梅奇酵母C14菌株的生化組成分析

文/徐 哲 吳 斌 楊志平

梅奇酵母C14菌株的生化組成分析

文/徐 哲 吳 斌 楊志平

通過對梅奇酵母C14菌株的生化組成進行分析，發(fā)現(xiàn)梅奇酵母C14菌株具有水產(chǎn)動物餌料生物的營養(yǎng)價值。但是，該菌株缺乏多不飽和脂肪酸EPA和DHA，作為幼體餌料使用時，需要添加富含這兩種多不飽和脂肪酸的藻類作為補充。

酵母菌菌體富含蛋白質(zhì)、核酸、維生素、多糖和維生素等營養(yǎng)物質(zhì)，并且可以利用成本低廉的農(nóng)副產(chǎn)品進行大量培養(yǎng)以生產(chǎn)單細胞蛋，因此，酵母菌作為生物餌料已被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。海洋紅酵母（Rhodotorula sp.）可以替代單胞藻進行刺參浮游幼體的培育；德巴利酵母(Debaryomyces sp.)MY3、克魯維酵母(Kluyveromyces sp.)MY32和蟲道酵母(Ambrosiozyma sp.)MY33以不超過50%的比例替代球等鞭金藻(Isochrysis galbana)，對海灣扇貝(Argopecten irradians)幼貝的生長和存活基本沒有影響；沼澤生紅冬孢酵母(Rhodosporidium paludigenum) 能夠促進凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)的生長；清酒假絲酵母(Candida sake )S165、漢遜德巴利酵母(D. hansenii) S8和熱帶假絲酵母(Candida tropicalis )S186 是印度明對蝦(Fenneropenaeus indicus)有效的免疫增強劑。除了海洋酵母在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的成功應(yīng)用外，一些學(xué)者也對酵母本身的生化成分進行了分析。梅奇酵母(Metschnikowia sp.) C14菌株是從健康刺參腸道分離篩選的，實驗證明，該菌株可提高刺參幼參生長、消化作用和免疫功能。為了進一步了解其生化成分，本實驗測定了C14菌株的生化組成，為擴大開發(fā)利用該酵母菌提供參考。

一、材料與方法

1.菌株

梅奇酵母C14從健康刺參腸道分離獲得。將C14種到Y(jié)PD液體種子培養(yǎng)基，其配方為：蛋白胨20g，酵母粉10g，葡萄糖20g，陳海水1000mL,自然pH。于25℃下150r/分鐘培養(yǎng)過夜，將得到的種子液接種到Y(jié)PD液體培養(yǎng)基，在相同條件下培養(yǎng)對數(shù)生長期，以4000r/分鐘離心10分鐘獲得細胞，用生理鹽水重懸，離心，保存在－80℃冰箱備用。

2.基本營養(yǎng)成分測定

粗蛋白測定采用凱氏定氮法（GB/T 5009.5-2010），糖分測定采用分光光度計法（參照GB/T 9695.31-2008）進行，粗脂肪測定采用索氏抽提法（GB/T 5009.6-2003），灰分測定采用馬弗爐焚燒法（GB/T 5009.4-2010）。

3.氨基酸測定

按GB/T5009.124—2003的方法，取適量樣品經(jīng)水解后，利用氨基酸全自動分析儀進行分析（譜尼測試科技股份有限公司）。

4.脂肪酸測定

取菌體細胞10g加入2%的2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚甲醇溶液，使用Folch的方法提取脂質(zhì)。將得到的脂質(zhì)用0.5mol/L的KOH-甲醇在70℃水解1h后，使用Metcalfe等的方法來制備脂肪酸甲酯，利用石油醚萃取后濃縮，進行氣相色譜分析，脂肪酸的定量分析采用面積歸一法計算而得。

二、結(jié)果與討論

1.梅奇酵母C14菌株的基本營養(yǎng)成分

C14菌株的基本營養(yǎng)成分測定結(jié)果如表1所示。結(jié)果表明，該菌株的粗蛋白含量為42.12%，為酵母菌的主要成分，在已報道海洋酵母的蛋白質(zhì)含量范圍（23%～57%）之內(nèi)。該菌株的蛋白質(zhì)含量相對于水產(chǎn)養(yǎng)殖上刺參對生物餌料的蛋白需求較高。糖分是刺參新陳代謝的主要能量來源，梅奇酵母C14菌株的糖分含量為28.15%。來源于酵母細胞壁的葡聚糖對刺參有免疫刺激作用。梅奇酵母C14菌株的粗脂肪含量為12.17%，高于其他海洋酵母。由于刺參對脂肪需求量并不高，因此，該菌株的脂肪含量高于刺參對脂肪的需求量。刺參生長需要少量的礦物質(zhì)，不同海洋酵母灰分含量差別很大（5.35%～13%），梅奇酵母C14菌株的灰分含量為9.14%與Dipodascus capitatusACM 4779的接近。

表1 梅奇酵母C14菌株的基本營養(yǎng)成分（%干重）

2.梅奇酵母C14菌株的氨基酸的組成和含量

C14菌株的氨基酸成分測定結(jié)果如表2所示。該菌株的谷氨酸、天門冬氨酸和亮氨酸含量較高，并含有豐富的必需氨基酸。已報道海洋酵母含有16種～18種氨基酸，梅奇酵母菌株C14菌株含16種氨基酸，與沼澤生紅冬孢酵母的類似。刺參體壁中也含有這16種氨基酸，包括7種必需氨基酸分別是異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸和纈氨酸。梅奇酵母菌株C14菌株具備這些必需氨基酸(表2)。生物餌料中的必需氨基酸組成與動物本身氨基酸組成相近似可視為該動物的最適飼料。該菌株的必須氨基酸指數(shù)（EAAI）值為1.06可作為優(yōu)質(zhì)蛋白源應(yīng)用于刺參養(yǎng)殖。

3.梅奇酵母C14菌株的脂肪酸的組成和含量

不同海洋酵母脂肪酸組成含量變化很大。C14菌株的脂肪酸成分測定結(jié)果如表3所示。結(jié)果顯示，C14菌株亞油酸(18∶2n-6)含量高達30.96%，其次是18∶1、16∶0、16∶1和18∶3n-3，其余含量相對較低。不過，該菌株不含水產(chǎn)動物生長所必需的多不飽和脂肪酸EPA(20∶5n-3)和DHA(22∶6n-3)，與前人研究結(jié)果一致。因此，在水產(chǎn)動物幼體培育中，建議使用海洋酵母餌料時可添加一定比例的藻類使營養(yǎng)上得到互補。

表3 梅奇酵母C14菌株的脂肪酸組成和含量(%)

三、結(jié)論

梅奇酵母C14菌株具有蛋白和糖分含量較高，必需氨基酸組成豐富等優(yōu)點，表明該菌株具有用作水產(chǎn)動物餌料的營養(yǎng)價值。但是，該菌株其缺乏多不飽和脂肪酸EPA和DHA，作為幼體餌料添加劑時，需要添加富含這兩種多不飽和脂肪酸的藻類作為補充。

作者單位：遼寧省大連匯新鈦設(shè)備開發(fā)有限公司