加減葛花解酲湯預(yù)處理對(duì)急性酒精中毒小鼠肝臟保護(hù)作用及機(jī)制

軒云，儲(chǔ)全根，儲(chǔ)俊，程婕，劉小雙，蔡正銀

安徽中醫(yī)藥大學(xué)，合肥230038

急性酒精中毒是由短時(shí)間內(nèi)攝入大量乙醇導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟、心腦血管等出現(xiàn)損傷的病理狀態(tài)[1]。大量飲酒后，乙醇在體內(nèi)可直接擴(kuò)散進(jìn)入血液，隨血液流向各個(gè)組織器官，在身體和大腦中積聚，在最初的興奮后引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制，導(dǎo)致一系列生理上的變化和不適。乙醇進(jìn)入人體后，主要由胃和腸道等消化系統(tǒng)吸收，再經(jīng)血液循環(huán)至肝臟代謝，除少部分隨呼吸、汗液、經(jīng)腎臟代謝為尿的形式排出體外，其余90%～98%的乙醇在肝臟代謝[2]，因此肝臟是乙醇損傷最嚴(yán)重的器官。葛花解酲湯是中醫(yī)解酒名方，具有消酒祛濕、理氣健脾的功效。我們的前期研究顯示，葛花解酲湯能夠降低急性酒精中毒動(dòng)物模型血液中的乙醇含量，并提高乙醇脫氫酶(ADH)活性[3]。2018～2019年，我們?cè)诟鸹ń怩幕A(chǔ)上進(jìn)行加減，組成加減葛花解酲湯，觀察其對(duì)急性酒精中毒小鼠肝組織ADH、乙醛脫氫酶(ALDH)及肝功能ALT、AST活性的影響，探討加減葛花解酲湯對(duì)急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)健康昆明種雄性小鼠40只，體質(zhì)量18～22 g，由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物自由攝食和飲水，以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后進(jìn)行試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)前禁食禁水12 h。本實(shí)驗(yàn)遵守安徽中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的倫理要求。

1.1.2 加減葛花解酲湯的制備 中藥材葛花、枳椇子、縮砂仁、白豆蔻、白茯苓、橘皮、澤瀉、白術(shù)、人參、干姜、木香、青皮購(gòu)自安徽中醫(yī)藥大學(xué)國(guó)醫(yī)堂門診部。加入10倍量清水浸泡2 h，煮沸1 h，濾過；藥渣再用8倍量清水煮沸1 h，濾過。合并二次濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液濃縮成含生藥1 g/mL的藥液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 試劑與儀器 ADH、ALDH、ALT、AST測(cè)試盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。無水乙醇購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。主要儀器有臺(tái)式高速離心機(jī)、電熱恒溫水槽、高壓蒸汽滅器、電子天平、酶標(biāo)儀。

1.2 模型制備與給藥 將小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組及加減葛花解酲湯低、中、高劑量組，每組各8只。按照文獻(xiàn)[4]方法制作急性酒精中毒模型，模型組給予56度紅星二鍋頭白酒(北京紅星股份有限公司)16 mL/kg灌胃；加減葛花解酲湯低、中、高劑量組先給予0.5、1、2 g/mL加減葛花解酲湯20 mL/kg灌胃，30 min后再給予16 mL/kg白酒灌胃；對(duì)照組給予等量蒸餾水灌胃。

1.3 血液中乙醇含量檢測(cè) 灌胃0.5 h后，摘除小鼠的眼球取血，分離血清，采用氣相色譜法測(cè)定乙醇含量。

1.4 肝組織中ADH、ALDH、ALT、AST活性檢測(cè) 灌胃0.5 h后，每組取8只小鼠，麻醉，取肝組織，冰上勻漿，離心，取上清液，按照檢測(cè)試劑盒的說明測(cè)定乙醇代謝相關(guān)酶ADH、ALDH和肝功能指標(biāo)ALT、AST活性。ADH活性測(cè)定采用紫外比色法，ALDH活性測(cè)定采用比色法，ALT、AST活性測(cè)定采用賴氏法。

2 結(jié)果

2.1 各組血液中乙醇含量比較 模型組及加減葛花解酲湯低、中、高劑量組血液中乙醇含量分別為(4.33±2.10)、(2.66±1.13)、(2.03±0.65)、(1.87±0.61)μL/mL。與模型組比較，加減葛花解酲湯低、中、高劑量組血液中乙醇含量均下降(P均<0.05)，且高劑量組低于中、低劑量組，中劑量組低于低劑量組(P均<0.05)。

2.2 各組肝組織ADH、ALDH、ALT、AST活性比較 與對(duì)照組比較，模型組ADH、ALDH、ALT、AST活性均降低(P均<0.05)。與模型組比較，加減葛花解酲湯低、中劑量組ADH活性升高(P均<0.05)，高劑量組ADH活性無明顯變化(P>0.05)；低、中、高劑量組ALDH、ALT、AST活性均升高(P<0.05或<0.01)。見表1。

3 討論

中醫(yī)對(duì)于急性酒精中毒的命名較多，《黃帝內(nèi)經(jīng)·靈樞》提出的“酒?！?、《金匱要略》中提出的“酒疸”、《華佗神醫(yī)秘傳》中提出的“酒毒”均屬于急性酒精中毒。其病機(jī)為酒濁擾心、引動(dòng)肝風(fēng)，治則為解酒毒、清熱祛濕[5]。葛花解酲湯是解酒名方，出自金元醫(yī)家李杲的《脾胃論》。本研究所用的加減葛花解酲湯，是在葛花解酲湯的基礎(chǔ)上，去除不屬于藥食兩用的中藥神曲、豬苓，加上屬于藥食兩用并具有“敗酒味”作用的枳椇子而成。以葛花和枳椇子為君藥，葛花甘辛涼，使?jié)駨募”矶?，枳椇子甘酸化陰，養(yǎng)陰生津，解酒毒；縮砂仁、白豆蔻醒脾和中，開胃消食；白茯苓淡滲利濕，驅(qū)酒濕之邪從小便出；干姜溫中和胃；人參、白術(shù)健脾燥濕；澤瀉淡滲利水滲濕；木香、青皮理氣化滯；橘皮調(diào)和諸藥藥性。諸藥合用，共奏化酒祛濕，健脾和胃之效。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，加減葛花解酲湯低、中、高劑量組血液乙醇含量均明顯降低，以高劑量組效果最為明顯。這說明加減葛花解酲湯預(yù)處理能夠降低急性酒精中毒小鼠血液中的乙醇含量，具有解酒作用。

表1 各組肝組織ADH、ALDH、ALT、AST活性比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

乙醇代謝的主要途徑是通過脫氫酶系統(tǒng)，即ADH和ALDH[6]。ADH使乙醇氧化成乙醛，后者在ALDH作用下變成乙酸，然后乙酸進(jìn)入血循環(huán)，代謝為二氧化碳、水和能量[7]。由于ADH活性的變化可影響血液中乙醇含量，當(dāng)組織器官中的ADH活性下降或受到抑制時(shí)，組織對(duì)乙醇的攝取率提高，從而加重乙醇對(duì)腦、肝臟等器官的危害[8，9]。本研究結(jié)果顯示，模型組肝組織中ADH、ALDH活性均較對(duì)照組降低，表明急性酒精中毒可以抑制小鼠肝組織中ADH、ALDH的活性，從而影響乙醇的代謝。與模型組比較，加減葛花解酲湯低、中劑量組ADH活性升高，不同劑量組ALDH活性均升高，表明加減葛花解酲湯能明顯提高急性酒精中毒小鼠肝組織中ADH、ALDH活性，促進(jìn)乙醇代謝。

正常肝內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶含量約為血中的100倍，當(dāng)肝臟實(shí)質(zhì)性損害時(shí)，只要有1%的肝細(xì)胞壞死，就可使轉(zhuǎn)氨酶的血清活性增加1倍，肝細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)氨酶也可以順濃度差而釋放入血[10]。因此轉(zhuǎn)氨酶含量是肝細(xì)胞損害的敏感標(biāo)志，也是乙醇所致肝損傷最敏感的指標(biāo)之一。當(dāng)急性酒精中毒造成肝損傷時(shí)，ALT、AST活性升高，使細(xì)胞膜的通透性增加，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的ALT、AST向血清中釋放，從而造成血中ALT、AST含量升高。本研究結(jié)果表明，模型組ALT、AST活性較對(duì)照組降低，表明肝細(xì)胞受到損傷，ALT、AST從肝細(xì)胞中釋放入血，肝組織中的ALT、AST含量相對(duì)減少；與模型組比較，加減葛花解酲湯低、中、高劑量組肝組織中ALT、AST活性均明顯升高，表明加減葛花解酲湯預(yù)處理可提高急性酒精中毒小鼠肝組織中ALT、AST活性，減輕肝損傷程度。其機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)ALT和AST在細(xì)胞膜上的運(yùn)輸通道，改善細(xì)胞膜通透性，抑制細(xì)胞內(nèi)的ALT、AST向血清釋放。另有研究認(rèn)為，攝入體內(nèi)的乙醇大部分是在肝臟經(jīng)ADH和ALDH的酶活分解后，分別成為乙醛和乙酸，而攝入過量乙醇會(huì)抑制體內(nèi)乙醇分解反應(yīng)和氨基酸轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)，影響氨基酸代謝中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)氨酶ALT、AST活性[11，12]。

綜上所述，加減葛花解酲湯能夠降低急性酒精中毒小鼠血液中的乙醇含量，具有解酒作用；其機(jī)制可能是通過提高肝臟中乙醇代謝通路的ADH、ALDH活性促進(jìn)乙醇代謝，從而減輕肝損傷，具有較好的肝臟保護(hù)作用。