素苷類(lèi)和有機(jī)酸類(lèi)等多元功效成分[2-4]。環(huán)烯醚萜苷類(lèi)，如哈巴苷、哈巴俄苷等，具有保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)、抗腫瘤、抗炎、保肝、保護(hù)心血管系統(tǒng)、治療糖尿病及其并發(fā)癥等作用，此外，還具有免疫增強(qiáng)作用，有研究認(rèn)為是梓醇骨架(九碳7,8-環(huán)氧環(huán)戊烷骨架)所起的作用[5-7]。苯丙素苷類(lèi)，如毛蕊花糖苷、安格洛苷C等，具有抗炎、抗菌、保肝及降低玻尿酸水平等作用，此外，還具有較好的抗凝作用和抗腫瘤活性，其與苯環(huán)芳?xì)鋽?shù)和分子中酚羥基數(shù)目有關(guān)[7-8]。有機(jī)酸類(lèi)，如肉桂酸、咖啡酸、對(duì)香豆酸、阿魏酸等，具有抗炎、抑制血小板聚集、抗氧化、抗血栓及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等作用[9]。

關(guān)于玄參藥材的產(chǎn)地加工，《中國(guó)藥典》規(guī)定的加工方法是“發(fā)汗”法，即主根曬或烘至半干，堆放3～6天，反復(fù)數(shù)次至干燥[1]。藥材產(chǎn)地加工是藥材生產(chǎn)與品質(zhì)形成的重要環(huán)節(jié)，通過(guò)對(duì)各產(chǎn)區(qū)玄參生產(chǎn)情況的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，玄參的產(chǎn)地加工方法主要有“發(fā)汗”、烘干、陰干、蒸切、煮切等[10-15]，但目前尚無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，存在盲目性與隨意性。為了提高玄參藥材的質(zhì)量及為GAP基地的建設(shè)提供參考資料，有必要對(duì)玄參藥材的加工方法進(jìn)行優(yōu)選。

目前，關(guān)于玄參藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)及加工方法主要集中于對(duì)環(huán)烯醚萜苷類(lèi)、苯丙素苷類(lèi)及有機(jī)酸類(lèi)成分的分析，但多以單一或單類(lèi)成分的含量或動(dòng)態(tài)變化為考察指標(biāo)，尚少見(jiàn)上述多元功效成分同時(shí)測(cè)定的報(bào)道。常用的分析方法有高效液相色譜法(HPLC)[16-17]、高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)[18]、液相色譜-質(zhì)譜法(LC/MS)[19-22]等，其中，HPLC法難以解決組分共流出現(xiàn)象；HPCE法的定量檢測(cè)重現(xiàn)性相對(duì)較差；而LC/MS法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、定量準(zhǔn)確、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)。

本工作以浙江道地產(chǎn)區(qū)產(chǎn)玄參(浙玄參)為研究對(duì)象，采用超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿-線性離子阱質(zhì)譜法(UPLC-Qtrap-MS/MS)同時(shí)測(cè)定環(huán)烯醚萜苷類(lèi)(哈巴苷、哈巴俄苷、梓醇、桃葉珊瑚苷)、苯丙素苷類(lèi)(毛蕊花糖苷、安格洛苷C)、有機(jī)酸類(lèi)(肉桂酸、咖啡酸、對(duì)香豆酸、阿魏酸、對(duì)甲氧基肉桂酸、反式丁烯二酸)等12種功效成分的含量，并采用灰色關(guān)聯(lián)度法[23-27]對(duì)不同加工玄參藥材進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，揭示加工方法對(duì)玄參中多元功效成分的影響，希望為優(yōu)選玄參適宜的加工方法提供基礎(chǔ)資料，同時(shí)也為玄參藥材內(nèi)在質(zhì)量的綜合評(píng)價(jià)和全面控制提供方法參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

UPLC-20ADXR系列液相色譜儀：日本Shimadzu公司產(chǎn)品，配有溶劑脫氣裝置、自動(dòng)進(jìn)樣器；API 4000四極桿-線性離子阱質(zhì)譜儀：美國(guó)AB Sciex公司產(chǎn)品，配有離子噴霧接口；KQ-500B超聲波清洗機(jī)(超聲功率500 W，40 kHz)：昆山超聲儀器有限公司產(chǎn)品；BSA2245型電子分析天平(十萬(wàn)分之一)、ME36S型電子分析天平(百萬(wàn)分之一)：德國(guó)賽多利斯公司產(chǎn)品；H1650-W高速離心機(jī)：湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司產(chǎn)品。

1.2 材料與試劑

哈巴苷(批號(hào)：111729-201405)、哈巴俄苷(批號(hào)：111730-201307)、阿魏酸(批號(hào)：110773-201012)、梓醇(批號(hào)：110808-200508)、桃葉珊瑚苷(批號(hào)：111761-200601)、肉桂酸(批號(hào)：786-9001)、咖啡酸(批號(hào)：110885-200102)：純度均大于99%，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；安格洛苷C(批號(hào)：141112)：純度大于99%，購(gòu)自成都克洛瑪生物科技有限公司；毛蕊花糖苷(批號(hào)：A0280)：純度大于99%，購(gòu)自上海永葉生物科技有限公司；對(duì)香豆酸(批號(hào)：YY90143)、對(duì)甲氧基肉桂酸(批號(hào)：YY14321)：純度均大于99%，購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；反式丁烯二酸(批號(hào)：T20 110623)：純度大于99%，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；水為超純水；甲醇、乙腈：均為色譜純，德國(guó)默克公司產(chǎn)品；其余試劑均為分析純。12種目標(biāo)功效成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)式示于圖1。

玄參藥材為2014年11月份采自浙江省縉云縣，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)劉訓(xùn)紅教授鑒定為玄參科植物玄參ScrophularianingpoensisHemsl.的干燥根，留樣憑證存放于南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)樣品按不同的加工方法進(jìn)行加工處理：S1為完整藥材曬干法，S2為切片藥材曬干法，S3為完整藥材烘干法，S4為切片藥材烘干法，S5為陰干法，S6為微波真空干燥法，S7為完整藥材蒸后烘干，S8為切片藥材蒸后烘干，S9為“發(fā)汗”加工法。

1.3 實(shí)驗(yàn)條件

1.3.1 色譜條件 色譜柱：BDS HYPERSIL C18(250 mm×4.6 mm×5 μm)；流動(dòng)相：水(A相)-乙腈(B相)；梯度洗脫：0～1 min、5%B，1～10 min、5%～20%B，10～14 min、20%～35%B，14～16 min、35%～75%B，16～18.1 min、75%～5%B，18.1～22 min，5%B；柱溫35 ℃；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量2 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件 Turbo V離子源，ESI電離負(fù)離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)掃描方式，離子化溫度(TEM)650 ℃，噴霧電壓-4 500 V，霧化氣(GS1)流速65 L/min，輔助氣(GS2)流速65 L/min，氣簾氣(CUR)流速30 L/min。優(yōu)化的質(zhì)譜條件參數(shù)列于表1。

1.4 對(duì)照品溶液的制備

分別稱取12種化合物對(duì)照品適量，加純水配制成各對(duì)照品儲(chǔ)備液。取各對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，制成反式丁烯二酸、咖啡酸、梓醇、桃葉珊瑚苷、對(duì)香豆酸、阿魏酸、哈巴苷、肉桂酸、對(duì)甲氧基肉桂酸、毛蕊花糖苷、安格洛苷C、哈巴俄苷的質(zhì)量濃度分別為709.00、22.25、175.50、914.00、53.00、128.00、569.00、126.80、426.00、1 744.00、470.00、198.00 mg/L的混合對(duì)照品溶液，并逐級(jí)稀釋，得到一系列不同濃度的12種多元功效成分混合對(duì)照品溶液，待分析。

1.5 供試品溶液的制備

精密稱定1.0 g玄參粉末(過(guò)80目篩)，置于100 mL具塞錐形瓶中，加入20 mL 70%甲醇，稱質(zhì)量，于室溫下超聲提取60 min后取出，靜置冷卻；以70%甲醇補(bǔ)足質(zhì)量損失，搖勻，提取液以12 000 r/min離心10 min，取上清液；經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液。

圖1 玄參中12種功效成分的結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)式Fig.1 Chemical structures of twelve active constituents in Scrophulariae Radix

表1 優(yōu)化的質(zhì)譜條件參數(shù)Table 1 Optimized MS/MS parameters

1.6 分析方法

采用BDS HYPERSIL C18色譜柱對(duì)色譜分離條件進(jìn)行優(yōu)化，按照優(yōu)化的條件進(jìn)行UPLC-Qtrap-MS/MS分析，并做方法學(xué)考察，用外標(biāo)法計(jì)算各樣品中12種功效成分的含量。根據(jù)含量測(cè)定結(jié)果，用灰色關(guān)聯(lián)度法對(duì)不同加工玄參藥材進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜-質(zhì)譜條件的優(yōu)化

通過(guò)研究12種功效成分在電噴霧正負(fù)離子模式下的響應(yīng)特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)其在負(fù)離子模式下均有較強(qiáng)的離子響應(yīng)，提取離子流圖及MRM圖示于圖2；但在正離子模式下，安格洛苷C、毛蕊花糖苷、反式丁烯二酸、對(duì)甲氧基肉桂酸、咖啡酸、桃葉珊瑚苷、哈巴苷、哈巴俄苷和梓醇成分的離子響應(yīng)值較弱或沒(méi)有響應(yīng)。因此，本研究選用負(fù)離子模式進(jìn)行分析，12種功效成分的全掃描質(zhì)譜圖示于圖3。

通過(guò)比較不同流動(dòng)相溶液(甲醇-水溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液、乙腈-水溶液、乙腈-0.1%甲酸水溶液)下12種功效成分的色譜峰形和離子化效率，本研究選用乙腈-水溶液作為流動(dòng)相。

注：1.反式丁烯二酸；2.咖啡酸；3.梓醇；4.桃葉珊瑚苷；5.對(duì)香豆酸；6.阿魏酸；7.哈巴苷；8.肉桂酸；9.對(duì)甲氧基肉桂酸；10.毛蕊花糖苷；11.安格洛苷C；12.哈巴俄苷?qǐng)D2 混合對(duì)照品(a)和樣品(b)的提取離子流圖及12種功效成分的MRM圖(c)Fig.2 Extracted ion chromatograms (EIC) of reference substances (a), sample (b) and multi-reaction monitoring (MRM) of 12 active constituents (c)

注：a.反式丁烯二酸；b.咖啡酸；c.梓醇；d.桃葉珊瑚苷；e.對(duì)香豆酸；f.阿魏酸；g.哈巴苷；h.肉桂酸；i.對(duì)甲氧基肉桂酸；j.毛蕊花糖苷；k.安格洛苷C；l.哈巴俄苷?qǐng)D3 負(fù)離子模式下，12種功效成分的全掃描質(zhì)譜圖Fig.3 Full scan mass spectrums of 12 active constituents in negative mode

2.2 提取方法的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)對(duì)提取溶劑(50%、60%、70%、80%、90%、100%甲醇)，料液比(1∶20、1∶40、1∶60、1∶80)，提取方法(回流、超聲處理)和提取時(shí)間(15、30、45、60、75 min)進(jìn)行了單變量考察。結(jié)果表明：70%甲醇作為提取溶劑可以提取出更多待測(cè)物；超聲提取效果比回流提取好，且方便易行。因此選擇70%甲醇作為提取溶劑，超聲提取作為提取方法。優(yōu)化后的料液比和提取時(shí)間分別為1∶20和60 min。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測(cè)限和定量限 精密吸取1.4節(jié)的不同濃度系列對(duì)照品溶液及混合對(duì)照品儲(chǔ)備液各2 μL，在1.3節(jié)條件下測(cè)定，以對(duì)照品的峰面積(y)對(duì)相應(yīng)的濃度(x)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍；按信噪比(S/N)為3計(jì)算檢測(cè)限，S/N為10計(jì)算定量限，結(jié)果列于表2。

2.3.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取一定濃度的混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定各對(duì)照品峰面積，12種功效成分對(duì)照品的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差列于表3。結(jié)果表明，儀器精密度良好，符合實(shí)驗(yàn)要求。

2.3.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一玄參樣品供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣分析，12種功效成分峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差列于表3。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)具有較好的穩(wěn)定性。

表2 12種功效成分的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢測(cè)限和定量限Table 2 Liner equations, correlation coefficients, limits of detection and limits of quantification of 12 active constituents

表3 12種功效成分的精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性Table 3 Precisions, repeatabilities and stabilities of 12 active constituents

2.3.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 分別稱取6份同一玄參樣品，每份1.0 g，精密稱定，按1.5節(jié)方法制備供試液，進(jìn)樣測(cè)定，12種功效成分含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差列于表3。結(jié)果表明，該方法的重復(fù)性良好，符合實(shí)驗(yàn)規(guī)定。

2.3.5 回收率實(shí)驗(yàn) 取0.500 0 g已知含量的玄參樣品3份，精密稱定，分別加入3個(gè)不同水平(80%、100%、120%)的標(biāo)準(zhǔn)品中，每個(gè)水平平行測(cè)試3次。按1.5節(jié)方法制備加樣回收供試品溶液，并進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果列于表4。

2.4 實(shí)際樣品測(cè)定

將供試品溶液注入液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，按1.3節(jié)條件測(cè)定，根據(jù)相應(yīng)的線性關(guān)系計(jì)算供試樣品中12種功效成分的含量，結(jié)果列于表5。

2.5 灰色關(guān)聯(lián)度分析

2.5.1 樣品數(shù)據(jù)集的建立 以12種多元功效成分為指標(biāo)性成分，建立玄參藥材質(zhì)量灰色模式識(shí)別數(shù)據(jù)集，結(jié)果列于表6。

2.5.2 原始數(shù)據(jù)規(guī)格化處理 設(shè)有n個(gè)樣品，每個(gè)樣品有m項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)，即組成評(píng)價(jià)單元序列{Xik}(i=1,2,3,…n；k=1,2,3,…m；本實(shí)驗(yàn)中n=11，m=10)。由于評(píng)價(jià)指標(biāo)之間存在測(cè)試單位不統(tǒng)一的問(wèn)題，因此，按照式(1)對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行規(guī)格化處理，結(jié)果列于表7。

Yik=Xik/Xk

(1)

式中：Yik為規(guī)格化處理后的數(shù)據(jù)；Xik為原始數(shù)據(jù)；Xk為n個(gè)樣品第k個(gè)指標(biāo)的均值。

表4 12種功效成分的加標(biāo)回收率Table 4 Recoverises of 12 active constituents

續(xù)表4

續(xù)表4

表5 實(shí)際樣品的測(cè)定結(jié)果(μg/g，n=2)Table 5 Determination results of actual samples (μg/g, n=2)

表6 樣品數(shù)據(jù)集Table 6 Sample dataset

表7 原始數(shù)據(jù)規(guī)格化處理結(jié)果Table 7 Result of data standardization

2.5.3 關(guān)聯(lián)度計(jì)算 用灰色關(guān)聯(lián)度進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)，應(yīng)選擇參考序列，設(shè)最優(yōu)參考序列和最差參考序列分別為{Xsk}和{Xtk}(k=1,2,3,…m)。設(shè)最優(yōu)參考序列的各項(xiàng)指標(biāo)是n個(gè)樣品對(duì)應(yīng)指標(biāo)的最大值；最差參考序列的各項(xiàng)指標(biāo)是n個(gè)樣品對(duì)應(yīng)指標(biāo)的最小值。按照式(2)和式(3)對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行規(guī)格化處理；按照式(4)和式(5)計(jì)算各評(píng)價(jià)單元序列相對(duì)最優(yōu)(差)參考序列的差值；按照式(6)和式(7)計(jì)算各評(píng)價(jià)單元相對(duì)于最優(yōu)(差)參考序列的關(guān)聯(lián)度；按照式(8)計(jì)算各樣品的相對(duì)關(guān)聯(lián)度，并按ri大小排序，結(jié)果列于表8。

Ysk=Xsk/Xk

(2)

式中：Ysk為規(guī)格化處理后的數(shù)據(jù)；Xsk為原始數(shù)據(jù)；Xk為n個(gè)樣品第k個(gè)指標(biāo)的均值。

Ytk=Xtk/Xk

(3)

式中：Ytk為規(guī)格化處理后的數(shù)據(jù)；Xtk為原始數(shù)據(jù)；Xk為n個(gè)樣品第k個(gè)指標(biāo)的均值。

最優(yōu)參考序列，關(guān)聯(lián)系數(shù)

(4)

式中：Δmin=min∣Yik—Ysk∣，Δmax=max∣Yik—Ysk∣，i=1,2,3,…n，k=1,2,3,…m。

最差參考序列，關(guān)聯(lián)系數(shù)

(5)

(6)

(7)

(8)

表8 各樣品相對(duì)關(guān)聯(lián)度質(zhì)量?jī)?yōu)劣排序Table 8 Quality sequencing of the samples

3 討論

本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的各個(gè)加工玄參樣品中哈巴苷和哈巴俄苷的總量均大于0.45%，符合《中國(guó)藥典》2015版標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定；不同加工方法對(duì)玄參中多元功效成分含量有一定的影響，但由于各多元功效成分存在差異，難以直觀評(píng)價(jià)，因此采用灰色關(guān)聯(lián)度分析法對(duì)其多元功效成分進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，陰干(S5)、完整蒸后烘干(S7)及微波真空干燥(S6)樣品的綜合質(zhì)量較好，說(shuō)明這些方法對(duì)玄參中多元功效成分的綜合影響較??；其中，微波真空干燥法是新型的干燥加工技術(shù)，具有干燥速度快、加熱均勻、產(chǎn)品質(zhì)量高等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)藥材有效成分的影響較小，具有一定的推廣價(jià)值。烘干樣品(S3，S4)的綜合質(zhì)量較差，目前國(guó)內(nèi)部分產(chǎn)區(qū)采用烘干法加工新鮮玄參，雖然耗時(shí)較短、生產(chǎn)效率較高，但對(duì)其有效成分有一定的影響。傳統(tǒng)認(rèn)為，玄參“發(fā)汗”加工的藥材質(zhì)量好，但關(guān)于傳統(tǒng)“發(fā)汗”加工方法的科學(xué)內(nèi)涵，功效成分分析只是其中一個(gè)方面，其他深層次的因素還有待進(jìn)一步的藥效學(xué)研究。

4 結(jié)論

本研究建立了UPLC-Qtrap-MS/MS法同時(shí)測(cè)定玄參中環(huán)烯醚萜苷類(lèi)、苯丙素苷類(lèi)和有機(jī)酸類(lèi)等12種多元功效成分的含量，探討了不同加工方法對(duì)玄參中各功效成分的影響，并采用灰色關(guān)聯(lián)度法對(duì)其進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。該方法可以為優(yōu)選玄參適宜產(chǎn)地加工方法提供基礎(chǔ)資料，同時(shí)為玄參藥材內(nèi)在質(zhì)量的綜合評(píng)價(jià)和全面控制提供方法參考。

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Determination of Multiple Active Constituents of Scrophulariae Radix with Different Processed Products and Grey Relational Analysis

WANG Sheng-nan1, HUA Yu-jiao1, ZOU Li-si1, LUO Yi-yuan1, LIU Xun-hong1, LIU Juan-xiu1, YAN Ying1, XU Li2

(1.NanjingUniversityofChineseMedicine,Nanjing210023,China;2.YangzhouInstituteforDrugControl,Yangzhou225000,China)

Scrophulariae Radix is one of the most popular traditional Chinese medicines (TCMs). Primary processing of Scrophulariae Radix is an important link which closely related to the quality of products in this TCM. A method of ultra high performance coupled with triple quadrupole liner ion trap mass spectrometry (UPLC-Qtrap-MS/MS) was established for the determination of iridoid, phenylpropanoid glycosides and organic acids in Scrophulariae Radix. The goal of the method was to investigate the influences on multiple active constituents with different processing methods of Scrophulariae Radix. Twelve multiple active constituents in Scrophulariae Radix with different processing methods were simultaneous determined by UPLC-Qtrap-MS/MS, and grey incidence degree method analysis was performed to evaluate the different processed samples according to the contents of twelve multiple active constituents. The analysis was carried out on an BDS HYPERSIL C18 column (250 mm×4.6 mm×5 μm), with elution of acetonitrile-water as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was 35 ℃. The target compounds were analyzed by the negative ion multiple reaction monitoring (MRM) mode. The results show that twelve multiple active constituents have good linearity (r≥0.999 0) in the range of the tested concentration. The average recoveries of the twelve components are 95.82%-99.35% with the relative standard deviations less than 2.44%. There are differences in multiple active constituents of Scrophulariae Radix with different processing methods and the processing method of air drying method and complete root by oven drying after steaming had a better quality. The method is useful for the overall assessment on quality of Scrophulariae Radix, and this study may provide the foundation and support for processing method of Scrophulariae Radix in normalization and standardization.

Scrophulariae Radix; ultra high performance coupled with triple quadrupole liner ion trap mass spectrometry (UPLC-Qtrap-MS/MS); multiple active constituents; processing methods; grey relational analysis

2016-04-20;

2016-07-04

江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程項(xiàng)目(ysxk-2014)資助

王勝男(1993—)，女(漢族)，江蘇海門(mén)人，碩士研究生，中藥鑒定專業(yè)。E-mail: jshmwsn@163.com

劉訓(xùn)紅(1959—)，男(漢族)，江蘇濱海人，教授，從事中藥鑒定與品質(zhì)評(píng)價(jià)研究。E-mail: liuxunh1959@sohu.com

O657.63

A

1004-2997(2016)03-0328-14

10.7538/zpxb.youxian.2016.0059