老年胃癌組織MMP-9、p53、VEGF蛋白的表達及其臨床意義

徐 鋮 羅華榮 甘梅富

(臺州恩澤醫(yī)療中心(集團)恩澤醫(yī)院病理科，浙江 臺州 318000)

老年胃癌組織MMP-9、p53、VEGF蛋白的表達及其臨床意義

徐 鋮 羅華榮 甘梅富

(臺州恩澤醫(yī)療中心(集團)恩澤醫(yī)院病理科，浙江 臺州 318000)

目的 探討老年胃癌組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9、p53及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)蛋白表達及其臨床意義。方法 選擇胃癌根治術(shù)后存檔病例標本78例(觀察組)，取癌旁正常組織為對照組。采用免疫組化法檢測MMP-9、p53、VEGF蛋白表達情況。比較兩組MMP-9、p53、VEGF陽性表達率，胃癌組織MMP-9、p53、VEGF表達與胃癌臨床病理學關(guān)系，MMP-9與p53、MMP-9與VEGF、p53與VEGF在胃癌組織中表達的關(guān)系。結(jié)果 觀察組MMP-9、p53、VEGF陽性表達率高于對照組(P<0.05)；MMP-9、p53、VEGF表達與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度明顯相關(guān)(P<0.05)；而與無性別明顯相關(guān)性(P>0.05)；MMP-9與p53、MMP-9與VEGF、p53與VEGF在胃癌中表達呈正相關(guān)。結(jié)論 老年胃癌組織中MMP-9、p53、VEGF蛋白呈高表達，且MMP-9、p53、VEGF蛋白高表達與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

胃癌；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；p53；血管內(nèi)皮生長因子

胃癌是最常見的一種消化道惡性腫瘤〔1，2〕。目前雖然胃癌的具體發(fā)病機制尚未完全闡明，但報道顯示胃癌發(fā)生、發(fā)展與腫瘤細胞凋亡失衡相關(guān)〔3〕。因此探討胃癌發(fā)生、發(fā)展中細胞凋亡的作用，成為胃癌臨床研究與基礎(chǔ)的熱點和重點之一。有關(guān)胃癌細胞凋亡蛋白調(diào)控機制近年來取得了一定的進展。研究顯示多種蛋白參與胃癌細胞的凋亡過程，發(fā)現(xiàn)其發(fā)生、發(fā)展與基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9、p53的突變及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)密切相關(guān)〔4～6〕。本文探討老年胃癌組織MMP-9、p53、VEGF蛋白的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇胃癌根治術(shù)存檔病例標本78例(觀察組)，取癌旁正常組織為對照組。入組標準：①術(shù)前均未接受過放療、化療及免疫治療者；②年齡70～90歲；③簽訂知情同意思者。排除標準：①合并其他惡性腫瘤者；②合并肝腎功能嚴重異常者。入組的78例患者中，男45例，女33例；平均年齡(79.84±3.24)歲；分化程度：中高分化34例，低分化44例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者49例。

1.2 主要試劑和儀器 主要試劑：鼠抗人MMP-9、鼠抗人P53、鼠抗人VEGF單克隆抗體(上海萬疆生物技術(shù)有限公司)，免疫組化SP試劑盒(福州邁新生物公司)，DAB顯色試劑盒(北京中杉生物公司)。主要儀器：RM2015 病理切片機(德國Leica公司)，彩色病理圖像分析系統(tǒng)(日本OLYMPUS公司)，EGI150C組織包埋機(德國Leica公司)。

1.3 免疫組化法檢測MMP-9、p53、VEGF蛋白表達 所有手術(shù)切除標本，以4%甲醛固定，常規(guī)石蠟切片，石蠟包埋，以梯度乙醇水化處理，PBS洗滌3次，于高溫高壓條件下修復3 min，再以3%過氧化氫溶液孵育10 min，PBS洗滌3次，滴加MMP-9、p53、VEGF一抗，室溫下孵育120 min，滴加二抗，室溫下孵育60 min，采用DAB顯色，蘇木精復染，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。

1.4 結(jié)果判定標準 由2位病理科醫(yī)師獨立觀察每張切片，以顯微鏡200倍下隨機選取5個視野，計數(shù)100個細胞，陽性細胞為細胞核出現(xiàn)黃色或者棕黃色，以染色強度與陽性細胞率半定量積分評估。染色強度評定：無色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分；陽性細胞率：0～10%計0分，11%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，76%～100%計4分。染色強度積分+陽性細胞率積分：6～7分為強陽性()，4～5分為中度陽性()，2～3分為弱陽性(+)，0～1分為陰性(-)。

1.5 統(tǒng)計學方法 用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件進行t及χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 兩組胃黏膜組織MMP-9、p53、VEGF蛋白陽性表達比較 觀察組MMP-9〔57例(73.08%)〕、p53〔51例(65.38%)〕、VEGF〔50例(64.10%)〕陽性表達率高于對照組〔21例(26.92%)、23例(29.49%)、18例(23.08%)，χ2=33.230 8,χ2=20.155 6,χ2=26.695 2,均P<0.05〕。

2.2 觀察組MMP-9、p53及VEGF陽性表達與其臨床病理學特征的關(guān)系 MMP-9陽性表達與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度明顯相關(guān)(P<0.05)；而與性別無明顯相關(guān)性(P>0.05)。p53表達與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度明顯相關(guān)性(P<0.05)；而與性別無相關(guān)性(P>0.05)。VEGF表達與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度明顯相關(guān)(P<0.05)；而與性別無明顯相關(guān)性(P>0.05)。見表1。

2.3 觀察組MMP-9、p53及VEGF蛋白陽性表達的相關(guān)性 MMP-9與p53在胃癌組織陽性表達呈正相關(guān)(r=0.451，P<0.05)。MMP-9與VEGF在胃癌組織陽性表達呈正相關(guān)(r=0.315，P<0.05)。p53與VEGF在胃癌組織陽性表達呈正相關(guān)(r=0.379，P<0.05)。

表1 胃癌組織MMP-9、p53及VEGF陽性表達與臨床病理學特征的相關(guān)性(n,n=78)

3 討 論

胃癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移和侵襲是多基因、多因素、多階段共同參與的一個復雜過程，涉及多種抑癌基因的失活和癌基因的激活〔7～9〕。MMPs是與侵襲和轉(zhuǎn)移關(guān)系相關(guān)的一類蛋白水解酶，且為腫瘤細胞穿透基底膜所必需的一種降解酶，能夠降解細胞基底膜和外基質(zhì)，促進腫瘤血管生成〔10〕。MMPs在腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移中作用較為復雜，在以下幾個環(huán)節(jié)中發(fā)揮作用：①腫瘤血管生成：在細胞外基質(zhì)降解時，MMPs為生長新生血管提供空間；②腫瘤的發(fā)生過程：MMPs可分解健康組織的基質(zhì)結(jié)構(gòu)，從而使腫瘤增生；③腫瘤轉(zhuǎn)移過程：MMPs可松解周圍正常組織，有利于癌細胞的轉(zhuǎn)移，且可組織自我分解促使MMPs釋放，引起腫瘤增生。其中MMP-9是MMPs家族中降解細胞外基質(zhì)的關(guān)鍵酶之一，又為Ⅳ型膠原酶。MMP-9能夠上調(diào)腫瘤血管化的程度，抑制MMP-9活性可抑制腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移〔11〕。p53蛋白是胃癌中最常突變的一種抑癌蛋白，人類p53蛋白由11個外顯子和10個內(nèi)含子組成，正常的p53蛋白在細胞中易水解，且含量低，而采用免疫組化法很難檢測到正常p53蛋白，由于突變型p53構(gòu)象改變，穩(wěn)定性增強，故而目前免疫組化法檢測到的通常為突變型p53蛋白〔12〕。p53基因突變率有萎縮性胃炎病史的胃癌明顯高于無萎縮性胃炎病史者〔13〕。VEGF是一種血管通透因子，可在體內(nèi)誘導血管新生。VEGF在腫瘤細胞中功能分為免疫逃逸與信號通路兩個方面：①VEGF可干擾抑制樹突細胞活性，且能夠阻斷T細胞和B細胞的抗原呈遞，以及妨礙機體正常的監(jiān)察作用，從而致使腫瘤產(chǎn)生免疫逃逸〔14〕；②VEGF激增，與受體結(jié)合，從而產(chǎn)生一系列細胞信號級聯(lián)反應，從而使得新血管生長分化，進一步促進腫瘤生長。胃癌具有高復發(fā)、高轉(zhuǎn)移及高侵襲等特點，胃癌中血管生成明顯增加，認為其原因可能與腫瘤惡性生物學行為關(guān)系緊密，故而認為，在胃癌生成和轉(zhuǎn)移中VEGF具有重要作用〔15〕。本研究表明老年胃癌組織中MMP-9、p53、VEGF蛋白高表達與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、分化程度明顯相關(guān)，且MMP-9、p53、VEGF表達呈正相關(guān)。

1 Kosaka T，Endo M，Toya Y，etal.Long-term outcomes of endoscopic submucosal dissection for early gastric cancer:a single-center retrospective study〔J〕.Digest Endosc Off J Japan Gastroenterol Endosc Soc，2014；26(2):183-91.

2 陳美霓，郭 巍，郭 浩，等.胃癌及癌前病變中COX-2和VEGF-C蛋白表達及COX-2與H.pylori的相關(guān)性研究〔J〕.河北醫(yī)藥，2015；37(18):2735-7.

3 Liu L，Ma XL，Xiao ZL，etal.Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in resected gastric cancer〔J〕.Asian Pacific J Cancer Prevent，2012；13(7):3089-97.

4 肖 祥，何艷霞.HPSE、VEGF蛋白在胃癌中的表達及其與胃癌患者生存時間的相關(guān)性〔J〕.臨床軍醫(yī)雜志，2013；41(9):902-3.

5 王麗萍，李洪亮，劉愛東，等.PPARγ和MMP-9在胃癌中的表達及臨床意義〔J〕.山東醫(yī)藥，2010；50(32):50-2.

6 李冬霞，李巧香，馮艷玲.KAI1/CD82和MMP-9蛋白表達與胃癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.實用醫(yī)學雜志，2010；26(18):3337-9.

7 Liu G，Jiang C，Li D，etal.MiRNA-34a inhibits EGFR-signaling-dependent MMP7 activation in gastric cancer〔J〕.Tumor Biol，2014；35(10):9801-6.

8 范 妤，宋 強.HIF-1α和VEGF蛋白的表達與胃癌浸潤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究〔J〕.甘肅醫(yī)藥，2012；31(12):887-90.

9 楊 紅.胃癌組織中P16蛋白和VEGF蛋白的表達及臨床意義〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)生，2010；48(11):88-9.

10 趙海濱，張偉杰，周志華，等.MMP-7、MMP-9、VEGF-C、VEGF-D在胃癌中的表達及其臨床意義〔J〕.東南國防醫(yī)藥，2010；12(3):197-9.

11 朱玉紅，張樹華，呂增華.胃癌組織中COX-2、CD44v6和MMP-9蛋白表達及意義〔J〕.山東醫(yī)藥，2009；49(7):57-9.

12 蒙健軍，藍 東，韋敏怡.P73、P53蛋白在胃癌中的表達及意義〔J〕.廣西醫(yī)學，2010；32(5):510-2.

13 胡海霞，黃 勇.Ki-67、p53蛋白在胃癌組織中的表達及臨床意義〔J〕.解放軍醫(yī)藥雜志，2012；24(4):9-11.

14 張岱州，楊麟珂，曹 沖.NF-κB、VEGF蛋白在胃癌組織中的表達及臨床意義〔J〕.山東醫(yī)藥，2010；50(35):35-6.

15 張晶晶，范開席.ARTN、VEGF蛋白在胃癌組織中的表達及意義〔J〕.山東醫(yī)藥，2012；52(45):1-3.

〔2016-01-17修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

徐 鋮(1982-)，男，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤病理學診斷研究。

R735.3

A

1005-9202(2017)10-2470-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.10.055